一起豬偽狂犬病的診斷與分析

熊杰，蒲楊柳，張昕彤，陳富忠，潘媛晴，胡生富，魏春梅

(1.攀枝花市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，四川 攀枝花 617000；2.武陟縣農(nóng)業(yè)農(nóng)村局，河南 武陟 454950)

豬偽狂犬病(Pseudorabies，PR)是偽狂犬病毒(Pseudorabies virus，PRV)所引起的豬的急性、烈性和高度接觸性傳染病。該病能造成發(fā)病公豬出現(xiàn)睪丸炎；妊娠母豬流產(chǎn)，產(chǎn)死胎、弱胎和木乃伊胎；育肥豬呼吸困難、生長(zhǎng)停滯；新生仔豬腹瀉、嘔吐和神經(jīng)癥狀并大量死亡[1-3]。PRV屬于皰疹病毒(Herpesviridae)、甲型皰疹病毒亞科的豬皰疹病毒Ⅰ型(Suid Herpesviridae Ⅰ)，是雙鏈DNA病毒[4，5]。20世紀(jì)60—70年代出現(xiàn)強(qiáng)毒株并在全球散播[6]，2011年末，我國(guó)北方多個(gè)省份出現(xiàn)了偽狂犬病暴發(fā)，豬偽狂犬病病毒變異毒株開始在我國(guó)流行[7]。本文就2018年6月某養(yǎng)殖場(chǎng)新生仔豬發(fā)生偽狂犬病的發(fā)病情況、臨床癥狀、病理變化、實(shí)驗(yàn)室診斷提出思考和分析。

1 發(fā)病情況及臨床癥狀

攀枝花市某養(yǎng)豬場(chǎng)，飼養(yǎng)仔豬140余頭，在獸醫(yī)指導(dǎo)下已注射豬偽狂犬弱毒疫苗。2018年6月初，陸續(xù)有新生仔豬出現(xiàn)精神不振，體溫升高，皮膚紫斑，部分出現(xiàn)驚叫、轉(zhuǎn)圈等神經(jīng)癥狀。發(fā)病后，對(duì)全場(chǎng)豬群進(jìn)行抗生素和其他藥物治療，效果不佳，幾天內(nèi)仔豬死亡130余頭。

2 剖檢變化

對(duì)瀕臨死亡的仔豬進(jìn)行解剖，發(fā)現(xiàn)心臟有少量出血點(diǎn)、瘀血，腎臟瘀血，肝臟瘀血、壞死，胃積奶塊，腦、淋巴結(jié)、腸、膀胱、脾、肺等器官無(wú)實(shí)質(zhì)性病變。

經(jīng)過對(duì)臨床癥狀和剖檢變化分析，初步懷疑為PRV感染，現(xiàn)場(chǎng)采集心、肝、脾、肺、腎、淋巴結(jié)、腦和血清，進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室熒光定量PCR檢測(cè)。

3 實(shí)驗(yàn)室診斷

將現(xiàn)場(chǎng)采集的心、肝、脾、肺、腎等組織用組織研磨儀(寶予德，Easy Extract S型)進(jìn)行組織勻漿后，8 000 r/min離心2 min，取上清液，在組織上清液和血清中加入消化液和蛋白酶K，56 ℃水浴消化1 h后采用吸附柱法提取DNA。將提取的DNA按照北京世紀(jì)元亨豬偽狂犬病毒(gE基因)實(shí)時(shí)熒光PCR檢測(cè)試劑盒(生產(chǎn)批號(hào)：PRV(gE)20180208P)說(shuō)明書進(jìn)行PRV-gE檢測(cè)。

結(jié)果：陽(yáng)性對(duì)照Ct值≤30并出現(xiàn)特異性擴(kuò)增曲線，陰性對(duì)照無(wú)CT值并且無(wú)特異性擴(kuò)增曲線，實(shí)驗(yàn)結(jié)果成立；所有被檢樣品CT值≤30并出現(xiàn)特異性擴(kuò)增曲線，表明所有樣品PRV-gE熒光PCR檢測(cè)結(jié)果為PRV-gE陽(yáng)性(表1、圖1)。

表1 陰、陽(yáng)性對(duì)照及樣品

圖1 實(shí)時(shí)熒光定量PCR擴(kuò)增曲線

4 討論

楊漢春等對(duì)2018年全國(guó)420個(gè)豬場(chǎng)21 727份血清樣本進(jìn)行偽狂犬病病毒野毒感染gE抗體檢測(cè)，結(jié)果顯示gE抗體陽(yáng)性豬場(chǎng)占78.33%，采用PCR方法對(duì)495份臨床樣本檢測(cè)，結(jié)果表明偽狂犬病病毒陽(yáng)性檢出率為8.89%[8]；王賽賽牧通網(wǎng)數(shù)據(jù)顯示，2019年檢測(cè)了全國(guó)94個(gè)豬場(chǎng)共3 892份豬血清樣品的豬偽狂犬病gE抗體，樣品陽(yáng)性率為26.4%[9]，表明近年我國(guó)部分豬場(chǎng)偽狂犬病病毒感染仍然比較嚴(yán)重。為了有效防控豬偽狂犬病，降低養(yǎng)殖場(chǎng)(戶)的損失，基層獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室必須快速、準(zhǔn)確地進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室診斷。目前實(shí)驗(yàn)室診斷方法主要包括病毒分離鑒定、ELISA、核酸探針技術(shù)、PCR和實(shí)時(shí)熒光定量PCR等方法。由于實(shí)時(shí)熒光定量PCR方法用時(shí)短、特異性強(qiáng)、靈敏度高，是目前普遍采用的快速診斷方法?，F(xiàn)在有多種類型的PRV檢測(cè)試劑盒上市，其中有可同時(shí)完成豬圓環(huán)病毒、豬偽狂犬病毒等多種常見豬病病原檢測(cè)的多重?zé)晒舛縍CR檢測(cè)試劑盒，能極大縮減檢測(cè)時(shí)間和增加檢測(cè)范圍，有效地提高了實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)效率。畜牧獸醫(yī)主管部門應(yīng)高度重視基層獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室在動(dòng)物疫病防控工作中的技術(shù)支撐作用，應(yīng)加大獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室的建設(shè)力度，提高實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)人員專業(yè)技術(shù)水平，進(jìn)一步提升獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室在動(dòng)物疫病防控工作中的預(yù)警預(yù)報(bào)能力。