蜜炙桑白皮對(duì)經(jīng)方瀉白散止咳平喘作用的影響

蜜炙桑白皮對(duì)經(jīng)方瀉白散止咳平喘作用的影響

徐霞1，隋在云2，王愛潔2

(1.山東省胸科醫(yī)院，山東 濟(jì)南 250014；2.山東省中醫(yī)藥研究院，山東 濟(jì)南 250014)

摘要：目的蜜炙前后桑白皮對(duì)經(jīng)方瀉白散止咳平喘作用的影響。方法KM小鼠隨機(jī)分為模型對(duì)照組、可待因(4.68 mg·kg-1)組、瀉白散生品和蜜炙0.57、1.14、2.28、4.55、9.10、18.20 g·kg-1劑量組,連續(xù)10 d灌胃給藥，采用濃氨水引咳實(shí)驗(yàn)檢測(cè)引咳潛伏期、2 min內(nèi)咳嗽次數(shù)；Wistar大鼠隨機(jī)分為空白對(duì)照組、模型對(duì)照組、地塞米松(0.000 4 g·kg-1)組、瀉白散生品和蜜炙3.15、9.45 g·kg-1劑量組，造模大鼠于第1、7天腹腔注射卵蛋白混懸液1 mL致敏。第15天起，每天激發(fā)造模，共5 d。第20天，記錄大鼠10 min內(nèi)出現(xiàn)Ⅱ級(jí)哮喘的潛伏期，采用酶聯(lián)免疫吸附法測(cè)定血清中脂質(zhì)過氧化物(LPO)、白細(xì)胞介素-4(IL-4)、干擾素-γ(IFN-γ)的含量。結(jié)果瀉白散含生品桑白皮4.55、9.10、18.20 g·kg-1劑量組、含蜜炙桑白皮各劑量組均可顯著延長(zhǎng)咳嗽潛伏期，減少咳嗽次數(shù)。瀉白散生品、蜜炙高劑量組均顯著降低哮喘大鼠血清脂質(zhì)過氧化物(LPO)、白細(xì)胞介素-4(IL-4)含量，升高了血清干擾素-γ(IFN-γ)。結(jié)論蜜炙組較生品組作用效果更好。提示清除細(xì)胞毒性過氧化物，調(diào)節(jié)免疫，增強(qiáng)抗病毒能力可能是瀉白散平喘作用的藥理學(xué)機(jī)理。

關(guān)鍵詞：桑白皮；瀉白散；炮制；止咳平喘

基金項(xiàng)目：山東省中醫(yī)藥科技發(fā)展計(jì)劃項(xiàng)目(No.2013-223)

作者簡(jiǎn)介：徐霞，女，副主任藥師，研究方向：中藥制劑及鑒定，E-mail:15020017677@163.com

通訊作者:隋在云，女，碩士研究生，研究員，研究方向：中藥藥理毒理的物質(zhì)基礎(chǔ)研究，Tel:13793131156，E-mail：zy_505@163.com

中圖分類號(hào)：文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

Effect ofCortexMoriwith hwey processing on relieving cough and asthma activities

of classical prescriptions Xiebaisan

XUXia1,SUIZai-yun2,WANGAi-jie2

(1.ShandongChestHospital,Jinan250014,China；2.ShandongAcademy

ofChineseMedicine,Jinan250014,China)

Abstract：ObjectiveTo investigate the relieving cough and asthma activities of Cortex Mori before and after hwey processing.MethodsKM mice were randomly divided into model control group,positive control group,codeine(4.68 mg·kg-1)group,the crude and hwey processed Cortex Mori 0.39,0.78,1.56,3.12,6.24 g·kg-1group,giving drugs 10 days.The model of cough induced by concentrated ammonia water was used to observe the cough latent phase and times in 2 min.Wistar rats were randomly divided into blank group,model control group,dexamethasone(0.000 4 g·kg-1)group,the crude and hwey processed Cortex Mori 3.15，9.45 g·kg-1 group.Model rats were allergized by injecting egg albumin for intraperitoneal injection at 1st and 7th day.From 15th day,to stimulate making model,all 5 days.The incubation periods of Ⅱgrade asthmatic within 10 min in rats were recorded.The contents of LPO,IL-4 and IFN-γ in serum were detected by enzyme linked immunosorbent assay.ResultsCompared with the model group,the latent phase was significantly longer and the cough times per two minutes was significantly reduced in Xiebaisan with crude Cortex Mori 4.55,9.10,18.20 g·kg-1 and hwey processed Cortex Mori groups.The contents of LPO,IL-4 in serum of crude Xiebaisan and hwey processed Cortex Mori high dose groups were significantly reduced,and the contents of IFN-γ were increased.ConclusionThe results of hwey processed groups were better than crude groups.The results prompted that cleaning cytotoxicity peroxides,adjusting immunization and reinforcing anti-virus capabilities may be the pharmacology mechanism of relieving cough and asthma activities.

Key words:CortexMori;Xiebaisan;Processing;Relieving cough and asthma

瀉白散出自《小兒藥證直訣》，由地骨皮、桑白皮、甘草三味藥組成，具有清瀉肺熱，止咳平喘之功，主治以咳嗽、甚則氣急欲喘、舌紅苔黃等為表現(xiàn)的肺有伏火之咳喘，現(xiàn)代主要用于支氣管炎、肺炎初期、百日咳等證屬肺有伏火者。現(xiàn)代研究也表明其有解熱、抗炎、鎮(zhèn)咳等作用。方中桑白皮為桑科植物桑MorusalbaL.的干燥根皮[1，2]。蜜炙桑白皮是桑白皮的蜜炙加工炮制品，方法是取煉蜜，加適量開水稀釋，淋入桑白皮絲中拌勻，悶潤(rùn)，置炒制容器內(nèi)，用文火加熱，炒制深黃色、不黏手，取出晾涼。每100 kg桑白皮絲，用煉蜜25 kg[3]。兩者均是臨床常用中藥且應(yīng)用廣泛，生品長(zhǎng)于利尿，蜜炙之后止咳平喘作用增強(qiáng)之說也是從古流傳至今，但其理論依據(jù)還未十分清晰，蜜炙前后的桑白皮納入成方中應(yīng)用的藥效比較也是鮮有研究。本文對(duì)經(jīng)方瀉白散中分別加入生品桑白皮或蜜炙桑白皮后的止咳化痰作用進(jìn)行了量效研究,并進(jìn)行比較分析,以期為桑白皮和瀉白散的臨床應(yīng)用提供科學(xué)的理論依據(jù)。

1材料與儀器

1.1藥物與試劑瀉白散生品(含生品桑白皮)、瀉白散蜜炙(含蜜炙桑白皮)均由山東省中醫(yī)藥研究院中藥炮制室提供。原藥濃度：1 g·mL-1(桑白皮臨床用量按成人12 g·d-1計(jì)換算為小鼠的等效劑量)。0.9%氯化鈉注射液(山東齊都藥業(yè)有限公司，批號(hào)：1A11102903)；氨水(萊陽市康德化工有限公司，批號(hào)：20080620)；復(fù)方磷酸可待因溶液(南昌立健藥業(yè)有限公司，批號(hào)：K1111026)；卵清白蛋白(Sigma公司進(jìn)口分裝，批號(hào)：A5253)；地塞米松(辰欣藥業(yè)股份有限公司，批號(hào)：1205166412)；大鼠脂質(zhì)過氧化物(LPO)、白細(xì)胞介素-4(IL-4)、干擾素-γ(IFN-γ)ELISA試劑盒(IBL公司，批號(hào)：HG35084、HG01036、HG01683)。

1.2動(dòng)物昆明種小鼠，SPF級(jí)，雌雄各半；Wistar大鼠70只，150～200 g，雄性，均購于山東大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，許可證號(hào)：SCXK(魯)20090001。

1.3儀器GB303電子天平(Mettler-Totado公司)；UV-2100紫外分光光度計(jì)(上海合利儀器有限公司)；YLS-8A多功能誘咳引喘儀(山東省醫(yī)學(xué)科學(xué)院設(shè)備站)；xMark 微孔板分光光度計(jì)(美國(guó)Bio-Rad公司)。

2實(shí)驗(yàn)方法與結(jié)果

2.1炮制對(duì)經(jīng)方瀉白散止咳作用的影響

2.1.1動(dòng)物分組與給藥昆明小鼠140只，SPF級(jí)，體重18～22 g，雌雄各半,隨機(jī)分為模型對(duì)照組、可待因(4.68 mg·kg-1)組(在前期預(yù)實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)上，為了探討桑白皮止咳作用的最低起效量和量效關(guān)系，以1為等效劑量，按倍比遞減遞增關(guān)系設(shè)計(jì)了6個(gè)劑量)、瀉白散生品1/8、1/4、1/2、1、2、4劑量(0.57、1.14、2.28、4.55、9.10、18.20 g·kg-1)組、瀉白散蜜炙1/8、1/4、1/2、1、2、4劑量(0.57、1.14、2.28、4.55、9.10、18.20 g·kg-1)組，共14組,每組10只。各給藥組灌胃給予受試樣品，給藥體積為20 mL·kg-1，模型對(duì)照組口服同體積生理鹽水，每天1次,連續(xù)10 d。

2.1.2實(shí)驗(yàn)方法末次給藥1 h后，將小鼠按組交替逐只放入YLS-8A 多功能誘咳引喘儀的動(dòng)物箱內(nèi)，噴入25%氨水，激發(fā)小鼠咳嗽，以小鼠同時(shí)出現(xiàn)腹肌收縮、縮胸、張大嘴(咳聲有無均可)作為咳嗽標(biāo)準(zhǔn)，記錄引咳潛伏期(噴霧開始至出現(xiàn)咳嗽的時(shí)間)和2 min內(nèi)小鼠咳嗽的次數(shù)[4]。

2.1.4實(shí)驗(yàn)結(jié)果結(jié)果見表1和圖1、2。

表1　炮制對(duì)經(jīng)方瀉白散止咳作用的影響 ± s， n=10)

注：與模型對(duì)照組比較，*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001

圖1　引咳潛伏期

圖2　2 min內(nèi)小鼠咳嗽次數(shù)

表1結(jié)果顯示，與模型對(duì)照組比較，陽性藥(可待因)組可以明顯延長(zhǎng)濃氨水致咳小鼠的咳嗽潛伏期，并明顯減少咳嗽次數(shù)。瀉白散含生品桑白皮1、2、4倍劑量，含蜜炙桑白皮各劑量組都可以延長(zhǎng)咳嗽潛伏期，減少咳嗽小鼠的咳嗽次數(shù)，與模型對(duì)照組相比，結(jié)果有顯著性差異。圖1、2表明用含桑白皮蜜炙品的瀉白散止咳藥效強(qiáng)于用生品的。實(shí)驗(yàn)表明瀉白散含生品、蜜炙桑白皮都有較為顯著的止咳作用，且蜜炙效果更好。

2.2炮制對(duì)經(jīng)方瀉白散平喘作用的影響

2.2.1動(dòng)物分組與給藥將70只大鼠隨機(jī)分為空白對(duì)照組、模型對(duì)照組、陽性對(duì)照(地塞米松0.000 4 g·kg-1)組、瀉白散生品(3.15 g·kg-1)組、瀉白散生品(9.45 g·kg-1)組、瀉白散蜜炙(3.15 g·kg-1)組、瀉白散蜜炙(9.45 g·kg-1)，共7組,每組10只。各給藥組灌胃給予受試樣品，給藥體積為20 mL·kg-1，空白、模型對(duì)照組口服同體積生理鹽水。

2.2.2實(shí)驗(yàn)方法造模大鼠于第1、7天腹腔注射卵蛋白混懸液1 mL (卵蛋白100 mg、氫氧化鋁100 mg)致敏。第15天起，各組在給藥1 h后開始激發(fā)造模，將大鼠按組交替逐只放入多功能誘咳引喘儀的動(dòng)物箱內(nèi)，噴入1%卵蛋白生理鹽水，超聲霧化吸入激發(fā)哮喘。每天1次，共5 d。每次數(shù)秒至數(shù)分鐘，到大鼠開始出現(xiàn)呼吸困難、嗆咳、點(diǎn)頭呼吸、甚至腹肌痙攣等癥狀為止。第20天，同激發(fā)時(shí)方法，記錄大鼠10 min內(nèi)出現(xiàn)Ⅱ級(jí)哮喘(呼吸困難和咳嗽反應(yīng))的潛伏期作為統(tǒng)計(jì)指標(biāo)。

2.2.3血清中LPO、IL-4和 IFN-γ的含量檢測(cè)末次激發(fā)24 h后，以10%水合氯醛(10 mL·kg-1)腹腔注射麻醉動(dòng)物，固定，打開并暴露胸腔，心臟取血4 mL，低溫下離心，取血清。按照試劑盒說明書，采用酶聯(lián)免疫吸附法測(cè)定血清中LPO、IL-4和 IFN-γ的含量。

2.2.5實(shí)驗(yàn)結(jié)果瀉白散(含生熟桑白皮)對(duì)哮喘大鼠血清LPO、IL-4和 IFN-γ含量的影響，結(jié)果見表2。

由表2結(jié)果可知，與空白組相比，模型組大鼠各項(xiàng)指標(biāo)均有顯著變化。與模型組相比，陽性藥、瀉白散生品、蜜炙高劑量組均顯著降低了血清LPO、IL-4含量，升高了血清IFN-γ，并具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。與相同劑量的瀉白散生品相比，瀉白散蜜炙組大鼠血清IL-4含量顯著降低(P<0.05)，血清IFN-γ含量顯著升高增長(zhǎng)(P<0.05)。提示清除細(xì)胞毒性過氧化物，調(diào)節(jié)免疫，增強(qiáng)抗病毒能力可能是瀉白散平喘作用的藥理機(jī)理，且蜜炙組較生品組作用效果更好。

表2　瀉白散(含生熟桑白皮)對(duì)哮喘大鼠血清LPO、IL-4

注：與模型對(duì)照組比較，*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001；與同劑量瀉白散生品組比較，△P<0.05

3討論

桑白皮和蜜炙桑白皮均是臨床常用中藥且應(yīng)用廣泛。明朝《醫(yī)學(xué)入門》首次記載了桑白皮生熟異用理論，“利水生用，咳嗽蜜蒸或炒”[5]，此后的很多醫(yī)籍對(duì)生熟異用及炮炙前后的作用也有明確記載，《中藥臨床生用與制用》歸納指出“桑白皮飲片分為生、炒、蜜炙3種：生藥味甘性寒，以瀉肺平喘力勝，多用于水腫溲少，如五皮散；炒藥味甘，性寒偏平，以降氣平喘力勝，多用于水飲停肺，如桑白皮散；蜜炙藥味甘，性寒偏潤(rùn)，以潤(rùn)肺清熱，止咳平喘力強(qiáng)，多用于肺熱咳喘，如瀉白散”[6]。目前，關(guān)于桑白皮藥理作用的研究日益增多，但對(duì)于桑白皮蜜炙前后藥理作用變化的研究報(bào)道較少，納入復(fù)方研究的更少。

LPO是機(jī)體不飽和脂肪酸在氧自由基作用下形成的細(xì)胞毒性過氧化物。IL-4由Th0細(xì)胞產(chǎn)生，可誘發(fā)Th0細(xì)胞向Th2細(xì)胞轉(zhuǎn)化。IL-4是B細(xì)胞的生長(zhǎng)因子，其作用在B淋巴細(xì)胞上，刺激B淋巴細(xì)胞產(chǎn)生IgE；IL-4還可通過B細(xì)胞對(duì)T細(xì)胞的抗原提呈作用，促進(jìn)IgE介導(dǎo)體液免疫應(yīng)答，也就是由IgM轉(zhuǎn)變?yōu)镮gE，從而誘導(dǎo)支氣管哮喘反應(yīng)發(fā)生[7,8]。IFN-γ由特異性抗原刺激T淋巴細(xì)胞產(chǎn)生，為機(jī)體主要的巨噬細(xì)胞刺激因子，

對(duì)機(jī)體的免疫反應(yīng)有多方面的調(diào)節(jié)作用，可在mRNA的轉(zhuǎn)錄水平遏制IL-4的表達(dá)，參與誘導(dǎo)Th0細(xì)胞向Th1細(xì)胞的分化過程、抑制IL-4生成間接拮抗Th2細(xì)胞的功能[9，10]。過多的IL-4或缺乏IFN-γ可以引起IgE反應(yīng)，相反，增加IFN-γ或降低IL-4水平可抑制上述過程。因此，檢測(cè) IL-4 和 IFN-γ 的含量，可知道活化的肥大細(xì)胞和免疫調(diào)節(jié)的活力。

本實(shí)驗(yàn)以含桑白皮或蜜炙桑白皮的經(jīng)方瀉白散為研究對(duì)象，采用小鼠濃氨水引咳和大鼠哮喘模型平喘實(shí)驗(yàn)，研究了兩者止咳平喘方面的量效關(guān)系并比較兩者的作用強(qiáng)弱。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明含桑白皮生品或蜜炙品的瀉白散都有較為顯著的止咳作用，均能減輕氣道炎癥反應(yīng)，改善哮喘癥狀，含蜜炙品的瀉白散效果更顯著。實(shí)驗(yàn)還提示清除細(xì)胞毒性過氧化物，調(diào)節(jié)免疫，增強(qiáng)抗病毒能力可能是其平喘作用的藥理機(jī)理。

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