不同干燥方法不同品種的金銀花與山銀花的紅外光譜研究

鄒婧　呂燕慧　姚中偉　王悅　張學(xué)濤　王玲娜

摘????? 要：以金銀花為研究對(duì)象，采用傅立葉紅外光譜技術(shù)結(jié)合二階導(dǎo)數(shù)紅外光譜對(duì)不同干燥方法、不同品種的金銀花進(jìn)行分析。檢測結(jié)果表明：同一品種金銀花的不同干燥方法的紅外光譜中，在1 047 cm^-1處烤房烘干的“九豐一號(hào)”吸收峰強(qiáng)度最高，說明烤房烘干“九豐一號(hào)”金銀花的黃酮、苷類等物質(zhì)含量較曬干和殺青烘干的高;金銀花紅外光譜圖中主要吸收峰在3 387、2 913、2 843、1 642、1 380、1 259、1 048、610 cm^-1附近，不同品種金銀花的吸收峰基本相似，但吸收峰的位置及強(qiáng)度存在一定差異;同時(shí)在金銀花與山銀花的紅外光譜中發(fā)現(xiàn)在1 732、1 514、1 459 cm^-1處山銀花比金銀花吸收明顯。因此，紅外光譜結(jié)合二階導(dǎo)數(shù)光譜可用來反映金銀花有效成分、干燥方法和品種的信息。

關(guān)? 鍵? 詞：金銀花;山銀花;傅立葉紅外光譜法;二階導(dǎo)數(shù)紅外光譜;鑒別

中圖分類號(hào)：R282.5; O657.33 ????文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼： A?? ??文章編號(hào)： 1671-0460（2020）06-1042-05

Study on Infrared Spectra of Different Varieties of Honeysuckle Dried by Different Methods and Mountain Honeysuckle

ZOU Jing， LV Yan-hui ，YAO Zhong-wei， WANG Yue， ZHANG Xue-tao ，WANG Ling-na^*

（College of Pharmacy， Shandong University of Traditional Chinese Medicine， Experiment Center of Shandong University of Traditional Chinese Medicine， Jinan Shandong 250355， China）

Abstract： Taking honeysuckle as the research object， Fourier transform infrared spectroscopy combined with second derivative infrared spectroscopy was used to analyze different varieties of honeysuckle dried by different methods. The test results showed that，in the infrared spectrum of the same variety of honeysuckle dried by different methods， the intensity of the absorption peak of “Jiufeng No.1” dried in the baking room was the highest at 1 047 cm^-1， indicating that the contents of flavonoids and glycosides in the “Jiufeng No.1” honeysuckle dried in the baking room were higher than those in the “Jiufeng No.1” honeysuckle dried by sun-drying and cyanocyanine drying. The main absorption peaks of honeysuckle infrared spectrum were near 3 387， 2 913， 2 843， 1 642， 1 380， 1 259， 1 048， 610 cm^-1. Absorption peaks of different varieties of honeysuckle were basically similar， but there were some differences in the position and intensity of the absorption peaks. At the same time， in the infrared absorption spectra of honeysuckle and mountain honeysuckle， absorption peaks of mountain honeysuckle were more obvious than those of honeysuckle at ??1 732， 1 514， 1 459 cm^-1. Therefore， the infrared spectrum combined with the second derivative spectrum can be used to reflect the information of active ingredients， drying methods and varieties of honeysuckle.

Key words： Honeysuckle; Mountain honeysuckle; Fourier infrared spectroscopy; Second derivative infrared spectroscopy; Identification

金銀花的來源為忍冬科植物忍冬的干燥花蕾或帶初開的花，山銀花的來源為忍冬科植物灰氈毛忍冬、華南忍冬、紅腺忍冬或黃褐毛忍冬的干燥花蕾或帶初開的花^[1-2]。金銀花與山銀花均為清熱解毒和疏風(fēng)散熱的傳統(tǒng)中藥，常被人們用來醫(yī)治疔瘡、風(fēng)熱感冒、丹毒、熱血痢疾及其他病癥^[3-4]?，F(xiàn)代藥理學(xué)研究表明金銀花和山銀花具有抑菌、殺菌、抗病毒、抗過敏、解熱和肝臟保護(hù)作用^[5]; 金銀花與山銀花的化學(xué)成分十分復(fù)雜， 目前已鑒定出有60多種成分， 其中具有藥理活性的主要成分有揮發(fā)油、黃酮類化合物、有機(jī)酸、三萜皂苷類化合物^[6-8]。一些研究表明金銀花與山銀花具有不同的活性成分， 金銀花中木犀草苷含量顯著高于山銀花，但綠原酸的含量卻低于山銀花;金銀花中沒有皂苷類成分， 相反山銀花中有大量皂苷類化合物^[9]。所以由于所含成分不同， 兩者的功效偏重在一定程度上也有很大差異，因此在臨床使用上必須把山銀花與金銀花辨別清楚^[10]。

目前市場流通的金銀花規(guī)格品種繁多，摻雜摻假現(xiàn)象嚴(yán)重，市場自我形成的標(biāo)準(zhǔn)隨意性較大，嚴(yán)重影響了金銀花藥材產(chǎn)業(yè)的發(fā)展。近代研究多利用HPLC法進(jìn)行金銀花藥材質(zhì)量控制^[11-12]，分析過程耗時(shí)耗力，而且藥材在提取中會(huì)有成分發(fā)生變化，且存在廢棄物問題。而紅外光譜不僅克服了其他分析手段有損檢測樣品的問題，還減少了廢棄物，形成了一種新型無損耗又環(huán)保的檢測體系。且傅立葉紅外光譜法有簡便、快速的優(yōu)點(diǎn)，以及能夠全面反映樣品化學(xué)成分信息，所以只要檢測樣品所含化學(xué)成分不同，樣品各成分質(zhì)量分?jǐn)?shù)的差異都可以反映在紅外圖譜上，而且使用紅外光譜法不需要對(duì)中藥材進(jìn)行過多的處理，符合中藥整體使用的原則^[13-16]。金銀花由于可以藥食同源， 在我國種植面積非常廣，種植品種也比較多，市場需求量逐年增多，近年又培育出了金銀花以及山銀花的新品種，同時(shí)還發(fā)現(xiàn)了較多的現(xiàn)代加工措施^[17-19]，如烤房烘干、殺青烘干等。

本研究利用傅立葉紅外光譜法（FT-IR）結(jié)合二階導(dǎo)數(shù)光譜對(duì)金銀花的不同干燥方法、不同品種進(jìn)行分析，以及進(jìn)行金銀花與山銀花的鑒別。

1? 試驗(yàn)

1.1? 儀器

傅立葉TENSORⅡ紅外光譜儀，布魯克（北京）科技有限公司;分析軟件，OPUS7.5，布魯克（北京）科技有限公司;電子天平，梅特勒-托利多儀器（上海）有限公司;壓片機(jī)，F(xiàn)W-5A，天津博天勝達(dá)科技發(fā)展有限公司;研缽。

1.2? 材料

溴化鉀，光譜純，國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司;無水乙醇，分析純，國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司;不同干燥方法的九豐一號(hào)金銀花，見表1。

不同品種的金銀花（九豐一號(hào)、華金2號(hào)、華金6號(hào)、四季花、雄嶧一號(hào)）、山銀花，見表2。金銀花和山銀花經(jīng)山東中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院張永清老師鑒定為《中國藥典》規(guī)定的正品藥材。

2? 試驗(yàn)方法

2.1? 供試品片制備

將適量KBr置入瑪瑙研缽中，研磨成粉末狀后，混合均勻，備用。取各批藥材置于60 ℃恒溫烘箱干燥至恒重。將干燥后的金銀花藥材進(jìn)行粉碎后過140目篩（孔徑為109 nm），備用。取樣品粉末1 mg與溴化鉀200 mg混合均勻，填充于模具中，用壓片機(jī)將混合品壓成透明片狀，即可。

2.2? 樣品的測定

用傅里葉分光光度計(jì)（FT-IR）進(jìn)行測定，溫度范圍為20～25 ℃，濕度范圍為50%～60%，掃描分辨率為4 cm^-1，掃描頻率為16 次/s，分辨率為4 cm^-1，光譜掃描范圍是4 000～400 cm^-1，掃描時(shí)實(shí)時(shí)扣除H₂O與CO₂的干擾，應(yīng)將制備得到的樣品片置入提前設(shè)定好上述試驗(yàn)參數(shù)的紅外光譜中進(jìn)行測定，記錄下各樣品的紅外光譜圖。得到譜圖后，用OPUS7.5數(shù)據(jù)處理軟件對(duì)譜圖依次進(jìn)行氣氛補(bǔ)償，基線校正等處理，最后對(duì)譜圖進(jìn)行二階導(dǎo)數(shù)計(jì)算，并保存處理后所得圖譜。

3? 結(jié)果與分析

3.1 ?不同干燥方法“九豐一號(hào)”金銀花的紅外光譜分析

圖1為用不同方法干燥的“九豐一號(hào)”金銀花的原始紅外光譜，CH₂、CH₃的伸縮振動(dòng)吸收峰有?? 2 913、2 843 cm^-1;1 642 cm^-1是烯醚雙鍵伸縮振動(dòng)吸收峰（環(huán)烯醚萜類化合物的特征峰）;黃酮中C—H的彎曲振動(dòng)吸收峰有1 438、1 415 cm^-1;羧酸中C—OH鍵的振動(dòng)吸收峰為1 380、1 260 cm^-1，而???? 1 048 cm^-1峰屬于苷類以及黃酮等物質(zhì)的C—O鍵伸縮振動(dòng)的吸收峰^[20-21]。于是，通過整體分析金銀花紅外光譜，可以確定金銀花中的主要化學(xué)成分。盡管不同干燥方法“九豐一號(hào)”金銀花的紅外光譜圖的峰形沒有明顯差異，但某些吸收峰的強(qiáng)度不一致，說明某些組分的相對(duì)含量不同，如1 047 cm^-1處烤房烘干的“九豐一號(hào)”金銀花藥材吸收峰強(qiáng)度高于曬干、殺青烘干的，說明烤房烘干“九豐一號(hào)”金銀花的黃酮、苷類等物質(zhì)含量較高。

3.2? 不同干燥方法“九豐一號(hào)”金銀花的二階導(dǎo)數(shù)紅外光譜分析

圖2是用不同方法干燥的“九豐一號(hào)”金銀花的二階導(dǎo)數(shù)紅外光譜。由于二階導(dǎo)數(shù)紅外光譜能在一定程度上剝離譜圖的重疊峰，縮小譜圖的疊加，擴(kuò)大紅外譜圖的微小差異，提高譜圖的分辨率^[22]，所以對(duì)不同干燥方法“九豐一號(hào)”金銀花的紅外光譜做二階導(dǎo)數(shù)處理。

由圖2可知，在1800～1 000 cm^-1區(qū)間的二階導(dǎo)數(shù)紅外光譜圖中，曬干“九豐一號(hào)”金銀花1 023 cm^-1峰位與烤房烘干“九豐一號(hào)”金銀花有重合，但是不具有烤房烘干“九豐一號(hào)”金銀花1 611 cm^-1峰位;殺青烘干“九豐一號(hào)”金銀花與烤房烘干“九豐一號(hào)”金銀花的吸收峰位相似，但烤房烘干“九豐一號(hào)”金銀花的吸收峰缺少1 038 cm^-1，在1 476 cm^-1處的吸收峰比較平緩，曬干和烤房烘干“九豐一號(hào)”金銀花則較尖銳。

3.3? 不同品種金銀花的原始紅外光譜分析

圖3是不同品種金銀花原始的紅外光譜，這些不同品種金銀花主要吸收峰在3 387、2 913、2 843、1 642、1 380、1 259、1 048、610 cm^-1附近。不同品種金銀花紅外光譜的主要吸收峰基本相同，說明不同品種的金銀花的主要成分具有一定的相似性，然而不同品種金銀花的某些吸收峰強(qiáng)度、位置和形狀存在差異。例如，在1 414 cm^-1處，“九豐一號(hào)”、“華金6號(hào)”和“四季花”都出現(xiàn)了吸收峰，而“華金2號(hào)”、“雄嶧一號(hào)”和金銀花在1 380 cm^-1處有吸收峰;在1 048 cm^-1處，吸收峰的峰位偏移不大，其形狀略有差異，“九豐一號(hào)”、“華金6號(hào)”和“四季花”的吸收峰比較尖銳，而“華金2號(hào)”、“雄嶧一號(hào)”金銀花的吸收峰較平緩。在1 732 cm^-1C=O吸收峰處，“雄嶧一號(hào)”有一個(gè)明顯的、較為獨(dú)立的弱吸收峰，其他品種的金銀花吸收較弱，表明“雄嶧一號(hào)”可能含酯類成分略高^[23]。

3.4? 不同品種金銀花的二階導(dǎo)數(shù)紅外光譜分析

圖4為金銀花不同品種的二階導(dǎo)數(shù)紅外光譜。圖4表明，“九豐一號(hào)”的二階導(dǎo)數(shù)紅外光譜中，1 764 cm^-1和1 721 cm^-1吸收峰由1 730 cm^-1處的羰基峰細(xì)分而來，1 047 cm^-1處的強(qiáng)吸收峰和寬吸收峰分成了兩個(gè)吸收峰^[24];“華金2號(hào)”的二階導(dǎo)數(shù)光譜中，1 771、1 720、1 703 cm^-1吸收峰由1 730 cm^-1處的羰基峰細(xì)分而來，同時(shí)1 049 cm^-1處的吸收峰細(xì)分出1 088、1 062、1 038 cm^-1等3個(gè)峰;“華金6號(hào)”的二階導(dǎo)數(shù)紅外光譜中發(fā)現(xiàn)1 730 cm^-1處的羰基峰被細(xì)分成了1 770 cm^-1和1 720 cm^-1等吸收峰，且1 089、1 062、1 033 cm^-1等多個(gè)吸收峰由1 047 cm^-1處強(qiáng)而寬的吸收峰細(xì)分而來;通過“四季花”的二階導(dǎo)數(shù)紅外光譜可以發(fā)現(xiàn)，1 731 cm^-1處的羰基峰被細(xì)分成了??? 1 766 cm^-1和1 719 cm^-1等吸收峰，且1 048 cm^-1處強(qiáng)而寬的峰被細(xì)分成1 088 cm^-1和1 061 cm^-1;“雄嶧一號(hào)”中， 1 732 cm^-1處的羰基峰被細(xì)分成了1 769 cm^-1和1 718 cm^-1吸收峰，同時(shí)1 048 cm^-1處的強(qiáng)吸收峰和寬吸收峰分為了1 090、1 064、1 038 cm^-1等多個(gè)吸收峰;通過觀察金銀花的二階導(dǎo)數(shù)紅外光譜可以看到，1 732 cm^-1處的羰基峰分為了1 769 cm^-1和1 717 cm^-1吸收峰，且1 049 cm^-1處寬峰被細(xì)分出1 089 cm^-1等3個(gè)吸收峰。此外發(fā)現(xiàn)“四季花”金銀花在1 671 cm^-1處吸收峰不明顯，其他品種金銀花則有明顯的吸收峰。1 529 cm^-1處，“九豐一號(hào)”“華金2號(hào)”“華金6號(hào)”和“四季花”的吸收峰強(qiáng)而尖銳，而“雄嶧一號(hào)”和金銀花吸收峰不明顯。在二階導(dǎo)數(shù)紅外光譜中，各光譜峰位更加清晰，這為進(jìn)一步分析各個(gè)品種金銀花提供了參考。

3.5? 金銀花與山銀花的原始紅外光譜分析

通過金銀花和山銀花的紅外光譜圖（見圖5），不難看出二者紅外光譜圖有相似的地方，例如在?? 1 500、1 200、880 cm^-1區(qū)域周圍都有波峰存在，在3 400、2 900、1 600、1 000 cm^-1區(qū)域周圍都有波谷存在，而且山銀花紅外指紋圖譜和金銀花紅外指紋圖譜存在的波峰與波谷基本相同。

然而山銀花與金銀花的紅外光譜圖仍有較大的差異，在 1 800～1 000 cm^-1范圍內(nèi)山銀花的吸收峰比金銀花多，首先在1 732 cm^-1處，山銀花的吸收峰強(qiáng)度更為尖銳，而金銀花吸收較弱;其次在

1 514 cm^-1處，山銀花有較強(qiáng)吸收，金銀花吸收不明顯;同時(shí)在1 459 cm^-1附近，山銀花有明顯吸收;另外在1 047 cm^-1處，山銀花的吸收峰強(qiáng)度高于金銀花，說明山銀花中黃酮、苷類物質(zhì)含量較高。由此可見，金銀花和山銀花紅外光譜圖的差異較大，傅立葉紅外光譜法可快速鑒別二者。

3.6? 金銀花與山銀花的二階導(dǎo)數(shù)紅外光譜分析

圖6是金銀花與山銀花的二階導(dǎo)數(shù)紅外光譜圖，從圖6中可知，二者的二階導(dǎo)數(shù)光譜圖有一定的差異性，山銀花在1 528 cm^-1處的吸收峰較明顯，而金銀花在此處無吸收峰或不明顯;在1 670 cm^-1處二者峰形相似，但金銀花有明顯的吸收峰，山銀花吸收較弱;而在1 443 cm^-1處金銀花的吸收峰不如山銀花明顯;金銀花在1 426 cm^-1處有明顯吸收峰，而山銀花沒有明顯的吸收峰;在1 190 cm^-1金銀花吸收峰尖銳且吸收強(qiáng)度高，山銀花吸收強(qiáng)度較弱。以上差異可以用來鑒別金銀花與山銀花，且鑒別方法快速，使用樣品少，有助于金銀花的臨床安全用藥。

4? 結(jié) 論

通過傅立葉變換紅外光譜結(jié)合二階導(dǎo)數(shù)光譜法鑒別研究不同干燥方法、不同品種的金銀花與山銀花，能實(shí)現(xiàn)對(duì)其主要成分進(jìn)行定性分析和相對(duì)含量分析。在不同干燥方法、不同品種金銀花中，其紅外光譜基本相似，但部分吸收峰位、峰形和峰強(qiáng)有差異，說明化學(xué)成分相似，相對(duì)含量不同。中藥材金銀花和山銀花，從原始紅外光譜圖及二階導(dǎo)數(shù)光譜圖中發(fā)現(xiàn)，二者既有共性又有特征性。有研究表明，目前來說金銀花與山銀花在質(zhì)量控制上仍有欠缺，在臨床用藥時(shí)，需大力加強(qiáng)對(duì)兩者的相關(guān)檢

控^[25]。因此紅外光譜結(jié)合二階導(dǎo)數(shù)光譜可用來反映金銀花品種、有效成分以及干燥方法的信息，可為其他種屬相似的中藥材之間的研究提供參考。

參考文獻(xiàn)：

[1]國家藥典委員會(huì).中華人民共和國藥典：一部[M]. 北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2015.

[2]劉雄祥，鄒芝芳.金銀花提取物制粒工藝研究[J].當(dāng)代化工，2005，34（6）：372-374.

[3]楊倩茹，趙媛媛，郝江波，等.金銀花與山銀花化學(xué)成分及其差異的研究進(jìn)展[J].中國中藥雜志，2016，41（7）：1204-1211.

[4]肖美鳳，劉文龍，周晉，等.金銀花和山銀花的研究現(xiàn)狀及質(zhì)量控制的關(guān)鍵問題[J]. 中草藥，2018，49（20）：4905-4911.

[5]王芳，高松.金銀花、山銀花藥理學(xué)研究現(xiàn)狀[J].遼寧中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2013，15（4）：237-239.

[6]肖美鳳，劉文龍，周晉，等.金銀花和山銀花的研究現(xiàn)狀及質(zhì)量控制的關(guān)鍵問題[J].中草藥，2018，49（20）：4905-4911.

[7]劉婧慧. 金銀花與山銀花質(zhì)量評(píng)價(jià)及安全性對(duì)比研究[D]. 北京：北京中醫(yī)藥大學(xué)，2014.

[8]毛利華，李世周，楊哲，等. 金銀花活性成分及其產(chǎn)品開發(fā)研究進(jìn)展[D].西安：陜西學(xué)前師范學(xué)院，2018.

[9]李泮霖，李楚源，劉孟華，等.基于UFLC-Triple-Q-TOF-MS/MS技術(shù)的金銀花、山銀花化學(xué)成分比較[J].中南藥學(xué)，2016，14（4）：363-369.

[10]張靜，許保海，潘旭.金銀花和山銀花的鑒別要點(diǎn)研究[J].北京中醫(yī)藥，2019，38（1）：73-76.

[11]LIU W， RU F S， CUI Y X，? et al. Comparison? of content of? chlorogenic acid and luteolin in sulfur fumigation and dryinglonicera japonica[J].Chin J ExpTradit Med Form， 2013， 19 （1）： 91-94.

[12]BAI Y，LI S，WANG X，et al. Determination of chlorogenic acid of honeysuckle by near infrared spectroscopy rapidly [J].Chin J ExpTradit Med Form，2011，17 （5）： 66-69.

[13]皇甫義靜，楊春艷，毛貽龍，等.基于傅里葉變換紅外光譜的金銀花產(chǎn)地鑒別[J].湖北農(nóng)業(yè)科學(xué)，2018，57（14）：105-108.

[14]師鳳華，趙祥升，莫喬程，等.不同產(chǎn)地不同種質(zhì)金銀花中綠原酸和木犀草苷的含量分析[J].中藥材，2014，37（7）：1145-1148.

[15]申云霞，趙艷麗，張霽，等.林藥復(fù)合種植滇龍膽紅外光譜鑒別研究[J].光譜學(xué)與光譜分析，2016，36（8）：2468-2473.

[16]龔海燕，羅曉，雷敬衛(wèi)，等.不同產(chǎn)地金銀花中紅外光譜分析[J].中醫(yī)學(xué)報(bào)，2016，31（1）：96-98.

[17]趙金娟，路俊仙，王萌，等.不同加工方法對(duì)金銀花質(zhì)量的影響[J].現(xiàn)代中藥研究與實(shí)踐，2013，27（5）：6-8.

[18]汪冶，肖聰穎，鄭欽方，等.金銀花藥材加工方法與商品規(guī)格等級(jí)調(diào)查[J].中南藥學(xué)，2011，9（1）：75-77.

[19]高珊，郭月秋，劉斯亮.現(xiàn)時(shí)金銀花與山銀花比較鑒別分析[J].中國醫(yī)藥科學(xué)，2017，7（1）：52-55.

[20]張芳，張永清，于曉，等.忍冬不同種質(zhì)花蕾紅外光譜分析[J].中國試驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2012，18（9）：83-86.

[21]楊春艷，劉飛，皇甫義靜，等.紅外光譜和逐步判別分析應(yīng)用于金銀花品種和產(chǎn)地的鑒別[J].光散射學(xué)報(bào)，2019，31（1）：94-100.

[22]王元媛，李歡歡，劉梅，等.不同產(chǎn)地、不同部位的丹參與南丹參的紅外光譜研究[J].化學(xué)世界，2019，60（3）：142-148.

[23]趙花榮，溫樹敏，王曉燕，等.金銀花道地品與非道地品的FTIR光譜研究[J].光譜學(xué)與光譜分析，2005，25（5）：705-707.

[24]林敏，王錫珍，郭治平，等.種植板藍(lán)根不同提取物的紅外光譜分析[J].中獸醫(yī)醫(yī)藥雜志，2016，35（1）：56-58.

[25]劉濤，鄭燕，楊丹. 基于紫外-可見與紅外指紋圖譜的金銀花與山銀花品質(zhì)差異研究[J]. 成都大學(xué)學(xué)報(bào)（自然科學(xué)版），2018，37（4）：356-360.