• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    甜茶葉多糖的表征、體外抗氧化活性與體內(nèi)毒性

    2020-08-22 08:07:04教小磐
    食品科學(xué) 2020年15期
    關(guān)鍵詞:單糖斑馬魚清除率

    教小磐,劉 云

    (北京化工大學(xué)生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院,北京市生物加工過程重點實驗室,北京 100029)

    多糖通常是由多個單糖分子聚合、脫水形成的一類分子結(jié)構(gòu)復(fù)雜的多羥基聚合物。多糖來源廣泛,根據(jù)來源不同可分為植物多糖、細(xì)菌多糖、真菌多糖和動物多糖。植物多糖普遍存在于自然界中,研究者已從各類植物中提取并分離出不同結(jié)構(gòu)的多糖[1]。近年來,對植物多糖的研究逐漸增多,主要集中在多糖的提取、分離純化、含量測定、結(jié)構(gòu)分析、藥理及生物學(xué)功能等方面。植物多糖研究的深入為活性多糖產(chǎn)品的生產(chǎn)開發(fā)奠定了基礎(chǔ)[2]。

    甜茶(Rubus suavissimusS.Lee),又名甜葉懸鉤子,為薔薇科懸鉤子屬多年生有刺灌木,因其葉片味甜,故稱為甜茶,是廣西、貴州、湖南等地區(qū)長期以來食用的甜味品種茶[3-4]。甜茶中含有茶多酚、黃酮、多糖及糖苷類等多種物質(zhì),杜晉偉[5]從甜茶葉中分離出多種二萜(苷)類化合物和三萜類化合物,其中,甜葉懸鉤子苷具有一定的藥理活性。鮑晨陽[6]對甜茶中甜茶苷、總多酚和總黃酮3 種主要成分的提取純化工藝進(jìn)行了深入研究。吳玉婷[7]初步研究了甜葉懸鉤子多糖的結(jié)構(gòu),揭示了多糖的結(jié)構(gòu)與其生物活性的關(guān)系。關(guān)于甜茶葉的研究主要集中在甜茶苷、多酚等物質(zhì),其多糖組分的研究相對空缺。甜茶作為“茶、糖、藥”的植物來源,具有重要的研究價值。

    因此,本實驗提取了甜茶葉中的多糖組分,測定了其總糖含量及單糖組成,并對其體外抗氧化活性及生物體內(nèi)毒性進(jìn)行了相關(guān)研究,以期為甜茶多糖的綜合利用提供理論依據(jù)。

    1 材料與方法

    1.1 材料與試劑

    甜茶葉購于湖南省永州市道縣;葡萄糖(glucose,Glu)、半乳糖(galactose,Gal)、甘露糖(mannose,Man)、阿拉伯糖(arabinose,Ara)、鼠李糖(rhamnose,Rha)、巖藻糖(fucose,Fuc)、葡萄糖醛酸(glucuronic acid,Glu UA)、半乳糖醛酸(galacturonic acid,Gal UA)標(biāo)準(zhǔn)品、三氟乙酸、乙腈(色譜純)、1-苯基-3-甲基-5-吡唑酮(5-methyl-2-phenyl-1,2-dihydropyrazol-3-one,PMP) 美國Sigma公司;無水乙醇、乙酸乙酯、三氯甲烷、正丁醇、丙酮、乙醚、甲醇均為國產(chǎn)分析純。

    1.2 儀器與設(shè)備

    UV-756CRT型紫外-可見分光光度計 上海佑儀儀器儀表有限公司;HH-ZK4型恒溫水浴鍋 北京星德儀器設(shè)備有限公司;RE-52型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀 上海亞榮生化儀器有限公司;3K15型臺式高速冷凍離心機(jī) 北京五洲東方科技發(fā)展有限公司;真空冷凍干燥機(jī) 北京博醫(yī)康實驗儀器有限公司;Alltech Series 1500型高效液相色譜儀美國奧泰公司;VERTEX 70v傅里葉變換紅外光譜儀德國Bruker公司;SZ61體視顯微鏡、E330數(shù)碼單反相機(jī)日本奧林巴斯公司;斑馬魚養(yǎng)殖系統(tǒng) 北京愛生公司。

    1.3 方法

    1.3.1 甜茶中多糖的提取和精制

    精密稱取50 g甜茶粉末,乙醇/乙酸乙酯(1∶2,V/V)浸泡過夜脫脂;脫脂后的甜茶粉末以料液比1∶10 用80 ℃熱水浸提3 h,收集提取液,濾渣重復(fù)提取3 次;合并3 次提取液并濃縮;提取液加入4 倍體積的無水乙醇,4 ℃過夜沉淀,5 000 r/min 離心15 min 得沉淀,沉淀分別用無水乙醇、丙酮、乙醚洗滌2~3 次,經(jīng)干燥得粗提物。

    粗提物重新溶于水,過濾去雜質(zhì);用Sevag法[8](V(氯仿):V(正丁醇)=4∶1)脫蛋白,重復(fù)8~10 次,采用紫外分光光度計測定溶液吸光度,直至260~280 nm波長處無明顯吸收峰;透析(截流分子質(zhì)量8 000~12 000 Da)48 h 除去小分子物質(zhì);采用活性炭脫色工藝[9]對多糖溶液進(jìn)行脫色,脫色溫度為50 ℃;脫色液加入4 倍體積無水乙醇二次沉淀過夜,5 000 r/min 離心15 min得沉淀;沉淀依次用無水乙醇、丙酮、乙醚洗滌2~3 次;最后冷凍干燥,得精提物。

    1.3.2 總糖質(zhì)量分?jǐn)?shù)及甜茶多糖提取率的測定

    總糖質(zhì)量分?jǐn)?shù)的測定參考文獻(xiàn)[10]。

    1.3.2.1 總糖標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制

    精密稱取鼠李糖5 mg,溶解后定容至100 mL,即得質(zhì)量濃度為0.05 mg/mL的鼠李糖標(biāo)準(zhǔn)溶液。然后分別稀釋至0.04、0.03、0.02、0.01 mg/mL。分別吸取0.01、0.02、0.03、0.04、0.05 mg/mL的葡萄糖溶液2 mL,加入體積分?jǐn)?shù)5%苯酚溶液1 mL,再加入5 mL 濃硫酸,室溫下顯色30 min,使用紫外-可見分光光度計,測定溶液在490 nm波長處的吸光度,以鼠李糖質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo),吸光度為縱坐標(biāo)繪制得標(biāo)準(zhǔn)曲線。

    1.3.2.2 甜茶多糖提取率的測定

    精密稱取5 mg甜茶多糖樣品溶于100 mL去離子水中,吸取甜茶多糖樣品溶液2 mL,加入體積分?jǐn)?shù)5%苯酚溶液1 mL,再加入5 mL濃硫酸,室溫下顯色30 min,使用紫外-可見分光光度計測定溶液在490 nm波長處的吸光度,根據(jù)鼠李糖標(biāo)準(zhǔn)曲線和甜茶多糖樣品的吸光度計算出甜茶多糖中總糖質(zhì)量分?jǐn)?shù)。甜茶多糖提取率按式(1)計算。

    1.3.3 單糖組成的分析

    單糖組成按照文獻(xiàn)[11-13]進(jìn)行分析。

    酸水解[14]:精密稱取甜茶多糖10 mg,溶解于2 mL 2 mol/L的三氟乙酸溶液中,121 ℃水解1 h;50 ℃旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除酸,加入1 mL超純水,得甜茶多糖水解液。

    標(biāo)準(zhǔn)品處理:首先配制各單糖標(biāo)準(zhǔn)品母液,其中甘露糖、葡萄糖醛酸、半乳糖醛酸、半乳糖、阿拉伯糖、巖藻糖的質(zhì)量濃度均為1.25 mg/mL,鼠李糖質(zhì)量濃度為7.0 mg/mL,葡萄糖質(zhì)量濃度為1.75 mg/mL,取各單糖標(biāo)準(zhǔn)品母液0.125 mL,得到混合單糖標(biāo)準(zhǔn)品溶液1 mL待用。

    PMP衍生化:分別取1 mL各單糖標(biāo)準(zhǔn)品溶液、1 mL混合單糖標(biāo)準(zhǔn)品溶液與1 mL甜茶多糖水解液,依次加入0.3 mol/L NaOH 500 μL和0.5 mol/L PMP-甲醇溶液500 μL混勻,70 ℃水浴反應(yīng)40 min,冷卻至室溫后加入0.3 mol/L HCl溶液中和,用1 mL CHCl3萃取3 次,分別取上層水相用去離子水定容至10 mL,即得各單糖標(biāo)準(zhǔn)品衍生液、混合單糖標(biāo)準(zhǔn)品衍生液及衍生化的甜茶多糖水解液,過0.22 μm濾膜,進(jìn)行高效液相色譜檢測。

    先將各單糖標(biāo)準(zhǔn)品衍生液分別進(jìn)樣,根據(jù)每種單糖標(biāo)準(zhǔn)品的色譜圖來確定每種單糖的出峰時間,再將混合單糖標(biāo)準(zhǔn)品衍生液進(jìn)樣,得到混合單糖標(biāo)準(zhǔn)品的高效液相色譜圖,根據(jù)各單糖出峰時間、峰面積繪出各單糖的標(biāo)準(zhǔn)曲線,衍生化的甜茶多糖水解液在相同的色譜條件下進(jìn)行測定,根據(jù)甜茶多糖水解液高效液相色譜圖中各峰的保留時間,利用計算機(jī)積分得到各峰的峰面積,并將峰面積代入各單糖標(biāo)準(zhǔn)曲線中即可得出甜茶葉多糖的單糖組成及物質(zhì)的量比。

    儀器條件:色譜柱為COSMOSIL 5C18-MS-II柱(4.6 mm×250 mm);流動相為0.1 mol/L pH 6.8的磷酸鹽緩沖液-乙腈(83∶17,V/V);流速為1.0 mL/min;柱溫為25 ℃;進(jìn)樣量為20 μL;波長為245 nm;時間為60 min。

    1.3.4 傅里葉變換紅外光譜的測定

    采用KBr壓片法。取100 mg干燥KBr粉末研細(xì),加入甜茶多糖樣品混合研細(xì),壓成透明薄片。采用VERTEX 70v傅里葉變換紅外光譜儀進(jìn)行測定。

    1.3.5 抗氧化能力的測定

    1.3.5.1 總還原力的測定

    總還原力測定參照文獻(xiàn)[15]。分別取質(zhì)量濃度為0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 mg/mL的多糖水溶液各1.0 mL,依次加入0.2 mol/L磷酸鹽緩沖液、質(zhì)量分?jǐn)?shù)1%K3Fe(CN)6溶液各1.0 mL,混合液50 ℃水浴反應(yīng)20 min,冷卻后,向混合物中加入1.0 mL體積分?jǐn)?shù)10%的三氯乙酸溶液,3 000 r/min離心10 min,取2.5 mL上清液依次加入2.5 mL去離子水、1.0 mL體積分?jǐn)?shù)0.1% FeCl3溶液。以去離子水為參比,在700 nm波長處測定吸光度。取質(zhì)量濃度為0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 mg/mL的VC進(jìn)行同樣處理作為陽性對照。以吸光度表征總還原力。

    1.3.5.2 DPPH自由基清除能力的測定

    1,1 -二苯基-2-三硝基苯肼(1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH)自由基清除能力的測定參照文獻(xiàn)[16]進(jìn)行。分別取質(zhì)量濃度為0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 mg/mL的多糖水溶液各2.0 mL,分別加入0.1 mmol/L的DPPH-乙醇溶液2 mL混勻,室溫避光反應(yīng)30 min,在517 nm波長處測定不同質(zhì)量濃度多糖溶液的吸光度。空白組以2 mL的去離子水代替多糖溶液。本底用去離子水代替DPPH-乙醇溶液。取質(zhì)量濃度為0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 mg/mL的VC進(jìn)行同樣處理作為陽性對照。按公式(2)計算多糖溶液對DPPH自由基清除率。

    式中:A0為空白管吸光度;Aa為測定管吸光度;Ab為測定管本底吸光度。

    1.3.5.3 ·OH清除能力的測定

    羥自由基(·OH)清除能力的測定參照文獻(xiàn)[17-18]。分別取質(zhì)量濃度為0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 mg/mL的多糖水溶液各1.0 mL,分別依次加入9 mmol/L FeSO4溶液、9 mmol/L水楊酸-乙醇溶液、9 mmol/L的H2O2溶液各1.0 mL,混勻后37 ℃反應(yīng)30 min,于510 nm波長處測定吸光度??瞻捉M用去離子水代替多糖溶液,本底用去離子水代替H2O2溶液。取質(zhì)量濃度分別為0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 mg/mL的VC進(jìn)行同樣處理并作為陽性對照。按公式(3)計算多糖溶液對·OH清除率。

    式中:A0為空白管吸光度;Aa為測定管吸光度;Ab為測定管本底吸光度。

    1.3.6 多糖的毒性測定

    1.3.6.1 斑馬魚的飼養(yǎng)與胚胎的收集

    斑馬魚(Brachydanio rerio)生長周期短、發(fā)育快速,比傳統(tǒng)的嚙齒類動物模型具有更大的優(yōu)勢。本實驗選用斑馬魚受精后6 h(6 hours post-fertilization,6 hpf)的胚胎和斑馬魚受精后3 d(3 days post-fertilization,3 dpf)的幼魚為研究對象[19-20]。斑馬魚養(yǎng)殖于(28.5±1.0)℃的人工海水中,斑馬魚養(yǎng)殖室內(nèi)采用人工光源對斑馬魚的生活周期進(jìn)行光調(diào)控,照明周期為14 h光照,10 h黑暗交替。餌料選用孵化48 h的豐年蝦,每日中午飼喂1 次。

    胚胎收集:當(dāng)天開燈后立即將收卵皿置于魚缸底部,斑馬魚受光刺激開始出現(xiàn)明顯的追尾現(xiàn)象,產(chǎn)卵后受精卵會由紗網(wǎng)的網(wǎng)眼漏到平皿底,即刻將平皿提出,取出紗網(wǎng),將沉在平皿底部的魚卵吸出,每20~30 min收集魚卵1 次,沖洗幾次后轉(zhuǎn)至盛有人工海水的小平皿中繼續(xù)培養(yǎng)。

    1.3.6.2 斑馬魚毒性實驗

    依據(jù)斑馬魚藥物毒性實驗[21]中藥物(頭孢唑啉)質(zhì)量濃度的范圍(胚胎在頭孢唑啉給藥質(zhì)量濃度高于0.3 mg/mL時全部致畸;幼魚在頭孢唑啉給藥質(zhì)量濃度高于0.3 mg/mL時全部死亡)確定在低、中、高3 個甜茶多糖質(zhì)量濃度下進(jìn)行測定。甜茶多糖(給藥組)母液質(zhì)量濃度為5 mg/mL,將母液用人工海水分別稀釋至0.1、1.0、2.5 mg/mL。

    采用斑馬魚野生型TU品系。分別取6 hpf的斑馬魚胚胎和3 dpf的斑馬魚幼魚,每組各30 枚置于2 mL含0.1、1.0、2.5 mg/mL甜茶多糖的人工海水中,每個甜茶多糖質(zhì)量濃度組重復(fù)3 次。顯微鏡下觀察斑馬魚胚胎和幼魚在接觸多糖溶液后,連續(xù)3 d的表型和存活率。

    1.4 數(shù)據(jù)處理與分析

    采用Excel 2010、OriginPro 2017C軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理,結(jié)果以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 甜茶多糖總糖含量與單糖組成分析結(jié)果

    冷凍干燥后的水提甜茶多糖為淺黃色的絮狀物,多糖的得率為0.6%,相比文獻(xiàn)[8]中甜茶多糖得率(3.4%)及文獻(xiàn)[22]中普洱茶多糖得率(1.25%)而言較低。分析原因可能是本實驗中采用了二次醇沉,多糖純度進(jìn)一步提高,因此得率較低。進(jìn)一步地將所測得甜茶多糖的吸光度代入鼠李糖標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程y=14.975x+0.098 9(R2=0.996 4),即得甜茶多糖的總糖質(zhì)量分?jǐn)?shù)。甜茶多糖的總糖質(zhì)量分?jǐn)?shù)為70.2%,其結(jié)果高于文獻(xiàn)[7]中總糖質(zhì)量分?jǐn)?shù)。

    圖1 8 種單糖標(biāo)準(zhǔn)品混合物(A)和甜茶多糖水解液(B)的高效液相色譜圖Fig.1 High performance liquid chromatograms of mixture of eight standard monosaccharides (A) and hydrolysate of polysaccharides from Rubus suavissimus S.Lee (B)

    混合單糖標(biāo)準(zhǔn)品衍生液的高效液相色譜圖如圖1A所示,8 種單糖混合標(biāo)準(zhǔn)液衍生物在該色譜條件下實現(xiàn)了較好的分離。根據(jù)各單糖出峰時間、峰面積繪出各單糖的標(biāo)準(zhǔn)曲線,結(jié)果見表1,所測定的8 種單糖標(biāo)準(zhǔn)品的峰面積與標(biāo)準(zhǔn)品質(zhì)量濃度呈良好的線性關(guān)系,擬合度較高。衍生化的甜茶多糖水解液在相同的色譜條件下進(jìn)行測定,結(jié)果見圖1B。結(jié)果表明,甜茶多糖主要由甘露糖、鼠李糖、葡萄糖、半乳糖、阿拉伯糖、巖藻糖組成,其物質(zhì)的量比為1.17∶21.79∶3.54∶1.00∶1.33∶2.86。其中鼠李糖含量最高,半乳糖含量最低。圖1B中30.50 min的新峰已驗證不是葡萄糖醛酸和半乳糖醛酸,分析可能是一種新的糖醛酸,與傅里葉變換紅外光譜結(jié)果中含C=O的伸縮振動峰相對應(yīng)。由于其含量較低,因此未做進(jìn)一步檢測。

    表1 8 種單糖的標(biāo)準(zhǔn)曲線方程Table 1 Calibration curves of eight monosaccharides

    2.2 甜茶多糖的傅里葉變換紅外光譜分析結(jié)果

    圖2 甜茶多糖的傅里葉變換紅外光譜Fig.2 Fourier transform infrared spectra of Rubus suavissimus S.Lee polysaccharides

    如圖2所示,甜茶多糖樣品在4 000~500 cm-1區(qū)具有多糖類物質(zhì)的一般特征。3 295、2 936、1 597、1 417、1 337、1 233、1 148、1 035、982、896、825 cm-1均有特征吸收。3 295 cm-1附近的強寬譜帶是糖類—OH的伸縮振動吸收峰,2 936 cm-1附近的吸收峰是甲基或亞甲基的C—H伸縮振動峰,1 200~1 420 cm-1附近的吸收峰是C—H的彎曲振動峰,與C—H的伸縮振動構(gòu)成了糖環(huán)的特征吸收[23]。1 597 cm-1附近的吸收峰是C=O的伸縮振動峰,同時與吸收的水相關(guān),說明甜茶多糖對水有較強的親和力[24]。980~1 200 cm-1的吸收峰為吡喃糖環(huán)的伸縮振動峰,證明甜茶多糖樣品中單糖以吡喃糖苷的形式存在,與單糖組成結(jié)果一致。825 cm-1和896 cm-1的吸收峰分別代表α與β類型的糖苷鍵[25]。

    2.3 甜茶多糖的抗氧化能力分析結(jié)果

    2.3.1 總還原力分析結(jié)果

    還原力是評價天然產(chǎn)物抗氧化能力的重要指標(biāo)。溶液的吸光度越大,其還原力越強。

    圖3 VC和甜茶多糖的還原力Fig.3 Reducing power of VC and polysaccharides from Rubus suavissimus S.Lee

    由圖3可知,隨著多糖質(zhì)量濃度的增加,吸光度增大,其還原力增強,但均低于同等質(zhì)量濃度VC的還原力。任嘉興等[18]對羊肚菌多糖的抗氧化活性進(jìn)行研究,發(fā)現(xiàn)羊肚菌多糖在質(zhì)量濃度1.0 mg/mL時,吸光度為0.25,略高于本實驗結(jié)果。Zhang Zuofa等[26]研究了金針菇多糖的還原能力,在質(zhì)量濃度為5 mg/mL時,其多糖吸光度低于0.2,與陽性對照丁基羥基茴香醚同樣具有較大差異,這與本實驗結(jié)果較為一致。由此可知,甜茶多糖具有一定的還原力,但與VC相比較弱。

    2.3.2 甜茶多糖DPPH自由基清除能力分析結(jié)果

    DPPH法是評價抗氧化活性的常用方法,多糖作為抗氧化物質(zhì)可直接作用于DPPH自由基,使其顏色變淺,從而引起吸光度的變化[27]。

    圖4 VC和甜茶多糖的DPPH自由基清除能力Fig.4 DPPH radical scavenging activity of VC and polysaccharides from Rubus suavissimus S.Lee

    由圖4可知,在0.2~1.0 mg/mL的質(zhì)量濃度范圍內(nèi),甜茶多糖對DPPH自由基清除能力呈現(xiàn)出劑量依賴性,在質(zhì)量濃度為1.0 mg/mL時,甜茶多糖的DPPH自由基清除率達(dá)到63.7%,低于1.0 mg/mL VC的清除率(94.5%),但甜茶多糖來源于天然產(chǎn)物,相比而言其清除能力較強。李月等[28]研究苦膽草多糖的DPPH自由基的清除能力,在質(zhì)量濃度0.5 mg/mL時,其清除率為24.0%,低于相同質(zhì)量濃度甜茶多糖的清除率(36.0%)。Bi Hongtao等[17]研究真菌多糖的抗氧化活性,其結(jié)果顯示,在質(zhì)量濃度1 mg/mL時,真菌多糖的DPPH自由基清除率為55%,低于本實驗相同質(zhì)量濃度甜茶多糖的清除率。結(jié)果表明,水提甜茶多糖具有較強的DPPH自由基清除能力。

    2.3.3 甜茶多糖·OH清除能力分析結(jié)果

    ·OH是活性氧中對生物體毒性最強的一種自由基,過量的·OH可以損傷細(xì)胞膜、殺死紅細(xì)胞、降解DNA等[29]。

    圖5 VC和甜茶多糖的·OH清除能力Fig.5 ·OH radical scavenging activity of VC and polysaccharides from Rubus suavissimus S.Lee

    如圖5所示,隨著多糖質(zhì)量濃度的增加,其·OH清除能力增強,并呈現(xiàn)一定的劑量依賴性。在質(zhì)量濃度為1.0 mg/mL時,甜茶多糖的·OH清除率為34.5%,與VC在0.2 mg/mL時的清除率相當(dāng),證明甜茶多糖具有一定的·OH清除能力。分析其機(jī)制可能是多糖組分通過提供氫原子來終止自由基鏈反應(yīng)[30]。Chen Fang等[31]研究了山楂多糖的·OH清除能力,在質(zhì)量濃度為0.8 mg/mL時,其清除率為75%,高于本實驗結(jié)果。朱嬌嬌等[32]研究了3 種天然植物多糖的抗氧化作用,在質(zhì)量濃度為2 mg/mL時,3 種植物多糖的·OH清除率均低于20%,低于本實驗中1.0 mg/mL的甜茶多糖清除率(34.5%)。

    2.4 甜茶多糖對斑馬魚胚胎和幼魚毒性分析結(jié)果

    受精后發(fā)育至6 h的斑馬魚胚胎和受精后發(fā)育至3 d的幼魚(圖6)分別置于不同質(zhì)量濃度的甜茶多糖溶液的毒性表型和毒性實驗結(jié)果如表2所示。

    圖6 斑馬魚胚胎和幼魚暴露于甜茶多糖的毒性實驗結(jié)果Fig.6 Toxicity results of zebrafish embryos and juveniles exposed to polysaccharides from Rubus suavissimus S.Lee

    表2 斑馬魚胚胎和幼魚毒性實驗結(jié)果Table 2 Results of zebrafish embryos and juveniles toxicity study

    由表2、圖6可知,在0.1、1.0、2.5 mg/mL的質(zhì)量濃度下,甜茶多糖均未表現(xiàn)出對斑馬魚胚胎和幼魚的致畸和致死作用,表明甜茶多糖具有一定的安全、低毒特點。丁興杰等[33]以受精后48 h發(fā)育正常的斑馬魚胚胎作為心臟毒性模型,研究了附子多糖的毒性。結(jié)果表明,附子多糖干預(yù)后,斑馬魚心率、胚胎死亡率無明顯變化,與本實驗結(jié)果一致。同時,程祖春等[34]也將斑馬魚胚胎模型作為抗腫瘤藥物的毒性評價方法。Sarmah等[35]以斑馬魚為模型,評估了環(huán)境毒物對心臟發(fā)育和功能的影響。采用斑馬魚作為模型生物簡便可行、穩(wěn)定可靠、預(yù)測性好,能夠為甜茶多糖的生物應(yīng)用提供理論依據(jù)。

    3 結(jié) 論

    本實驗以甜茶葉為材料,采用水提醇沉法提取了多糖成分,研究了其組成、體外抗氧化及體內(nèi)毒性作用。采用苯酚-硫酸法和衍生化高效液相色譜法分別測定了總糖質(zhì)量分?jǐn)?shù)和單糖組成,并結(jié)合傅里葉變換紅外光譜進(jìn)一步證實了多糖組分。結(jié)果表明,在甜茶多糖中,總糖質(zhì)量分?jǐn)?shù)為70.2%,主要由甘露糖、鼠李糖、葡萄糖、半乳糖、阿拉伯糖、巖藻糖6 種單糖組成,其物質(zhì)的量比為1.17∶21.79∶3.54∶1.00∶1.33∶2.86。體外抗氧化實驗結(jié)果表明,甜茶多糖作為天然活性成分,具有一定的抗氧化能力,其中DPPH自由基清除能力相對較強。以斑馬魚為模型生物的體內(nèi)毒性實驗表明,甜茶多糖未表現(xiàn)出對斑馬魚胚胎和幼魚的致畸和致死作用,證明其具有安全、低毒的特點,本實驗為甜茶多糖的進(jìn)一步開發(fā)和應(yīng)用提供了依據(jù)。

    猜你喜歡
    單糖斑馬魚清除率
    斑馬魚天生就能辨別數(shù)量
    膀胱鏡對泌尿系結(jié)石患者結(jié)石清除率和VAS評分的影響
    小斑馬魚歷險記
    昆明市女性宮頸高危型HPV清除率相關(guān)因素分析
    海藻多糖的單糖組成對體外抗氧化活性的影響
    瓜蔞不同部位對斑馬魚促血管生成及心臟保護(hù)作用
    中成藥(2017年6期)2017-06-13 07:30:35
    蹄葉槖吾葉多糖提取工藝優(yōu)化及單糖組成研究
    血液透析濾過中前稀釋和后稀釋的選擇
    HPLC-ELSD法測定煙草中單糖含量
    早期血乳酸清除率與重度急性顱腦外傷患者預(yù)后的相關(guān)性分析
    精品人妻1区二区| 日韩欧美 国产精品| 9191精品国产免费久久| 日日夜夜操网爽| 欧美绝顶高潮抽搐喷水| 网址你懂的国产日韩在线| 亚洲欧美精品综合一区二区三区| 变态另类成人亚洲欧美熟女| 亚洲成人免费电影在线观看| 日本成人三级电影网站| 99在线视频只有这里精品首页| 亚洲成av人片免费观看| 亚洲欧美日韩卡通动漫| 国产精品久久久久久人妻精品电影| 欧美xxxx黑人xx丫x性爽| 欧美zozozo另类| 夜夜爽天天搞| 又大又爽又粗| 精品免费久久久久久久清纯| 观看美女的网站| 免费搜索国产男女视频| 亚洲精华国产精华精| 久久性视频一级片| 美女 人体艺术 gogo| 日本黄色片子视频| 国产69精品久久久久777片 | 制服人妻中文乱码| 91老司机精品| 少妇的逼水好多| 成人一区二区视频在线观看| 成人精品一区二区免费| 国产精品乱码一区二三区的特点| 一二三四在线观看免费中文在| 色哟哟哟哟哟哟| 又粗又爽又猛毛片免费看| 人人妻,人人澡人人爽秒播| 亚洲成人精品中文字幕电影| 中文字幕人成人乱码亚洲影| 国产又色又爽无遮挡免费看| 美女黄网站色视频| 波多野结衣高清作品| 女生性感内裤真人,穿戴方法视频| 国产一区二区三区在线臀色熟女| 中文字幕熟女人妻在线| 国产精品精品国产色婷婷| 综合色av麻豆| 亚洲欧美一区二区三区黑人| 18禁裸乳无遮挡免费网站照片| 亚洲人与动物交配视频| 成熟少妇高潮喷水视频| svipshipincom国产片| 成人av在线播放网站| 欧美成狂野欧美在线观看| 女生性感内裤真人,穿戴方法视频| 亚洲av美国av| 亚洲狠狠婷婷综合久久图片| 国产精品爽爽va在线观看网站| 国产精品精品国产色婷婷| 两个人视频免费观看高清| 男女视频在线观看网站免费| 国产成人影院久久av| 国产成人aa在线观看| 色综合欧美亚洲国产小说| 亚洲avbb在线观看| 国产人伦9x9x在线观看| 一级毛片高清免费大全| 精品久久久久久久人妻蜜臀av| 波多野结衣巨乳人妻| 欧美乱色亚洲激情| 色老头精品视频在线观看| 免费av不卡在线播放| 身体一侧抽搐| 亚洲专区中文字幕在线| 亚洲国产精品999在线| 国产一区二区在线观看日韩 | 欧美激情久久久久久爽电影| 在线观看免费视频日本深夜| 免费在线观看影片大全网站| 女人高潮潮喷娇喘18禁视频| 美女午夜性视频免费| 色吧在线观看| 宅男免费午夜| or卡值多少钱| 岛国在线免费视频观看| 欧美黑人巨大hd| 成年人黄色毛片网站| e午夜精品久久久久久久| 少妇的丰满在线观看| 成人18禁在线播放| 久久久久精品国产欧美久久久| 看黄色毛片网站| www日本在线高清视频| 国内精品美女久久久久久| 成人国产一区最新在线观看| 中文字幕人成人乱码亚洲影| 久久久久久久久久黄片| 亚洲精品美女久久久久99蜜臀| 欧美一区二区国产精品久久精品| 黄频高清免费视频| 一边摸一边抽搐一进一小说| 精品一区二区三区视频在线 | 99久久国产精品久久久| 少妇的丰满在线观看| 久久热在线av| 中文资源天堂在线| 精品国产超薄肉色丝袜足j| 免费看a级黄色片| 在线观看一区二区三区| 亚洲熟妇熟女久久| 在线观看美女被高潮喷水网站 | 一级作爱视频免费观看| 热99re8久久精品国产| 狂野欧美激情性xxxx| 夜夜躁狠狠躁天天躁| 免费看光身美女| 日韩中文字幕欧美一区二区| 色在线成人网| 精品乱码久久久久久99久播| 综合色av麻豆| 午夜亚洲福利在线播放| 黄片大片在线免费观看| 久久这里只有精品19| 亚洲av电影不卡..在线观看| 一级毛片女人18水好多| 岛国在线观看网站| 人人妻,人人澡人人爽秒播| 久久精品国产亚洲av香蕉五月| АⅤ资源中文在线天堂| 91av网站免费观看| 亚洲国产色片| xxxwww97欧美| 精品一区二区三区av网在线观看| 亚洲成av人片在线播放无| 亚洲熟女毛片儿| 一区福利在线观看| 99在线人妻在线中文字幕| 久久中文字幕人妻熟女| 亚洲国产色片| 国产精品 欧美亚洲| 少妇的逼水好多| 亚洲中文字幕日韩| 少妇人妻一区二区三区视频| 国产精品久久久久久精品电影| 日本精品一区二区三区蜜桃| 男女之事视频高清在线观看| 99在线视频只有这里精品首页| 亚洲男人的天堂狠狠| 日韩欧美在线乱码| 全区人妻精品视频| 巨乳人妻的诱惑在线观看| 亚洲,欧美精品.| 亚洲狠狠婷婷综合久久图片| 免费看十八禁软件| 国产亚洲欧美98| 亚洲在线自拍视频| 一本综合久久免费| 一进一出抽搐gif免费好疼| 久久久成人免费电影| 狠狠狠狠99中文字幕| 熟女人妻精品中文字幕| 成人三级做爰电影| 国产在线精品亚洲第一网站| 国内精品一区二区在线观看| 午夜免费成人在线视频| 精品国产三级普通话版| 国产一区二区三区在线臀色熟女| 欧美成狂野欧美在线观看| 老司机福利观看| 香蕉久久夜色| 精品电影一区二区在线| 亚洲av免费在线观看| 亚洲欧美日韩卡通动漫| 精品无人区乱码1区二区| 午夜精品一区二区三区免费看| 免费看光身美女| 午夜福利在线在线| 国产成年人精品一区二区| 69av精品久久久久久| 日本撒尿小便嘘嘘汇集6| 黑人欧美特级aaaaaa片| 手机成人av网站| 国产乱人视频| 中文字幕人妻丝袜一区二区| 最近最新中文字幕大全免费视频| 亚洲国产色片| 制服人妻中文乱码| 老熟妇乱子伦视频在线观看| 精品人妻1区二区| 一二三四社区在线视频社区8| 成人午夜高清在线视频| 成人性生交大片免费视频hd| 亚洲avbb在线观看| 国产av麻豆久久久久久久| 免费av不卡在线播放| 日韩欧美精品v在线| 19禁男女啪啪无遮挡网站| 成人无遮挡网站| 午夜福利成人在线免费观看| 91九色精品人成在线观看| 神马国产精品三级电影在线观看| 国产黄a三级三级三级人| 桃红色精品国产亚洲av| 午夜成年电影在线免费观看| 亚洲无线观看免费| 99久久久亚洲精品蜜臀av| 一二三四社区在线视频社区8| 日本 欧美在线| 国产单亲对白刺激| 亚洲中文日韩欧美视频| 日韩免费av在线播放| 久久99热这里只有精品18| 一夜夜www| 欧美日韩福利视频一区二区| 天堂影院成人在线观看| www日本在线高清视频| 久久人人精品亚洲av| 综合色av麻豆| 亚洲人与动物交配视频| 人妻丰满熟妇av一区二区三区| 又紧又爽又黄一区二区| www日本黄色视频网| 极品教师在线免费播放| 欧美日韩福利视频一区二区| 国产高清videossex| 免费看光身美女| 久久久国产欧美日韩av| 国产精品av久久久久免费| x7x7x7水蜜桃| 看黄色毛片网站| 九色国产91popny在线| 看免费av毛片| 99久久久亚洲精品蜜臀av| 日本精品一区二区三区蜜桃| 亚洲av日韩精品久久久久久密| 亚洲国产精品999在线| 看片在线看免费视频| 听说在线观看完整版免费高清| 又黄又粗又硬又大视频| 欧美一级毛片孕妇| 欧洲精品卡2卡3卡4卡5卡区| 国产午夜精品论理片| 久久久久亚洲av毛片大全| 五月玫瑰六月丁香| 久久午夜亚洲精品久久| 久久久久久久久免费视频了| 在线观看66精品国产| 久久99热这里只有精品18| 国模一区二区三区四区视频 | 97人妻精品一区二区三区麻豆| 亚洲七黄色美女视频| 狂野欧美激情性xxxx| 国产精品乱码一区二三区的特点| 亚洲欧美日韩无卡精品| 岛国在线免费视频观看| 色av中文字幕| 日韩国内少妇激情av| 国产主播在线观看一区二区| 国产精品久久久久久人妻精品电影| 午夜福利成人在线免费观看| 亚洲午夜精品一区,二区,三区| 一级a爱片免费观看的视频| 欧美成人性av电影在线观看| 欧洲精品卡2卡3卡4卡5卡区| 又紧又爽又黄一区二区| 九九久久精品国产亚洲av麻豆 | 国产高清videossex| 精品一区二区三区视频在线观看免费| 99热只有精品国产| 嫩草影院入口| 亚洲在线自拍视频| 每晚都被弄得嗷嗷叫到高潮| 亚洲精品粉嫩美女一区| 欧美色视频一区免费| 99国产精品99久久久久| 波多野结衣高清无吗| 噜噜噜噜噜久久久久久91| 亚洲欧美激情综合另类| 欧美日本视频| 男女午夜视频在线观看| 国产精品女同一区二区软件 | 黑人欧美特级aaaaaa片| 麻豆久久精品国产亚洲av| 亚洲精品国产精品久久久不卡| 国产精品美女特级片免费视频播放器 | 少妇的丰满在线观看| 亚洲最大成人中文| 久久精品国产亚洲av香蕉五月| 1024手机看黄色片| 一本精品99久久精品77| 小说图片视频综合网站| 99热只有精品国产| 女警被强在线播放| 亚洲无线观看免费| 久久婷婷人人爽人人干人人爱| 男人的好看免费观看在线视频| 精品久久久久久久久久免费视频| 精品电影一区二区在线| av在线天堂中文字幕| 又爽又黄无遮挡网站| 欧美激情久久久久久爽电影| 最新中文字幕久久久久 | 欧美中文综合在线视频| 亚洲熟女毛片儿| 欧美日韩中文字幕国产精品一区二区三区| 午夜激情欧美在线| 成人永久免费在线观看视频| 巨乳人妻的诱惑在线观看| 日本免费a在线| 桃色一区二区三区在线观看| www日本在线高清视频| 99久久精品热视频| 久久久色成人| 亚洲午夜理论影院| www日本黄色视频网| 丝袜人妻中文字幕| 高潮久久久久久久久久久不卡| 嫩草影视91久久| 成人午夜高清在线视频| 国产在线精品亚洲第一网站| 亚洲成人久久性| 偷拍熟女少妇极品色| aaaaa片日本免费| 国产精品乱码一区二三区的特点| 国内揄拍国产精品人妻在线| 俺也久久电影网| 夜夜躁狠狠躁天天躁| 嫩草影视91久久| 极品教师在线免费播放| 一卡2卡三卡四卡精品乱码亚洲| 全区人妻精品视频| 18禁国产床啪视频网站| 在线观看日韩欧美| 在线国产一区二区在线| 色噜噜av男人的天堂激情| 18禁裸乳无遮挡免费网站照片| 99久久精品一区二区三区| 欧美又色又爽又黄视频| 亚洲七黄色美女视频| 国产在线精品亚洲第一网站| 欧美+亚洲+日韩+国产| 91av网站免费观看| 天堂影院成人在线观看| 两个人的视频大全免费| 香蕉丝袜av| 在线播放国产精品三级| 悠悠久久av| 亚洲无线在线观看| 欧美成人免费av一区二区三区| 全区人妻精品视频| 舔av片在线| 亚洲国产中文字幕在线视频| 欧美日韩福利视频一区二区| 精品一区二区三区av网在线观看| 日韩欧美国产一区二区入口| 母亲3免费完整高清在线观看| 高潮久久久久久久久久久不卡| 久久欧美精品欧美久久欧美| 一个人免费在线观看电影 | www日本黄色视频网| 俺也久久电影网| 天堂av国产一区二区熟女人妻| 日韩 欧美 亚洲 中文字幕| 男插女下体视频免费在线播放| 看黄色毛片网站| 久久这里只有精品中国| 午夜福利视频1000在线观看| 天堂av国产一区二区熟女人妻| 色噜噜av男人的天堂激情| 给我免费播放毛片高清在线观看| 国产1区2区3区精品| 黄色女人牲交| 国产成人aa在线观看| 国产精品98久久久久久宅男小说| 国产成人福利小说| 欧美另类亚洲清纯唯美| 亚洲专区中文字幕在线| 91久久精品国产一区二区成人 | 无人区码免费观看不卡| 欧美日韩精品网址| 哪里可以看免费的av片| 99久国产av精品| 欧美三级亚洲精品| 制服丝袜大香蕉在线| 一级毛片精品| 一a级毛片在线观看| 精品一区二区三区视频在线 | 欧美日韩综合久久久久久 | 丰满人妻一区二区三区视频av | 免费搜索国产男女视频| 亚洲 欧美一区二区三区| www日本黄色视频网| 男人和女人高潮做爰伦理| 日韩国内少妇激情av| 久久中文看片网| 成年免费大片在线观看| 日本成人三级电影网站| 十八禁网站免费在线| 欧美极品一区二区三区四区| 国产高潮美女av| 亚洲av熟女| 精品久久久久久久人妻蜜臀av| 久久99热这里只有精品18| 国内精品久久久久久久电影| 欧美日韩精品网址| 视频区欧美日本亚洲| 久久伊人香网站| 亚洲精品一区av在线观看| 久久亚洲真实| netflix在线观看网站| 18禁国产床啪视频网站| 在线免费观看不下载黄p国产 | 日韩国内少妇激情av| 男女做爰动态图高潮gif福利片| tocl精华| 丁香六月欧美| 亚洲成人中文字幕在线播放| 禁无遮挡网站| 又黄又粗又硬又大视频| 十八禁网站免费在线| 99久国产av精品| 久久精品91蜜桃| 成在线人永久免费视频| 日本一本二区三区精品| 97人妻精品一区二区三区麻豆| 国产成人aa在线观看| 国产乱人伦免费视频| 亚洲精品粉嫩美女一区| 日本三级黄在线观看| av天堂在线播放| 欧美乱妇无乱码| 白带黄色成豆腐渣| 久久久国产精品麻豆| 级片在线观看| 在线视频色国产色| 午夜精品久久久久久毛片777| 日韩精品中文字幕看吧| 亚洲国产欧美人成| 久久人妻av系列| 国产真人三级小视频在线观看| 久9热在线精品视频| 国产精品一区二区精品视频观看| 成在线人永久免费视频| 99热这里只有是精品50| 国产又色又爽无遮挡免费看| 精品无人区乱码1区二区| 精品一区二区三区视频在线观看免费| 在线观看美女被高潮喷水网站 | 国产欧美日韩一区二区三| 久久久久久久精品吃奶| 91在线观看av| 国产成年人精品一区二区| svipshipincom国产片| 国产三级在线视频| 麻豆国产av国片精品| 女同久久另类99精品国产91| 亚洲欧美一区二区三区黑人| 怎么达到女性高潮| 国产精品久久久人人做人人爽| 欧美黄色淫秽网站| 日韩免费av在线播放| 日本一二三区视频观看| 亚洲国产精品合色在线| 久久久国产精品麻豆| 亚洲欧美日韩高清在线视频| 日本 av在线| 少妇的丰满在线观看| 日韩免费av在线播放| 欧美xxxx黑人xx丫x性爽| 欧美日韩瑟瑟在线播放| 天天添夜夜摸| 看片在线看免费视频| 99精品欧美一区二区三区四区| 一卡2卡三卡四卡精品乱码亚洲| 亚洲精品一区av在线观看| 欧美日韩一级在线毛片| 国产亚洲精品久久久久久毛片| 欧美激情在线99| 又黄又粗又硬又大视频| 亚洲av日韩精品久久久久久密| 国产成人系列免费观看| 国产麻豆成人av免费视频| 亚洲成人免费电影在线观看| 最近最新免费中文字幕在线| 久久久久国产精品人妻aⅴ院| 少妇裸体淫交视频免费看高清| 中文字幕av在线有码专区| 床上黄色一级片| 亚洲在线观看片| 88av欧美| 日韩欧美国产在线观看| 亚洲美女视频黄频| 色av中文字幕| 99re在线观看精品视频| 国产精品亚洲av一区麻豆| 18禁观看日本| 在线观看日韩欧美| 麻豆久久精品国产亚洲av| 午夜福利视频1000在线观看| 亚洲欧美精品综合一区二区三区| 91在线精品国自产拍蜜月 | 国产精品1区2区在线观看.| 亚洲欧美日韩卡通动漫| 老司机深夜福利视频在线观看| 国产一区二区激情短视频| 99热精品在线国产| 亚洲熟妇中文字幕五十中出| 九色国产91popny在线| 国产精品免费一区二区三区在线| 丰满人妻熟妇乱又伦精品不卡| 男女下面进入的视频免费午夜| 婷婷丁香在线五月| 欧美在线黄色| 国产单亲对白刺激| 成人三级黄色视频| 国产亚洲一区二区精品| 自拍偷自拍亚洲精品老妇| 麻豆av噜噜一区二区三区| 蜜臀久久99精品久久宅男| 麻豆精品久久久久久蜜桃| 日日啪夜夜撸| 最近2019中文字幕mv第一页| 精品人妻偷拍中文字幕| 成人av在线播放网站| av在线蜜桃| 国产精品一区www在线观看| 久久久久久九九精品二区国产| 乱系列少妇在线播放| 国产三级中文精品| 久久精品夜色国产| 波多野结衣高清无吗| 国产视频内射| 黄片无遮挡物在线观看| 又爽又黄无遮挡网站| 3wmmmm亚洲av在线观看| 亚洲av电影不卡..在线观看| 久久精品夜夜夜夜夜久久蜜豆| 午夜精品国产一区二区电影 | 国产精品一二三区在线看| 22中文网久久字幕| 少妇人妻精品综合一区二区| 国产三级中文精品| 国产69精品久久久久777片| 五月伊人婷婷丁香| 成年av动漫网址| 国产精品一及| 国产色爽女视频免费观看| 中文精品一卡2卡3卡4更新| 成人综合一区亚洲| 男女边吃奶边做爰视频| 国产又色又爽无遮挡免| 国产黄色小视频在线观看| 一个人看视频在线观看www免费| 69人妻影院| 国内精品一区二区在线观看| 色播亚洲综合网| 在线观看66精品国产| 免费观看的影片在线观看| 精品一区二区三区人妻视频| 亚洲欧美一区二区三区国产| 亚洲精品乱码久久久久久按摩| 一级黄片播放器| 国产真实伦视频高清在线观看| 极品教师在线视频| 日韩精品有码人妻一区| 99久久成人亚洲精品观看| 国产精品国产三级国产av玫瑰| 啦啦啦观看免费观看视频高清| 九九热线精品视视频播放| 午夜视频国产福利| 超碰av人人做人人爽久久| 精品酒店卫生间| 日韩高清综合在线| 两个人的视频大全免费| 乱系列少妇在线播放| 日本五十路高清| 亚洲欧美精品综合久久99| 亚洲美女视频黄频| 国产高清三级在线| 国产成人福利小说| 在线播放无遮挡| 日本免费a在线| 国产黄片美女视频| 国语对白做爰xxxⅹ性视频网站| 日本-黄色视频高清免费观看| 在线免费十八禁| 日韩av不卡免费在线播放| 久久久久性生活片| 欧美bdsm另类| 亚洲不卡免费看| 我的女老师完整版在线观看| 丝袜喷水一区| 成年女人永久免费观看视频| 久久久久久久久中文| 乱人视频在线观看| 黄色一级大片看看| 能在线免费看毛片的网站| 国内精品美女久久久久久| 亚洲成人久久爱视频| 村上凉子中文字幕在线| 午夜精品国产一区二区电影 | 国产乱来视频区| 哪个播放器可以免费观看大片| 精品久久久久久成人av| 国产精品国产三级国产av玫瑰| 99热精品在线国产| 国产精品精品国产色婷婷| 日韩成人伦理影院| 精品免费久久久久久久清纯| 看免费成人av毛片| 日本一二三区视频观看| 久久热精品热| 蜜桃亚洲精品一区二区三区| www.色视频.com| 天堂网av新在线| 欧美性猛交╳xxx乱大交人|