石龍芮的生藥學研究

張瑩， 陶梁春， 姜路晴， 呂惠子

( 延邊大學 藥學院， 吉林 延吉 133002 )

石龍芮為毛茛科植物石龍芮(RanunculussceleratusL.)的干燥全草，朝醫(yī)稱之為銅罐草.《朝藥志》中記載，石龍芮主要用于治療癰癤腫毒、瘰疬結核、瘧疾、下肢潰瘍、腎虛、痢疾等癥[1].現(xiàn)代研究表明，石龍芮具有抗炎[2]、抗菌[3-5]、抗寄生蟲[6]等藥理活性，臨床上用于淋巴結結核、瘧疾、風濕性關節(jié)痛、蛇咬傷等[7].還有研究表明，用鮮石龍芮可以治療食道癌與乳腺癌[8].目前，對石龍芮的研究多是對其化學成分的研究[9-11]，而對其性狀、微米顯微特征等生藥學方面的研究較少[12-13].為此，本文進一步研究石龍芮的生藥學特征，為制定其質量標準提供科學參考.

1 實驗儀器與材料

1.1 實驗儀器

BDS400倒置生物顯微鏡，重慶奧特光學儀器有限公司； KQ5200型超聲波清洗器，昆山市超聲儀器有限公司； JYD -325B生物組織石蠟切片機，金華市宇典醫(yī)療器械廠； FA2004電子天平，上海良平儀器儀表有限公司； RRH-100萬能高速粉碎機，上海緣沃工貿有限公司.

1.2 實驗材料

硅膠GF254薄層板，煙臺江友硅膠開發(fā)有限公司；β-谷甾醇，上海源葉生物科技有限公司(純度≥98%，批號HS237710198)；水合氯醛、無水乙醇、95%乙醇、二甲苯、石油醚、乙酸乙酯、濃硫酸均為分析純，遼寧泉瑞試劑有限公司；石蠟，上海華靈康復器械廠(批號20130415)；番紅染料、固綠染料，上?；瘜W試劑采購供應站；中性樹膠，上海標本模型廠；中藥篩(380 μm)，杭州同祺儀器有限公司.采集的10批石龍芮經延邊大學藥學院李鎬教授鑒定確認，并將標本存放在延邊大學藥學院朝藥標本室.石龍芮的采集時間和地點(GPS定位)如表1所示.

表1 10批石龍芮藥材信息

2 方法與結果

2.1 基源考證

石龍芮首次記載于《神農本草經》：“主風寒濕痹；心腹邪氣；利關節(jié)；止煩滿.久服輕身明目，不老，生川澤石邊.”[14]與毛茛科石龍芮“全草含原白頭翁素，有毒，藥用能消結核、截瘧及治癰腫、瘡毒、蛇毒和風寒濕痺”[15]的功效對比可知，《神農本草經》中記載的石龍芮不是毛茛科石龍芮.

漢代《名醫(yī)別錄》中記載的石龍芮為：“上品，生于山川澤石旁，五月五采子，二月、八月采皮陰干，無毒.”[16]而毛茛科石龍芮為水生草本，植株細小，不僅無法采皮，而且因其含有原白頭翁素，所以有劇毒.由上述可知，《名醫(yī)別錄》中記載的石龍芮并非是毛茛科石龍芮.

唐代《新修本草》中記載的石龍芮為：“俗名水堇，苗似附子，實如桑椹，故名地椹.生于濕地，五月熟，葉子味皆辛.”[17]從石龍芮的性狀和生境來看，它與毛茛科石龍芮相符.《本草拾遺》中記載的石龍芮為：“水茛，葉圓而光，有毒，生水旁.”[18]該書證實了《新修本草》中記載的水堇為毛茛科石龍芮.

宋代《本草圖經》中記載的石龍芮為：“今惟出兗州，一叢數莖，莖青紫色，每莖三葉，其葉芮芮，短小多刻缺，子如葶藶而色黃，生水邊石上.”[19]《本草衍義》中記載的石龍芮為：“陸生者葉有毛，而末銳.陸生者又謂之天灸，取少葉系臂上，一夜作大泡，如火燒.”[20]該書所記載的石龍芮的毒性與文獻[21-22]報道的內容(毛茛屬植物石龍芮含原白頭翁素，有劇毒，刺激性極強，與皮膚接觸可導致嚴重的炎癥和水泡)一致.由此可知，《本草圖經》和《本草衍義》中記載的石龍芮為毛茛科石龍芮.

明代《本草綱目》中記載的石龍芮為：“生近水下濕地，高者尺許，其根如莽，三月生苗，叢生，圓莖分枝，一枝三葉，葉青而光滑，有三尖，多細缺，四、五月開黃花，結小實，大如豆，狀如初生桑椹，青綠色，搓散則子甚細，如葶藶子.”[23]從上述植物形態(tài)表述表明，書中所記載的植物為毛茛科石龍芮.

清代《植物名實圖考》中記載的石龍芮為：“今處處有之，性狀正如水堇，生水邊者肥大、平原者瘦小，其實亦能灸瘧.”[24]從上述內容可知，該書所記載的石龍芮為毛茛科石龍芮.

綜上所述，漢代記載的石龍芮并非是毛茛科石龍芮，而自唐代開始記載的石龍芮為毛茛科石龍芮，并沿用至今.

2.2 藥材性狀

對采集的石龍芮進行性狀研究顯示：石龍芮須根細長(5～7 cm)，呈白色，質較軟；莖表面光滑無毛，質堅韌不易折斷，直徑為5 cm～1 mm；莖中空，呈淺綠色，斷面呈黃白色；葉呈綠色，形態(tài)皺縮或卷曲；花呈黃色；氣微，味苦.辛石龍芮的上述性狀與文獻[25]的表述一致.石龍芮的性狀見圖1.

2.3 石龍芮的顯微鑒別

取石龍芮根、莖、葉，對其進行制片(利用傳統(tǒng)石蠟切片法)和染色(番紅-固綠混染法).將整株植物研磨成粉末，過中藥篩(380 μm)后將其制成水合氯醛裝片.在顯微鏡下觀察石龍芮根、莖、葉的組織結構及粉末特征.

2.3.1根橫切面的顯微特征 圖2為石龍芮根的橫切面放大10倍和40倍的圖.由圖2可以看出：石龍芮根的橫切面呈圓形；表皮細胞由一層大小不等的細胞組成；皮層由5～8層的薄壁細胞組成，排列疏松；內皮層的細胞較小，且排列不整齊；輻射型維管束多為三原型；木質部與韌皮部相間排列.上述石龍芮根的橫切面特征與文獻[12]中的表述一致.

2.3.2莖橫切面的顯微特征 圖3為石龍芮莖的橫切面放大10倍和40倍的圖.由圖3可以看出：石龍芮莖的橫切面呈圓形，有髓腔；表皮細胞由一層呈圓形的細胞組成，排列緊密，近表皮處皮層存在大量的通氣組織，有非腺毛；皮層薄壁細胞排列緊密，大小不一；維管束呈外韌型，多數存在，且大小不一，環(huán)狀排列；木質部導管呈圓形；韌皮部細胞排列整齊.上述石龍芮莖的橫切面特征與文獻[13]中的表述一致.

2.3.3葉橫切面的顯微特征 圖4為石龍芮葉的橫切圖放大40倍的圖.由圖4可以看出：石龍芮葉的表皮細胞為一層，上表皮細胞略大于下表皮細胞，且上下表皮均有氣孔分布；柵欄組織為一列，呈長柱形，排列疏松；海綿組織排列稀疏，無規(guī)則，且多數有空腔存在；無厚角組織；維管束呈外韌型，多處存在；木質部呈半圓形，導管不規(guī)則排列；韌皮部細胞較小，排列緊密.

2.3.4粉末的顯微鑒別 圖5為石龍芮的粉末特征圖(放大40倍).由圖5可以看出：石龍芮的粉末呈深綠色；葉表皮細胞為多角形，呈波狀彎曲；氣孔為不定式；非腺毛較多，由單細胞構成；纖維較多，成束或散生，較長(可達300 μm)；螺紋導管、網紋導管和環(huán)紋導管較多；花粉粒(淡黃色)較多，呈圓形或類圓形，直徑為25～30 μm，且花粉粒中有3孔溝和顆粒狀的小雕紋；草酸鈣簇晶較多；石細胞呈圓形或近圓形，較少，單個存在；淀粉粒較少；有厚壁細胞存在，呈多角形.

2.4 薄層色譜鑒別

依據《中華人民共和國藥典：一部》[26]采用TLC鑒定石龍芮的理化性質.供試品溶液的制備：取10批石龍芮藥材粉末各0.4 g，分別加入石油醚10 mL，超聲提取30 min；過濾，濾液濃縮，備用.對照品的制備：取β-谷甾醇，加甲醇制成200 mg/L的對照品溶液，備用.點樣、展開及顯色：用毛細管吸取供試品溶液與對照品溶液各5 μL，點于同一硅膠GF254薄層板上.以體積比為6∶1的石油醚-乙酸乙酯為展開劑，用體積分數為10%的硫酸-乙醇溶液顯色.

圖6為石龍芮的薄層色譜圖，圖中S為β-谷甾醇對照品，1—10為各批石龍芮的供試品.由圖可見，10批供試品在日光下均可見到6個清晰的斑點，重復性好，且未出現(xiàn)邊緣效應及拖尾現(xiàn)象.供試品色譜中所顯斑點的位置與對照品色譜所顯的斑點一致，經測定其Rf值為0.3.

3 結論

本文經對石龍芮進行系統(tǒng)的生藥學研究發(fā)現(xiàn)，其鑒別特征為：須根呈白色，質柔韌；莖表面光滑無毛，質堅韌不易折斷；莖中空,呈淺綠色，斷面呈黃白色；葉皺縮或卷曲；氣微，味苦，辛.粉末呈深綠色，氣孔為不定式，非腺毛較多；花粉粒為淡黃色，呈圓形或類圓形，并有顆粒狀小雕紋；草酸鈣簇晶較多.薄層色譜鑒別中，10批測試樣品均在相同的位置出現(xiàn)清晰的斑點，且重復性好.本文研究結果可為制定石龍芮的藥材質量標準提供科學依據.今后我們將利用高效液相色譜法對石龍芮的成分做進一步測定.