胎膜早破患者TIMP-2、G-CSF水平與絨毛膜羊膜炎關(guān)系探討

李 艷 崔婧芳 綦 萍

青島市膠州中心醫(yī)院(266300)

胎膜早破隨著時(shí)間的延長(zhǎng)可明顯提高感染母體幾率而引起絨毛膜羊膜炎，若不及時(shí)有效控制可增加產(chǎn)褥感染率，嚴(yán)重者甚至引起敗血癥、新生兒肺炎、膿毒血癥的發(fā)生，使產(chǎn)婦感染率及新生兒發(fā)病率、死亡率明顯上升[1-3]。絨毛膜炎患者早期并無(wú)顯著臨床癥狀，臨床上仍以胎盤胎膜病理檢查及經(jīng)腹羊膜腔羊水穿刺檢查，但創(chuàng)傷較大，臨床急需創(chuàng)傷較小的診斷指標(biāo)[4]。金屬蛋白酶組織抑制劑-2(TIMP-2)為基質(zhì)金屬蛋白酶-2(MMP-2)的特異性組織抑制劑，研究顯示MMP2對(duì)胎膜各組織細(xì)胞外基質(zhì)中膠原、蛋白聚糖及糖蛋白等具有調(diào)節(jié)作用，其水平對(duì)胎膜早破的發(fā)生有重要影響[5]。粒細(xì)胞集落刺激因子(G-CSF)為調(diào)節(jié)粒系干細(xì)胞增殖、分化、成熟的生長(zhǎng)因子，對(duì)維持血循環(huán)池內(nèi)白細(xì)胞數(shù)量平衡有重要作用。目前對(duì)于TIMP-2、G-CSF水平與胎膜早破患者絨毛膜羊膜炎的相關(guān)性研究較少，本文對(duì)此進(jìn)行分析，為早期診斷提供新思路。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇2017年3月-2019年2月本院收治的胎膜早破患者(觀察組)及同期健康足月妊娠產(chǎn)婦(對(duì)照組)資料。納入標(biāo)準(zhǔn)：①觀察組患者符合參考文獻(xiàn)[6]中相關(guān)診斷；②單胎妊娠；③神志清醒智力正常，交流無(wú)障礙；④患者已獲知情同意。排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并妊娠期高血壓、妊娠糖尿病等妊娠期并發(fā)癥；②有吸煙、酗酒等不良生活史；③急、慢性感染性疾?。虎芴ノ徊徽?。本研究經(jīng)本院倫理委員會(huì)審批。

1.2 TIMP-2與G-CSF 檢測(cè)

取胎膜破口處邊緣2cm×2cm組織，生理鹽水沖洗后10%甲醛液固定24h。免疫組織化學(xué)法檢測(cè)TIMP-2、G-CSF水平，SP試劑盒及DAB顯色劑均購(gòu)自于美國(guó)R&D公司。固定后胎膜組織石蠟包埋后切片，68℃干燥20min脫蠟。3%H2O237℃ 孵育10min后加入0.01mol/L枸櫞酸緩沖液煮沸。以山羊血清封閉37℃孵育10min，加入TIMP-2與G-CSF人多克隆抗體(美國(guó)Sigma公司)，濃度為1:100,4℃冰箱孵育過(guò)夜后PBS沖洗3次，每次5min。滴加生物素標(biāo)記一抗，37℃孵育30min，PBS沖洗3次后DAB染色，染色過(guò)程以PBS代替一抗作為陰性，組織中出現(xiàn)棕色顆粒狀物為陽(yáng)性。采用病理圖文操作系統(tǒng)對(duì)陽(yáng)性信號(hào)面積分光密度值檢測(cè)，TIMP-2與G-CSF表達(dá)情況以分光密度值表示。根據(jù)實(shí)驗(yàn)室指征及臨床檢查將觀察組孕婦分為3組，無(wú)絨毛膜羊膜炎患者為無(wú)炎癥組；有絨毛膜羊膜炎實(shí)驗(yàn)室指征但無(wú)臨床指征的亞臨床絨毛膜羊膜炎患者為亞炎癥組，有實(shí)驗(yàn)室及臨床指征的絨毛膜羊膜炎患者為炎癥組。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS22.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)量資料多組對(duì)比行單因素方差分析，兩兩對(duì)比行LSD-t檢驗(yàn)，相關(guān)性分析采用Spearman相關(guān)系數(shù)法，均以P<0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 一般資料

對(duì)照組83例，年齡(28.2±4.0)歲(23～35歲)，孕周(38.2±3.1)周(37～40周)，孕(2.2±0,7)次(1～3次)。觀察組83例，年齡(28.1±4.1)歲(24～36歲)，孕周(38.7±3.3)周(37～40周)，孕(2.3±0.7)次(1～4次)。兩組資料比較無(wú)差異(P>0.05)。

2.2 各組孕婦TIMP-2、G-CSF水平比較

觀察組胎膜組織中TIMP-2表達(dá)水平(1.94±0.45)低于對(duì)照組(3.09±0.61)，G-CSF表達(dá)水平(4.66±1.02)高于對(duì)照組(2.07±0.52)(t=13.821、-20.610，P=0.000)。見(jiàn)圖1～4(見(jiàn)封三)；且觀察組TIMP-2水平無(wú)炎癥組>亞炎癥組>炎癥組，G-CSF水平炎癥組>亞炎癥組>無(wú)炎癥組(均P<0.05)。見(jiàn)表1。

表1 不同絨毛膜羊膜炎程度患者TIMP-2與G-CSF水平對(duì)比

2.4 TIMP-2、G-CSF水平與絨毛膜羊膜炎相關(guān)性

TIMP-2水平與胎膜早破患者絨毛膜羊膜炎呈負(fù)相關(guān)(r=-0.647，P=0.003)，G-CSF水平與胎膜早破患者絨毛膜羊膜炎呈正相關(guān)(r=0.657，P=0.011)。見(jiàn)圖5、圖6。

圖5 TIMP-2與胎膜早破患者絨毛膜羊膜炎相關(guān)性

圖6 G-CSF與胎膜早破患者絨毛膜羊膜炎相關(guān)性

3 討論

絨毛膜炎為產(chǎn)科胎膜早破最常見(jiàn)的并發(fā)癥，發(fā)病率在(223～452)/10萬(wàn)人，在合并有細(xì)菌性陰道炎或自身免疫異?；颊咧邪l(fā)病率升高[7]。胎膜早破可增加絨毛膜羊膜炎發(fā)生率，絨毛膜羊膜炎可增加新生兒窒息、腦癱、癡呆發(fā)生率，還可增加產(chǎn)褥期感染、晚期產(chǎn)后出血的發(fā)生率，目前對(duì)絨毛膜羊膜炎診斷主要根據(jù)臨床癥狀聯(lián)合病理指標(biāo)確診[8-10]。

G- CSF是抗感染過(guò)程中非特異性細(xì)胞免疫中的主要細(xì)胞因子之一，主要功能為調(diào)節(jié)粒系干細(xì)胞增殖、分化和成熟，在血循環(huán)及組織中均有廣泛分布，能維持血循環(huán)中白細(xì)胞數(shù)的穩(wěn)定與平衡，同時(shí)可準(zhǔn)確、敏感地反映細(xì)菌是否在體內(nèi)繁殖。動(dòng)物研究證實(shí)細(xì)菌在體內(nèi)繁殖的數(shù)量及感染細(xì)菌數(shù)量均可直接影響血清G-CSF水平[11]。本研究結(jié)果顯示，觀察組G-CSF表達(dá)水平高于對(duì)照組，且無(wú)炎癥組水平更低。G-CSF主要作用于中性粒細(xì)胞系，對(duì)血細(xì)胞的增殖、分化及活化具有重要作用，健康機(jī)體中表達(dá)水平較低，常規(guī)方法難以檢測(cè)到，當(dāng)發(fā)生絨毛膜炎時(shí)羊膜中水平可明顯升高?？赡芘c絨毛膜羊膜炎發(fā)生時(shí)，機(jī)體在抗原及內(nèi)毒素刺激下產(chǎn)生大量G-CSF以提升周圍血循環(huán)中粒細(xì)胞數(shù)量同時(shí)增強(qiáng)其功能，激活胎兒巨噬細(xì)胞及中性粒細(xì)胞的殺菌作用而達(dá)到保護(hù)胎兒不被細(xì)菌感染的作用。因而G-CSF水平升高可能為機(jī)體的自我保護(hù)機(jī)制表現(xiàn)，可用于反映亞臨床絨毛膜羊膜炎及臨床絨毛膜羊膜炎[12-13]。

胎膜中各細(xì)胞外基質(zhì)成分的合成與降解的平衡對(duì)維持胎膜張力具有重要作用，胎膜細(xì)胞外基質(zhì)的合成與降解與MMPs與TIMPs間平衡密不可分。在正常生理狀況時(shí)，MMPs表達(dá)量較低，當(dāng)在炎癥細(xì)胞因子、生長(zhǎng)因子等刺激作用下則表達(dá)量上升，通過(guò)降解細(xì)胞外基質(zhì)膜的有效成分，調(diào)控細(xì)胞粘連，從而發(fā)揮其生物學(xué)功能。TIMP-2為MMP-2的特異性組織抑制劑，對(duì)明膠變性膠原及Ⅳ型膠原，Ⅶ、Ⅸ、Ⅹ型膠原、纖維連接蛋白及彈性蛋白的降解均具有重要作用，Ⅳ型膠原為胎膜中細(xì)胞外基質(zhì)的重要組成，其合成與降解水平與胎膜早破有關(guān)[14]。本文對(duì)照組胎膜組織中TIMP-2表達(dá)水平高于觀察組，而觀察組中無(wú)炎癥組TIMP-2水平相對(duì)較高。分析認(rèn)為：可能與絨毛膜羊膜炎過(guò)程中體內(nèi)釋放出IL-1、IL-6、TNF-α等大量炎癥因子，同時(shí)細(xì)菌分解產(chǎn)生大量?jī)?nèi)毒素均可抑制體內(nèi)TIMPs水平，促進(jìn)MMPs的分泌而引起胎膜早破并加重宮內(nèi)感染[15]。

綜上所述，胎膜早破患者中有絨毛膜羊膜炎者TIMP-2水平增高，G-CSF水平降低，提示這兩項(xiàng)指標(biāo)對(duì)鑒別胎膜早破患者絨毛膜羊膜炎有參考價(jià)值。