紫外線(xiàn)照射對(duì)成人原代肝細(xì)胞免疫原性及蛋白合成性的影響

鄧 蘭,唐世剛

鄧蘭,唐世剛,湖南省人民醫(yī)院/湖南師范大學(xué)第一附屬醫(yī)院感染科湖南省長(zhǎng)沙市 410005

0 引言

近年隨著細(xì)胞生物工程技術(shù)的發(fā)展,肝衰竭的細(xì)胞治療也取得了一定的進(jìn)展,肝細(xì)胞移植(hepatocyte transplantation,HCT)也被認(rèn)為是一種可替代整肝移植的可行方法[1,2].目前肝細(xì)胞主要來(lái)源于不適合原位肝移植的供體肝、異種肝細(xì)胞、肝干細(xì)胞[3,4],本研究中的肝細(xì)胞來(lái)源于外科肝切除的良性病變組織標(biāo)本.

由于成熟肝細(xì)胞只表達(dá)MHC Ⅰ類(lèi)分子,而無(wú)MHCⅡ類(lèi)分子,因此理論上免疫原性相對(duì)較弱[5,6],但分離后的單個(gè)肝細(xì)胞MHC Ⅰ類(lèi)分子依然具有識(shí)別和提呈內(nèi)源性抗原肽的功能,而誘發(fā)免疫排斥反應(yīng); 肝細(xì)胞分離過(guò)程中肝細(xì)胞膜損傷,導(dǎo)致細(xì)胞表型改變,細(xì)胞間表面粘附分子被受體免疫系統(tǒng)識(shí)別而受到細(xì)胞毒性T細(xì)胞的攻擊,導(dǎo)致移植后的肝細(xì)胞凋亡[7]; 有動(dòng)物實(shí)驗(yàn)證實(shí)移植的肝細(xì)胞在未使用免疫抑制劑的情況下僅能存活7-10 d[8],所以如何降低移植肝細(xì)胞免疫原性,提高移植細(xì)胞的存活是值得進(jìn)行探討的方向[9].

本研究通過(guò)紫外線(xiàn)照射,探討不同強(qiáng)度和照射時(shí)間對(duì)成人原代肝細(xì)胞免疫原性及對(duì)細(xì)胞穩(wěn)定性的影響.

1 材料和方法

1.1 材料

1.1.1 主要試劑配制及儀器:(1)膠原酶IV型、胎牛血清,Sigma公司; (2)CCK-8檢測(cè)試劑盒,DOGINDO公司; (3)膜電位試劑盒,碧云天公司; (4)熒光顯微鏡,ASONE公司; (5)紫外燈,飛利浦公司.

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 實(shí)驗(yàn)對(duì)象:取本院手術(shù)切除的成人肝組織.入選標(biāo)準(zhǔn):(1)肝臟良性病變(膽管結(jié)石、血管瘤、囊腫、外傷等),病理無(wú)明顯萎縮及纖維化; (2)年齡＜60歲,血白蛋白(serum albumin,ALB) ＞30 g/L; (3)無(wú)膽道急性感染; (4)乙肝、丙肝、艾滋、梅毒等檢測(cè)為陰性.盡量在肝葉離體后30 min內(nèi)分離肝細(xì)胞.

1.2.2 實(shí)驗(yàn)分組:根據(jù)紫外線(xiàn)照射強(qiáng)度將肝細(xì)胞分為對(duì)照組(0 J/m2),4個(gè)實(shí)驗(yàn)組(分別為200、350、550和750 J/m2),紫外燈功率固定,照射強(qiáng)度由照射時(shí)間調(diào)控,對(duì)照組和4個(gè)實(shí)驗(yàn)組照射強(qiáng)度所對(duì)應(yīng)的照射時(shí)間分別為0、2、4、6和8 min.

1.2.3 肝細(xì)胞分離和純化:無(wú)菌條件下將肝葉組織稱(chēng)重,4 ℃ D-Hanks液漂洗,去除結(jié)石或損傷組織,封閉膽管.改良的兩步膠原酶灌注法分離肝細(xì)胞[10].

1.2.4 淋巴細(xì)胞提取:淋巴細(xì)胞分離液標(biāo)準(zhǔn)流程分離提取.

1.2.5 紫外線(xiàn)處理肝細(xì)胞:將肝細(xì)胞接種在96孔板[CCK-8和混合淋巴細(xì)胞肝細(xì)胞培養(yǎng)(mixed lymphocyte hepatocyte culture,MLHC)實(shí)驗(yàn)]或放有蓋玻片的六孔板(細(xì)胞跨膜電位檢測(cè))中,以窄譜中波紫外線(xiàn)燈(波峰為311 nm,光源距離實(shí)驗(yàn)細(xì)胞垂直距離為10 cm),按分組要求的照射劑量進(jìn)行照射后,換新鮮培養(yǎng)基置37 ℃5%CO2恒溫箱24 h,每組3個(gè)平行孔,OD值以3孔的平均值表示.

1.2.6 紫外光照射后檢測(cè):CCK-8法檢測(cè)活率:(1)在96孔板中接種肝細(xì)胞懸液(104/mL) 100 μL/孔,每孔＞1000個(gè)細(xì)胞; (2)于培養(yǎng)的1、3、5 d,按各組紫外線(xiàn)處理后的肝細(xì)胞,避光加入10 μLCCK-8溶液,恒溫箱孵育1.5 h; (3)酶標(biāo)儀(450 nm)檢測(cè).

跨膜電位檢測(cè):按線(xiàn)粒體膜電位檢測(cè)試劑盒(JC-1)操作步驟進(jìn)行:(1)紫外線(xiàn)處理的六孔板培養(yǎng)的肝細(xì)胞,按1:1加完全培養(yǎng)基和JC-1工作液,5%CO2孵育30 min,冰浴1×JC-1染色緩沖液洗后取出爬滿(mǎn)肝細(xì)胞的蓋玻片翻轉(zhuǎn)覆蓋在滴有甘油載玻片上; 設(shè)置陽(yáng)性對(duì)照; (2)熒光顯微鏡觀察:綠色熒光提示細(xì)胞處于凋亡早期,線(xiàn)粒體膜電位下降,紅色熒光提示細(xì)胞線(xiàn)粒體膜電位正常,細(xì)胞狀態(tài)較好.

MLHC:(1)96孔板中每孔接種5000個(gè)肝細(xì)胞,經(jīng)紫外線(xiàn)處理后,加入5×105個(gè)淋巴細(xì)胞,設(shè)空白肝細(xì)胞、淋巴細(xì)胞各一組,37 ℃,72 h; (2)每孔加入5 ng/mL的CCK-8 10 μL,4 h; 加100% DMSO 100 μL/孔; (3)酶標(biāo)儀(450 nm)檢測(cè).

細(xì)胞分泌功能的變化:肝細(xì)胞培養(yǎng)液3500 g/min離心8 min,取上清自動(dòng)生化儀檢測(cè)ALB水平.

統(tǒng)計(jì)學(xué)處理所有實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)均以mean±SD表示,采用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析,各組間差異比較采用方差分析,各時(shí)間點(diǎn)組間比較采用t檢驗(yàn),P＜0.05有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異.

2 結(jié)果

2.1 分離的肝細(xì)胞臺(tái)盤(pán)藍(lán)計(jì)數(shù)和培養(yǎng)后細(xì)胞形態(tài)變化新分離的肝細(xì)胞調(diào)細(xì)胞數(shù)為1×105/mL,臺(tái)盼藍(lán)拒染法檢測(cè)活率＞90%.

光鏡下:細(xì)胞透亮,呈圓形或球形,邊界清楚,胞質(zhì)豐富,大小均勻.2 h后細(xì)胞開(kāi)始貼壁,細(xì)胞由圓形向多邊形伸展.同時(shí)細(xì)胞體積增大,48 h后可達(dá)到80%-90%的融合,培養(yǎng)第5天,肝細(xì)胞融合成島狀.小劑量紫外線(xiàn)照射(200 J/m2)處理的肝細(xì)胞與對(duì)照組比較形態(tài)無(wú)明顯差異,貼壁率無(wú)明顯下降(圖1).

2.2 CCK-8法檢測(cè)各組肝細(xì)胞活力變化 CCK-8檢測(cè)結(jié)果(表1):200 J/m2照射后的肝細(xì)胞活率最高,與未照射組無(wú)明顯區(qū)別,明顯高于其他組.肝細(xì)胞處理后培養(yǎng)時(shí)間對(duì)肝細(xì)胞活率有影響; 與對(duì)照組比較,不同強(qiáng)度紫外線(xiàn)照射后培養(yǎng)第1天活率最高,到第5天200 J/m2組活率與對(duì)照組相比無(wú)顯著差異,而其他組則顯著下降.

2.3 紫外線(xiàn)處理后膜電位檢測(cè) 線(xiàn)粒體膜電位正常時(shí),JC-1在線(xiàn)粒體的基質(zhì)中聚集,呈紅色熒光; 反之則形成單體,呈綠色熒光.實(shí)驗(yàn)顯示對(duì)照組和紫外線(xiàn)照射200 J/m2的肝細(xì)胞以紅色熒光為主,隨著照射強(qiáng)度的增大,而呈現(xiàn)棕色(350 J/m2)、黃綠色(550 J/m2)、綠色(750 J/m2)的變化.細(xì)胞培養(yǎng)第一天,細(xì)胞狀態(tài)良好,膜電位檢測(cè)以紅色熒光為主(圖2); 隨著培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng),第3天細(xì)胞貼壁融合達(dá)到80%,細(xì)胞凋亡率也隨著時(shí)間的延長(zhǎng)而上升,膜電位以棕色為主(圖3); 培養(yǎng)第5天膜電位以黃綠色為主(圖4); 說(shuō)明隨著培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng),細(xì)胞膜電位呈下降趨勢(shì).

表1 不同強(qiáng)度紫外線(xiàn)處理后不同培養(yǎng)時(shí)間肝細(xì)胞活率

圖1 對(duì)照組和紫外線(xiàn)處理組肝細(xì)胞形態(tài)及貼壁情況圖(200×).A,B,C:分別為對(duì)照組培養(yǎng)的第1、3、5天; D,E,F:分別為接受200 J/m2紫外線(xiàn)照射后培養(yǎng)的第1、3、5天.

為進(jìn)一步闡明紫外線(xiàn)對(duì)肝細(xì)胞的影響,以酶標(biāo)儀檢測(cè)紅色熒光(590 nm)和綠色熒光(530 nm),計(jì)算出紅色熒光的OD值比上綠色熒光的OD值的比值(表2).紫外線(xiàn)照射200 J/m2后的比值最高,說(shuō)明肝細(xì)胞膜電位穩(wěn)定,細(xì)胞活性最好,隨著照射強(qiáng)度增大,細(xì)胞膜電位隨之下降,差異顯著.隨著培養(yǎng)時(shí)間延長(zhǎng),細(xì)胞性有所下降,但在200 J/m2照射強(qiáng)度下無(wú)顯著性差異.

2.4 MLHC實(shí)驗(yàn) CCK-8實(shí)驗(yàn)得出紫外線(xiàn)照射后培養(yǎng)第1天活率最高,在進(jìn)行紫外線(xiàn)照射后選定第1天進(jìn)行MLHC.共培養(yǎng)3 d后檢測(cè)不同照射強(qiáng)度下的OD值分別為0 J/m2,1.45±0.06; 200 J/m2,0.80±0.04; 350 J/m2,1.77±0.03; 550 J/m2,1.76±0.10; 750 J/m2,1.71±0.07.本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,經(jīng)紫外線(xiàn)照射后的肝細(xì)胞,用MLHC檢測(cè)受體淋巴細(xì)胞對(duì)供體肝細(xì)胞反應(yīng),顯示其并未喪失對(duì)同種MHC抗原的免疫應(yīng)答能力,但發(fā)現(xiàn)200 J/m2照射組的肝細(xì)胞引起淋巴細(xì)胞增值能力下降,與對(duì)照組有顯著區(qū)別(t=2.787,P=0.012),而350 J/m2、550 J/m2、750 J/m2組則引起淋巴細(xì)胞增殖能力有所增強(qiáng).

2.5 對(duì)照組和紫外線(xiàn)處理組肝細(xì)胞在不同培養(yǎng)時(shí)間分泌合成功能的變化 檢測(cè)第1、3、5天各實(shí)驗(yàn)組上清液白蛋白(表3),200 J/m2紫外線(xiàn)組白蛋白水平稍高于對(duì)照組,隨著照射強(qiáng)度的增大,肝細(xì)胞合成分泌功能下降.

3 討論

自上世紀(jì)90年代Alessandri等[11]與Ribbert等首次進(jìn)行HCT以來(lái),HCT技術(shù)有了較大進(jìn)展,目前HCT在人體的臨床報(bào)道僅有140例,部分患者膽紅素水平下降,癥狀改善,但沒(méi)有臨床資料證實(shí)患者進(jìn)行HCT后得到完全的臨床愈合[12],主要是作為等待原位肝移植的過(guò)度治療.有研究認(rèn)為移植細(xì)胞的穩(wěn)定性和移植細(xì)胞抗宿主的免疫排斥反應(yīng)是導(dǎo)致移植療效欠佳的主要原因[13].

表2 不同強(qiáng)度紫外線(xiàn)處理后不同培養(yǎng)時(shí)間肝細(xì)胞膜電位變化

表3 紫外線(xiàn)照射后肝細(xì)胞分泌功能測(cè)定

圖2 不同強(qiáng)度紫外線(xiàn)照射后培養(yǎng)第1天肝細(xì)胞膜電位的變化(100×).

研究證實(shí)通過(guò)調(diào)節(jié)免疫細(xì)胞的功能可以誘導(dǎo)免疫耐受[14],包括B細(xì)胞、T-reg細(xì)胞、樹(shù)突狀細(xì)胞和巨噬細(xì)胞都可以通過(guò)細(xì)胞直接接觸或通過(guò)可溶性介質(zhì)而起到這一調(diào)節(jié)能力.免疫耐受分為中樞耐受和外周耐受,可以誘導(dǎo)效應(yīng)細(xì)胞的死亡或抗原表觀的改變而阻止或減少激活自身反應(yīng)性淋巴細(xì)胞,這也為移植后免疫耐受的誘導(dǎo)提供了思路[15,16].

新分離的單個(gè)肝細(xì)胞較易受損,輕微損傷即可導(dǎo)致凋亡,移植供體進(jìn)入受體通過(guò)門(mén)靜脈后僅有30%的肝細(xì)胞存活[17].因此如何保證新分離并經(jīng)紫外線(xiàn)照射的成熟肝細(xì)胞的質(zhì)量和穩(wěn)定的生物學(xué)功能是非常必要的.本研究采用改良兩步膠原酶灌注法新分離的成人原代肝細(xì)胞臺(tái)盼藍(lán)拒染檢測(cè)活率＞90%.以含有肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子[18]的新配制的完全培養(yǎng)基連續(xù)培養(yǎng)后發(fā)現(xiàn)肝細(xì)胞的形態(tài)和貼壁良好,細(xì)胞的凋亡明顯改善,且發(fā)現(xiàn)小劑量紫外線(xiàn)照射(200 J/m2)處理的肝細(xì)胞與對(duì)照組比較形態(tài)無(wú)明顯差異; 同時(shí)通過(guò)檢測(cè)ALB來(lái)評(píng)估細(xì)胞的合成功能,結(jié)果發(fā)現(xiàn)紫外線(xiàn)照射200 J/m2的肝細(xì)胞在培養(yǎng)第3天的白蛋白合成處于最佳狀態(tài),稍高于對(duì)照組,隨著照射強(qiáng)度的增大而下降.

圖3 不同強(qiáng)度紫外線(xiàn)照射后培養(yǎng)第3天肝細(xì)胞膜電位的變化(100×).

圖4 不同強(qiáng)度紫外線(xiàn)照射后培養(yǎng)第5天肝細(xì)胞膜電位的變化(100×).

由于紫外線(xiàn)可以導(dǎo)致肝細(xì)胞DNA損傷,本研究為了確認(rèn)紫外線(xiàn)照射對(duì)肝細(xì)胞穩(wěn)定性影響的安全強(qiáng)度,以CCK-8法檢測(cè)細(xì)胞活力,表明200 J/m2紫外線(xiàn)照射對(duì)細(xì)胞活力影響不大,與對(duì)照組無(wú)明顯差別,但隨著照射強(qiáng)度的增加和培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng)細(xì)胞活力逐漸降低,說(shuō)明紫外線(xiàn)的強(qiáng)度對(duì)肝細(xì)胞有一定的損傷,而隨著時(shí)間的延長(zhǎng)肝細(xì)胞的凋亡也可能增加.

細(xì)胞凋亡早期,細(xì)胞形態(tài)并不會(huì)發(fā)生明顯的改變,然而細(xì)胞膜電位的改變與細(xì)胞物質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)功能又是息息相關(guān)的,能反應(yīng)細(xì)胞的功能狀態(tài)[19].因此檢測(cè)細(xì)胞的膜電位變化,發(fā)現(xiàn)肝細(xì)胞膜電位在紫外線(xiàn)照射強(qiáng)度200 J/m2時(shí)膜電位穩(wěn)定,細(xì)胞狀態(tài)良好,且培養(yǎng)到第五天也沒(méi)有明顯變化,說(shuō)明經(jīng)過(guò)低劑量照射的肝細(xì)胞膜穩(wěn)定性較好; 隨著照射強(qiáng)度增大,膜電位的差距變大,細(xì)胞膜損傷,細(xì)胞穩(wěn)定性明顯下降.

有文獻(xiàn)[20,21]采用MLHC實(shí)驗(yàn)評(píng)價(jià)體外培養(yǎng)細(xì)胞的免疫原性大小.本研究中的肝細(xì)胞是蛋白質(zhì)抗原,無(wú)供體抗原提呈細(xì)胞(antigen presenting cells,APC)的存在,是受體T細(xì)胞間接識(shí)別供體肝細(xì)胞.將處理后的肝細(xì)胞與T淋巴細(xì)胞混合培養(yǎng),通過(guò)T細(xì)胞的增值評(píng)價(jià)不同照射強(qiáng)度下肝細(xì)胞的免疫原性大小,結(jié)果顯示經(jīng)紫外線(xiàn)照射后的肝細(xì)胞,并未喪失對(duì)同種MHC抗原的免疫應(yīng)答能力.但不同的照射強(qiáng)度對(duì)肝細(xì)胞免疫原性的影響是有差異的,發(fā)現(xiàn)200 J/m2照射的肝細(xì)胞引起淋巴細(xì)胞增值能力下降,說(shuō)明經(jīng)過(guò)小劑量紫外線(xiàn)處理的肝細(xì)胞免疫原性下調(diào); 但350 J/m2、550 J/m2、750 J/m2組卻有升高,可能與肝細(xì)胞膜受損傷,表達(dá)了相應(yīng)的抗原成分有關(guān).Venkateshan等體外研究發(fā)現(xiàn)紫外線(xiàn)照射肝細(xì)胞后引起T細(xì)胞活化,產(chǎn)生的CD4+T細(xì)胞分泌細(xì)胞因子IL-10,但不分泌IL-4和IFN-Y; 另外,單核細(xì)胞/巨噬細(xì)胞和樹(shù)突狀細(xì)胞作為APC,供體肝細(xì)胞植入后,被APC識(shí)別并提呈給T細(xì)胞,是免疫應(yīng)答發(fā)生的基礎(chǔ).通過(guò)紫外線(xiàn)照射誘導(dǎo)肝細(xì)胞表觀遺傳改變,使APC無(wú)法識(shí)別,T細(xì)胞活化受阻,從來(lái)導(dǎo)致免疫耐受[22].

綜上所述,200 J/m2的紫外線(xiàn)照射可以降低成人原代肝細(xì)胞的免疫原性,且在這個(gè)強(qiáng)度下,肝細(xì)胞的活力和合成功能得到較好保留,該研究結(jié)果或許在今后的HCT臨床應(yīng)用中減少免疫排斥有一定意義.

文章亮點(diǎn)

實(shí)驗(yàn)背景

肝細(xì)胞移植(hepatocyte transplantation,HCT)是治療肝衰竭非常有前景的手段,雖然很多因素影響其有效性,但受體的免疫排斥反應(yīng)是影響HCT療效的主要因素,為了減少其排異反應(yīng),臨床不得不應(yīng)用大量的免疫抑制劑而增加其風(fēng)險(xiǎn); 有實(shí)驗(yàn)證實(shí)紫外線(xiàn)可引起免疫抑制,不過(guò)紫外線(xiàn)也能導(dǎo)致細(xì)胞DNA損傷,那么如何尋求一種平衡,既能降低肝細(xì)胞免疫原性,又能避免紫外線(xiàn)對(duì)肝細(xì)胞的過(guò)度損傷,從而較好保存肝細(xì)胞的穩(wěn)定性和細(xì)胞合成功能.所以尋找適合的紫外線(xiàn)照射強(qiáng)度或許可以達(dá)到這樣的效果.

實(shí)驗(yàn)動(dòng)機(jī)

本研究的主題就是通過(guò)不同的實(shí)驗(yàn)證實(shí)適合的紫外線(xiàn)強(qiáng)度既能引起相應(yīng)的免疫抑制,又不至于引起肝細(xì)胞的穩(wěn)定性的破壞而影響細(xì)胞功能.擬解決的問(wèn)題是原代肝細(xì)胞的經(jīng)紫外線(xiàn)照射對(duì)細(xì)胞活力、線(xiàn)粒體膜、蛋白合成功能和引起淋巴細(xì)胞增殖活性的影響.這些問(wèn)題的解決對(duì)HCT的臨床應(yīng)用有較好的促進(jìn)作用.

實(shí)驗(yàn)?zāi)繕?biāo)

通過(guò)實(shí)驗(yàn)確定適合的紫外線(xiàn)照射強(qiáng)度,在這一強(qiáng)度下可以抑制肝細(xì)胞的免疫反應(yīng),且實(shí)驗(yàn)肝細(xì)胞的生物學(xué)活性不受或較少受影響.實(shí)現(xiàn)這一目標(biāo)可以提高移植細(xì)胞的存活效率,減少或避免免疫抑制劑的應(yīng)用.

實(shí)驗(yàn)方法

本研究取外科手術(shù)切除的良性病變肝組織,經(jīng)改良的膠原酶灌注法分離得到成人原代肝細(xì)胞,分為對(duì)照組(0 J/m2)和四個(gè)不同強(qiáng)度紫外線(xiàn)照射組(分別為200、350、550和750 J/m2),臺(tái)盤(pán)藍(lán)拒染和CCK-8法檢測(cè)肝細(xì)胞的活力; JC-1檢測(cè)線(xiàn)粒體膜電位的變化,通過(guò)熒光顯微鏡可以觀察膜電位變化導(dǎo)致的細(xì)胞凋亡,并通過(guò)酶標(biāo)儀讀取OD值進(jìn)一步量化膜損傷程度; 直接混合淋巴細(xì)胞肝細(xì)胞培養(yǎng)(mixed lymphocyte hepatocyte culture,MLHC)檢測(cè)紫外線(xiàn)對(duì)肝細(xì)胞的引起淋巴細(xì)胞增殖的效率,全自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)肝細(xì)胞的白蛋白的合成功能.從不同角度檢測(cè)紫外線(xiàn)對(duì)肝細(xì)胞的影響.

實(shí)驗(yàn)結(jié)果

本研究基本達(dá)到實(shí)驗(yàn)?zāi)康?首先成功分離來(lái)源于成人良性病變手術(shù)切除肝組織的肝細(xì)胞,胎盤(pán)藍(lán)拒染活率在90%以上,在200 J/m2紫外線(xiàn)強(qiáng)度照射組,CCK-8檢測(cè)肝細(xì)胞的活率和形態(tài)學(xué)上與對(duì)照組無(wú)差異; JC-1法無(wú)論從熒光顯微鏡下觀察所見(jiàn)還是酶標(biāo)儀量化計(jì)算結(jié)果都展示了較好的線(xiàn)粒體膜穩(wěn)定性; 生化結(jié)果也證實(shí)了在這一強(qiáng)度下肝細(xì)胞有較好的白蛋白合成功能; MLHC實(shí)驗(yàn)也表現(xiàn)出了肝細(xì)胞引起淋巴細(xì)胞增殖抑制現(xiàn)象,且有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義.而增大照射強(qiáng)度則肝細(xì)胞則顯示肝細(xì)胞的活力衰退、膜電位下降,細(xì)胞凋亡,從而細(xì)胞的蛋白合成能力減弱,并且發(fā)現(xiàn)肝細(xì)胞引起淋巴細(xì)胞增殖能力加強(qiáng),這可能與因肝細(xì)胞受損表達(dá)了肝細(xì)胞相表觀藏的抗原有關(guān).

實(shí)驗(yàn)結(jié)論

發(fā)現(xiàn)低劑量的紫外線(xiàn)照射可降低肝細(xì)胞引起淋巴細(xì)胞增殖活性; 同時(shí)還能較好的保存肝細(xì)胞的活力、線(xiàn)粒體膜電位的穩(wěn)定性,從而保證了細(xì)胞功能的正常發(fā)揮,通過(guò)本研究也證實(shí)了適當(dāng)?shù)淖贤饩€(xiàn)照射可引起免疫抑制現(xiàn)象.這些發(fā)現(xiàn)或許對(duì)HCT的臨床實(shí)踐有一定的應(yīng)用價(jià)值.

展望前景

本研究的教訓(xùn)是做增殖實(shí)驗(yàn)只用了經(jīng)典的MLHC實(shí)驗(yàn)檢驗(yàn)肝細(xì)胞引起淋巴細(xì)胞增殖活力下降,而應(yīng)該選用更多的方法證實(shí)這一現(xiàn)象,比如EdU實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞增殖過(guò)程中的DNA來(lái)進(jìn)一步說(shuō)明其增殖效應(yīng).未來(lái)的研究方向是探索更好的肝細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)減少和組長(zhǎng)肝細(xì)胞凋亡,并一步研究紫外線(xiàn)對(duì)肝細(xì)胞表觀生物學(xué)性狀的影響,說(shuō)明其導(dǎo)致免疫抑制的機(jī)制.