bFGF 及PDGF 聯(lián)合應用對大鼠脛骨骨折愈合的影響

童九輝,王 斌,袁 鶴,張 華,宋永周,馬 維

(河北醫(yī)科大學第二醫(yī)院骨科,石家莊 050000)

骨折不愈合是骨科醫(yī)生共同面對的問題。Mills[1]通過研究發(fā)現(xiàn)蘇格蘭地區(qū)大約有超過千人的患者存在不同程度的骨折延遲愈合或不愈合,在整個英國這個數(shù)據(jù)可以達到11700 人。 促進骨折愈合的因素有很多,Morley 等[2]及劉繼超等[3]發(fā)現(xiàn)腦外傷合并骨折時堿性成纖維細胞生長因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)以及血小板衍生生長因子(platelet derived growth factor ,PDGF)的表達水平增高等。 郭志豪等[4]和唐彥峰等[5]也分別通過骨折周圍局部應用bFGF、PDGF 證實其可以加速骨折愈合。 大量實驗已經(jīng)證明單獨應用bFGF 或PDGF 可以加速骨折愈合,但對其可能的作用機制并未闡述清楚。 本實驗旨在通過聯(lián)合應用bFGF、PDGF,來了解其對大鼠骨折愈合過程的影響,研究其作用機制,也為藥物未來能促進骨折愈合的臨床應用提供研究基礎。

1 材料和方法

1.1 實驗動物

48 只成熟雄性清潔級SD 大鼠,約8 周齡,體重在210 ～230 g,購自河北省實驗動物中心[SCXK(冀)2018-004],無菌實驗操作于河北醫(yī)科大學第二醫(yī)院動物實驗室進行[SYXK(冀)2016-003],已通過河北醫(yī)科大學第二醫(yī)院科研倫理委員會的批準(2019-P019),并遵照實驗動物使用的3R 原則對實驗動物提供人道關(guān)懷。

1.2 主要試劑與儀器

堿性成纖維細胞生長因子(廠家:武漢華美,貨號:CSB-YP008625RB)；血小板衍生生長因子(廠家:武漢華美,貨號:CSB-YP017708RA)；抗體點樣保護液(北京博奧生物,貨號:440015)；牛血清白蛋白(BIOFROXX 公司)；bFGF 抗體(廠家:北京博奧森,貨號:bs-0217R)；PDGF 抗體(廠家:北京博奧森,貨號:bs-10073R)；補體C3 抗體(廠家:北京博奧森,貨號:bs-2934R)；PBST 洗片緩沖液(河北博海生物自配)；Streptavidin-CY3(廠家:艾美捷科技公司貨號:7100-12)；抗體標記脫鹽柱(廠家:pierce 公司,貨號:43230)；Bio MixerⅡ三維旋轉(zhuǎn)雜交儀(北京博奧生物)；Smart Arrayer 微陣列芯片點樣系統(tǒng)(北京博奧生物)；Slide Washer 8 洗片儀(北京博奧生物)。

PBST 洗片緩沖液(1 L)配方:氯化鈉8.0 g,磷酸氫二鈉2.9 g,氯化鈉8.0 g,氯化鉀0.2 g,磷酸二氫鉀0.2 g,1L 的ddH2O 溶解,加入0.5%的吐溫20。

1.3 實驗方法

1.3.1 動物分組

所有動物利用隨機數(shù)字表法將其分成4 組(A(bFGF 組),B(PDGF 組),C(bFGF+PDGF 聯(lián) 合組),D 組(空白對照組))。 12 只/組,組間不存在明顯統(tǒng)計學差異。

1.3.2 大鼠脛骨骨折模型的建立

預實驗后應用3%的戊巴比妥鈉以40 mg/kg行大鼠腹腔內(nèi)注射麻醉,左小腿術(shù)區(qū)備皮顯露皮膚,常規(guī)消毒鋪單。 于大鼠左小腿前外側(cè)切開皮膚及皮下組織,頓性分離肌肉組織并充分暴露脛骨,并使用骨科線鋸在脛骨中部橫斷制造簡單骨折。 再使用細克氏針沿髓腔置入并固定遠近骨折端。 骨折局部固定穩(wěn)定,并間斷縫合皮膚。 慶大霉素以50 000 U/d 肌注,每天一次,連續(xù)5 d。切口敷料局部包扎。

1.3.3 給藥方式

各組均于術(shù)后第3 天在骨折斷端周圍局部經(jīng)皮注射藥物(于骨折線上方5 mm 左右,針頭刺及骨面,向下滑至斷端),1 次/天,連續(xù)7 d。 給藥方式:A組100 ng bFGF+0.3 mL 生理鹽水[6],B 組100 ng PDGF+0.3 mL 生理鹽水[7],C 組100 ng bFGF+100 ng PDGF+0.3 mL 生理鹽水,D 組0.3 mL 生理鹽水。

1.3.4 標本采集及觀察

在術(shù)后第2 周及第4 周從各組隨機選取6 只大鼠,行患肢X 線攝片。 由我科室2 名副主任醫(yī)師應用Lane-Sandhu X 線評分方法[8]對各組X 線片行骨折愈合評價。 采用評分者盲法,取兩者平均值。

股動脈取血后將大鼠處死。 血液離心后將上清液放于-70℃冰箱待檢。

將大鼠患肢切開并顯露骨痂,在骨痂遠近各1 cm處截取脛骨,留取骨痂標本。 行脫鈣、中和、脫水、透明、浸蠟、切片、HE 染色、組織學觀察。 利用多功能真彩色細胞圖像分析管理系統(tǒng)計量分析骨小梁成骨指數(shù)(index of osteoblast,IOB)及平均骨小梁寬度(trabecular width,TW)。

1.3.5 ALP、VEGF、BMP-2 及IGF-1 含量的測定(蛋白質(zhì)芯片法)

(1)預制蛋白質(zhì)芯片

化學修飾化處理載體玻片,把點樣緩沖液及抗體采用等比例混勻,再利用微陣列芯片點樣儀進行點樣以及蛋白固定等處理。 4 種待測目標抗體進行3 點重復點樣,同時留取3 個空白對照點。 在37℃環(huán)境中把抗體蛋白固定并抽真空完成后再進行干燥及抽真空塑封處理。 芯片置于4℃保存。

(2)蛋白質(zhì)芯片的檢測

利用Smart ArrayerTM微陣列芯片點樣儀進行蛋白芯片的制作。 把蛋白芯片連同標本一起置于室溫下復溫并保持20 min。 打開芯片的塑封膜并粘圍欄后放入芯片槽中,并在槽的兩側(cè)倒入100 μL 左右的蒸餾水進行保濕。 加5%BSA 封閉液室溫平衡30 min,點入血清30 μL、蓋蓋并固定穩(wěn)定。 置于三維旋轉(zhuǎn)雜交儀中37℃恒溫反應1 h。 采用洗片儀進行洗片。 使用PBST 進行洗滌處理1 h。 將有CY3 熒光素的抗補體C3 二抗加入并進行反應。 再次37℃環(huán)境下孵育1 h。 再次洗片、干燥處理。 利用芯片閱讀系統(tǒng)對蛋白芯片進行分析并進一步計算出四種檢測目標的濃度。

1.4 統(tǒng)計學方法

本實驗中的數(shù)據(jù)使用SPSS 22.0 進行統(tǒng)計分析處理。 數(shù)據(jù)采用平均數(shù)±標準差()表示。 將各組實驗數(shù)據(jù)采用方差分析,采用LSD 法對組間進行兩兩比較。 Lane-Sandhu X 線評分采用重復測量方差分析。 檢驗水準α = 0.05,P ＜0.05 有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 大體觀察

術(shù)后2 周觀察可見:各組大鼠患肢內(nèi)固定穩(wěn)點,肢體力線可,但行動時均可見明顯跛行。 術(shù)后4 周觀察可見:A、B 組大鼠患肢骨折處有骨性骨痂形成；C 組有明顯骨性骨痂形成,部分標本中甚至有骨橋形成；D 組大鼠可見少量骨性骨痂出現(xiàn)。

2.2 X 線片表現(xiàn)

術(shù)后2 周攝片:D 組骨折處局部骨折線清晰；A、B、C 組骨折線模糊,骨折間隙小,C 組優(yōu)于其他組(圖1)。

術(shù)后4 周攝片:D 組骨折線仍清楚可見；A 組和B 組大鼠患肢骨折線基本消失,可見外骨痂；C 組骨折線明顯消失(圖2)。

術(shù)后各觀察點的Lane-Sandhu X 線評分可見:C組得分均高于其他各組,且實驗組A、B 兩組也均高于對照組D 組且差異有統(tǒng)計學意義,A、B 組間無統(tǒng)計學差異(P＞0.05)。 (見表1)

2.3 組織學觀察

術(shù)后2 周:A、B 及C 組骨折處均可見纖維性骨痂和軟骨性骨痂形成,可見新生骨小梁、新生血管形成,A、B 兩組間無明顯差異,C 組最優(yōu)； D 組可見纖維骨痂和部分軟骨骨痂形成(圖3)。

術(shù)后4 周:A 組和B 組骨小梁增多并交織成網(wǎng)格狀,局部有部分成熟板層骨形成,髓腔中存在部分骨髓細胞；C 組可見成熟板層骨,髓腔內(nèi)出現(xiàn)大量骨髓細胞；D 組骨小梁欠成熟(圖4)。

2.4 骨痂骨組織計量與分析

各觀察點中,C 組標本中骨痂內(nèi)IOB 值及TW值均優(yōu)于其他各組,A、B 組大于D 組,且有統(tǒng)計學意義。 A、B 組間無統(tǒng)計學差異(P＞0.05)。 (見表2、表3)

2.5 血清中ALP 含量的檢測

ALP 的含量于術(shù)后2 周及4 周時C 組最高,有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。 術(shù)后2 周可見:A、B 組均大于D 組但低于C 組(P＜0.05),A、B 組間無統(tǒng)計學差異。 術(shù)后4 周結(jié)果示:A、B 及D 組三組間無明顯差異(P＞0.05)。 (見表4)

圖1 術(shù)后2 周各組代表性X 線表現(xiàn)Note.A, bFGF group.B, PDGF group.C, bFGF + PDGF group.D, control group.Figure 1 Representative X-ray performance of each group 2 weeks after surgery

表1 術(shù)后各組Lane-Sandhu X 線評分()Table 1 Lane-Sandhu X-ray score of each group after operation

表1 術(shù)后各組Lane-Sandhu X 線評分()Table 1 Lane-Sandhu X-ray score of each group after operation

注:A、B、D 組與C 組比較*P＜0.05；A、B 組與D 組比較#P＜0.05；2周PAB=0.341, 4 周PAB=0.742。Note.Group A, B, and D compared with Group C,*P＜0.05.Groups A and B compared with Group D,#P＜0.05.2 weeks PAB=0.341,4 weeks PAB=0.742.

組別Groups 2 周2 weeks 4 周4 weeks A 3.83±0.75*# 6.33±0.52*#3.50±0.55*# 6.17±0.75*#C 4.67±0.52 9.00±1.09 D 1.33±0.52* 3.83±0.98*B

2.6 血清中VEGF 的含量

術(shù)后2 周時,A、B、C 組VEGF 的含量均高于D組,C＞B＞A＞D 組,有統(tǒng)計差異(P＜0.05)。 術(shù)后4 周時, C 組高于其他各組(P＜0.05)。 A、B、D 各組間無統(tǒng)計學差異(P＞0.05)。 (見表5)

2.7 血清中BMP-2 的含量

術(shù)后2 周時C＞B＞A、D(P＜0.05)。 A 組與D 組組間比較無明顯差異(P＞0.05)。 術(shù)后4 周結(jié)果顯示:四組組間均無明顯統(tǒng)計學差異(P＞0.05)。 (見表6)

2.8 血清中IGF-1 的含量

術(shù)后2 周時,C＞B＞A＞D,且差異存在統(tǒng)計學意義(P ＜0.05)。 術(shù)后4 周時, C 組大于其他各組(P ＜0.05),其余三組組間無統(tǒng)計學差異(P＞0.05)。 見表7。

3 討論

如何促進骨折愈合一直以來都是困擾骨科醫(yī)生的一個難題。 在以往的研究中,Martijn Hofman等[9-10]提出:在重度的顱腦外傷之后,患者的血清與腦脊液中均可見檢測出一些細胞因子較正常人水平明顯增高,并認為這些因子在加快骨折愈合的過程中發(fā)揮了作用。 這其中就包括具有驅(qū)化成骨作用的bFGF 及PDGF。 已有研究證明局部單獨注射這兩種因子可以促進骨折愈合。 這也給了我們啟發(fā),局部注射生長因子可以是一種簡單有效的治療手段,是否可以通過局部注射多種因子而起到促進或抑制骨折愈合的作用呢,又或者其促進骨折愈合的機制是什么。 目前對于這些還沒有答案,因此本實驗選用兩種因子,通過觀察其聯(lián)合應用后的作用來研究其對大鼠脛骨骨折愈合過程的影響作用,探尋其作用的機制。堿性成纖維細胞生長因子是已經(jīng)被證實的可以促進成骨作用的一種多肽,具有促進成骨細胞的增殖與分化并加速鈣鹽的沉積的作用[11]；此外其還有很強的刺激血管再生的作用,并在骨折愈合過程的早期表達[12-13]。 Wildburger 等[14]人發(fā)現(xiàn):嚴重腦外傷合并長骨骨折的患者血清中bFGF 的含量比單純骨折組高。 顧熊華等[15]則將bFGF 局部注射在兔橈骨骨折處并證實了bFGF 的加速骨折愈合的作用。

圖2 術(shù)后4 周各組代表性X 線表現(xiàn)Note.A, bFGF group.B, PDGF group.C, bFGF + PDGF group.D, control group.Figure 2 Representative X-ray performance of each group 4 weeks after surgery

圖3 術(shù)后2 周各組代表性組織學表現(xiàn)(HE)Note.A, bFGF group.B, PDGF group.C, bFGF + PDGF group.D, control group.Figure 3 Representative histological findings of each group 2 weeks after operation

圖4 術(shù)后4 周各組代表性組織學表現(xiàn)(HE)Note.A, bFGF group.B, PDGF group.C, bFGF + PDGF group.D, control group.Figure 4 Representative histological performance of each group 4 weeks after operation

表2 術(shù)后2 周各組痂中骨組織形態(tài)測定分析()Table 2 Analysis of bone tissue morphology in scabs of each group 2 weeks after operation

表2 術(shù)后2 周各組痂中骨組織形態(tài)測定分析()Table 2 Analysis of bone tissue morphology in scabs of each group 2 weeks after operation

注:A、B、D 組與C 組IOB 及TW 比較,*P＜0.05；A、B 組與D 組比較#P＜0.05；I0B(PAD=0.013,PBD=0.003,PCD=0.000)。Note.Group A, B, and D compared with IOB and TW in Group C,*P ＜0.05.Group A and B compared with group D,#P ＜0.05.I0B (PAD =0.013, PBD=0.003, PCD=0.000).

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表3 術(shù)后4 周各組骨痂中骨組織形態(tài)測定分析()Table 3 Analysis of bone tissue morphology in callus at 4 weeks after operation

表3 術(shù)后4 周各組骨痂中骨組織形態(tài)測定分析()Table 3 Analysis of bone tissue morphology in callus at 4 weeks after operation

注:A、B、D 組與C 組比較, *P ＜0.05；A、B 組與D 組比較, #P ＜0.05；I0B(PAD,PBD,PCD均＜0.05)。Note.Group A,B,and D compared with Group C,*P＜0.05.Groups A and B compared with Group D,#P＜0.05.I0B(PAD＜0.05,PBD＜0.05,PCD＜0.05).

組別Groups骨小梁成骨指數(shù)(mm2)IOB Trabecular bone formation index平均骨小梁寬度(μm)TW Trabecular width A 298.36±14.11*# 64.25±4.09*#B 304.90±15.23*# 65.33±5.23*#C 338.65±17.39 73.57±5.02 D 231.33±13.98* 50.56±3.27*

表4 各組血清中ALP 的含量()Table 4 The content of ALP in serum of each group

表4 各組血清中ALP 的含量()Table 4 The content of ALP in serum of each group

注:A、B、D 組與C 組比較, *P ＜0.05；A、B 組與D 組比較, #P ＜0.05。 2 周(PAD = 0.022,PBD = 0.003,PCD = 0.000)；4 周(PAC =0.005,PBC=0.027,PCD=0.007)。Note.Group A, B, and D compared with Group C,*P＜0.05.Groups A and B compared with Group D, #P ＜0.05.2 weeks(PAD =0.022,PBD =0.003,PCD=0.000).4 weeks(PAC=0.005,PBC=0.027,PCD=0.007)

組別Groups血清中ALP 的含量(ng/mL)Serum ALP content 2 周2 weeks 4 周4 weeks A 140.68±15.14*# 103.68±13.86*B 152.16±13.57*# 112.99±12.69*C 318.13±19.21 134.48±15.44 D 114.12±18.02* 106.29±16.69*

表5 各組血清中VEGF 的含量()Table 5 Serum VEGF content in each group

表5 各組血清中VEGF 的含量()Table 5 Serum VEGF content in each group

注:A、D 組與B 組比較,◆P＜0.05；A、B、D 組與C 組比較,*P＜0.05；A、B 組與D 組比較,#P＜0.05。 2 周(PAC=0.000,PBC=0.000,PCD=0.000,PAB=0.019)；4 周(PAC=0.000,PBC=0.000,PCD=0.000)。Note.Group A and D compared with Group B,◆P＜0.05.Group A, B and D compared with Group C,*P＜0.05.Group A and B compared with Group D,#P＜0.05.2 weeks(PAC =0.000,PBC =0.000,PCD =0.000,PAB=0.019).4 weeks(PAC=0.000,PBC=0.000,PCD=0.000).

組別Groups血清中VEGF 的含量(pg/mL)Serum VEGF content 2 周2 weeks 4 周4 weeks A 238.25±15.33*#◆ 222.96±14.16*B 266.40±18.52*# 230.85±13.59*C 344.61±18.19 285.97±16.92 D 211.15±18.48*◆ 208.06±15.91*

表6 各組血清中的BMP-2 含量()Table 6 BMP-2 content in serum of each group

表6 各組血清中的BMP-2 含量()Table 6 BMP-2 content in serum of each group

注:A、D 組與B 組比較,◆P＜0.05；A、B、D 組與C 組比較,*P＜0.05。2 周(PAD=0.021,PBD=0.035,PCD=0.001,PAB=0.039)。Note.Group A and D compared with Group B,◆P＜0.05.Group A, B and D compared with Group C, *P＜0.05.2 weeks(PAD=0.021,PBD=0.035,PCD=0.001,PAB=0.039).

組別Groups血清中BMP-2 的含量(pg/mL)Serum BMP-2 content 2 周2 weeks 4 周4 weeks A 106.62±14.73*◆ 103.31±15.78 B 122.67±13.61* 98.86±18.31 C 143.96±18.19 108.32±16.96 D 106.15±14.59*◆ 96.82±14.24

表7 各組血清中的IGF-1 含量()Table 7 IGF-1 content in serum of each group

表7 各組血清中的IGF-1 含量()Table 7 IGF-1 content in serum of each group

注:A 組B 組相比,◆P＜0.05；A、B、D 三組與C 組相,*P＜0.05；A、B組與D 組比較,#P ＜0.05。 2 周(PAD = 0.032,PBD = 0.001,PCD =0.000,PAB=0.011,PAC = 0.000,PBC = 0.004)；4 周(PAC = 0.000,PBC=0.001,PCD=0.000)。Note.Group A compared with Group B,◆P ＜0.05.Group A, B and D compared with Group C,*P＜0.05.Group A and B compared with Group D,#P＜0.05.2 weeks(PAD=0.032,PBD=0.001,PCD=0.000,PAB=0.011,PAC=0.000,PBC=0.004).4 weeks(PAC=0.000,PBC=0.001,PCD=0.000)。

組別Groups血清中IGF-1 的含量(pg/mL)Serum IGF-1 content 2 周2 weeks 4 周4 weeks A 310.42±18.65*#◆ 298.23±17.09*B 337.67±16.39*# 302.53±18.56*C 381.06±27.89 343.29±16.03 D 290.36±14.41* 287.39±13.92*

血小板衍生生長因子是一種于血小板中提取出的成骨因子。 其主要有兩種功能:促進血小板、成纖維細胞等有絲分裂；對成骨細胞等有很強的驅(qū)化作用[16]。 其可以調(diào)節(jié)VEGF 的表達,促進損傷組織的修復與重建[17]。 徐亞青[18]等人通過實驗認為:在大鼠骨折愈合過程的早期及中晚期均檢測到PDGF 以及PDGF mRNA 的表達增強,因此可以認為PDGF 的表達在骨折修復的全程中均起作用。 此前已有學者[19]證明局部使用該藥物使糖尿病大鼠的骨折修復過程加快。

本實驗中我們分別對大鼠脛骨骨折的大體標本、影像學及組織學進行了分析,結(jié)果可見:首先,在術(shù)后2 周及4 周,實驗組骨痂大小均優(yōu)于對照組,且骨折線消失快,Lane-Sandhu X 線評分均高于對照組,骨痂組織的成熟度高,骨痂內(nèi)IOB 值及TW 值均較高。 其次,C 組在各觀察點的實驗數(shù)據(jù)在上述觀察指標中均高于其他三組。 因此我們不難看出,在本實驗中單獨將bFGF 或PDGF 應用于骨折局部具有加速骨折愈合的作用,且與Al-Zube 的觀點一致；此外,在骨折局部聯(lián)合使用bFGF 及PDGF 可產(chǎn)生優(yōu)于單獨使用時的促進骨折愈合的作用。

在本實驗中我們不僅研究了兩種藥物局部及聯(lián)合應用對骨折愈合過程的作用,我們還設立了四個觀察指標:ALP、VEGF、BMP-2 及IGF-1。 堿性磷酸酶(ALP)是一種含鋅糖蛋白,其表達于人體多種組織器官中,且研究表明ALP 參與了成骨作用并可反映骨折的修復與重建。 李建明等[20]認為:ALP 在機體中的水平可以作為骨折愈合過程的初期反映骨折愈合能力的一種簡單而準確觀察指標。 本實驗發(fā)現(xiàn):聯(lián)合應用bFGF 和PDGF 對ALP 的表達具有同向促進作用。 ALP 一直被認為是能夠早期了解骨折愈合過程中的成骨及骨鈣化活動的一種因子。 這也說明了聯(lián)合用藥較優(yōu)的促成骨作用。

血管內(nèi)皮生長因子是人們研究發(fā)現(xiàn)的一種可以促進血管再生與修復的關(guān)鍵因子。 Pi 等[21]人則通過實驗證明:VEGF 的表達可以增強骨形態(tài)發(fā)生蛋白9 誘導的成骨分化和骨形成,繼而產(chǎn)促進骨折愈合。 本實驗發(fā)現(xiàn):單獨應用bFGF 或PDGF 可使血清中VEGF 表達增強,但PDGF 的作用比bFGF強；聯(lián)合應用使VEGF 表達更強。 bFGF 與PDGF 同向增強VEGF 的表達,或許是其聯(lián)合作用過程中促進骨折愈合的作用機制之一。 BMP-2 是被證實的在骨折愈合過程的早期便可以單獨介導間充質(zhì)細胞成骨分化的因子,骨組織形成的關(guān)鍵調(diào)控因子,缺少BMP 的表達就不能產(chǎn)生成骨作用[22]。 Hara等[23]人通過研究發(fā)現(xiàn)BMP 可以促進骨折愈合,也是骨折愈合過程中重要的檢測指標。

在本實驗中局部應用bFGF 并未對血清中BMP-2 表達產(chǎn)生明顯影響；而應用PDGF 則可增強BMP-2 的表達效果；但當聯(lián)合使用二者是,則表現(xiàn)出了更強的BMP-2 表達。 因此我們對實驗結(jié)果分析認為:bFGF 可以增強PDGF 對大鼠BMP-2 的表達的促進作用。 bFGF 增強PDGF 對BMP-2 的表達或許是聯(lián)合過程中加速骨折的一種機制,但其是通過何種途徑調(diào)節(jié)PDGF 功能仍需進一步研究。

IGF-1 被認為是一種介導生長激素發(fā)揮作用的活性蛋白多肽。 Locatelli 等[24]認為IGF-1 參與了調(diào)控細胞分化成骨,促進了ALP 的表達及骨礦化。 吳文俠等[25]報道:在腦外傷合并骨折的大鼠模型中,其骨痂中IGF-1 的表達明顯高于單純骨折組,并認為其加速了骨折的修復。 通過本實驗可以看出:分別使用這兩種藥物可以提高大鼠血清中IGF-1 的表達,聯(lián)合使用可使該作用更明顯,也加速了骨折的愈合。 因此,bFGF 與PDGF 對增強大鼠IGF-1 的表達有同向促進作用。 因此,這或許也是其加速骨折愈合的另一種作用機制。

綜上所述,骨折部位局部聯(lián)合應用bFGF、PDGF可以較單獨應用明顯的促進骨折的愈合過程。 聯(lián)合使用bFGF 及PDGF 兩種藥物還可以提高大鼠血清中ALP、VEGF、BMP-2 及IGF-1 四種因子的表達水平,且具有同向促進作用。 這或許是聯(lián)合應用bFGF 與PDGF 促骨折愈合較優(yōu)的機制之一,促進骨折局部新生血管形成,改善局部血運,促進骨基質(zhì)的形成,并增強ALP 的活性,形成骨鈣素,促進成骨[26]。

在實驗中我們使用蛋白質(zhì)芯片技術(shù)來高效、準確的檢測血清中的多種指標。 蛋白質(zhì)芯片是一種高通量定量分析、快速、并行的檢測方法。 目前該方法仍僅多用于腫瘤指標的篩查等工作,對骨科領(lǐng)域的多因子檢測使用仍較少。 我們創(chuàng)新性的將其用于骨科實驗中,也為其他實驗工作的多因子檢測提供參考方法。

本實驗證為臨床早期干預治療骨折不愈合或延遲愈合患者提供了實驗參考。 但本實驗對骨折愈合的評價仍存在不足。 Micro-CT 是目前一種能細微觀察并定量分析骨折局部骨小梁變化的方法,其具有良好的空間分辨率。 除了應了解骨折局部微觀變化外,機械力學的改變也可以反映其機械功能的修復情況。 以上兩種方法因?qū)嶒炂餍迪拗莆茨軕迷诒緦嶒炛?后期需不斷完善相關(guān)實驗工作。 此外,兩種是否存在更優(yōu)的聯(lián)合藥物選擇也仍需進一步探究。