妊娠晚期B族鏈球菌感染孕婦陰道微生物菌群分析

張萍萍 孫素玉 沈旭娜

1.浙江省溫州市第六人民醫(yī)院(325000)2.浙江省溫州市中心醫(yī)院

健康女性的陰道和直腸中包含乳酸桿菌、大腸埃希菌、B族鏈球菌(GBS)等多種細(xì)菌，而且隨著女性年齡的增長，微生物種群會出現(xiàn)變化和接替[1]。GBS常寄生于人體的下消化道及泌尿生殖道，屬于條件致病菌[2]。在20世紀(jì)70年代，是圍產(chǎn)期母嬰感染的主要致病菌之一[3],也是嬰幼兒敗血癥和腦膜炎最常見的致病菌。本研究以妊娠晚期孕婦GBS感染為例，探求陰道微生物與之關(guān)系及可能影響。

1 資料與方法

1.1 研究對象及分組

收集2014年8月-2018年5月本院就診妊娠晚期孕婦80例作為研究對象，根據(jù)陰道分泌物檢驗結(jié)果將GBS感染陽性孕婦設(shè)為觀察組(24例)，陰性孕婦設(shè)為對照組(56例)。納入標(biāo)準(zhǔn)：妊娠晚期；心肺功能健全，無全身性疾?。恢椴⑼膺M行帶菌狀況檢查；標(biāo)本采集前一周未使用抗生素。排除標(biāo)準(zhǔn)：多胎，合并其他生殖道感染者；合并慢性腎炎，高血壓，糖尿病史者；急性感染。本研究經(jīng)本院倫理委員會審批。

1.2 研究方法

采集研究對象孕36～37周陰道分泌物，檢查陰道微生態(tài)及GBS感染。依據(jù)曾志銘等提出的通過優(yōu)勢菌菌群密集度和多樣性分布≥Ⅱ級、優(yōu)勢菌為革蘭氏陽性桿菌、病原微生物陰性評價陰道菌群的微生態(tài)，各指標(biāo)中有一項異常則為微生態(tài)失調(diào)[4]，陰道PH>4.5為異常。陰道分泌物采集及細(xì)菌培養(yǎng)：將1根無菌陰道棉拭子放置于陰道下1/3處旋轉(zhuǎn)一周后，再將其放置于肛門周圍再旋轉(zhuǎn)一周。將棉拭子置于Amies無碳運送培養(yǎng)基，室溫下放入微生物室進行肉湯培養(yǎng)基增殖，培養(yǎng)18h后將其接種到大豆酪蛋白瓊脂(TSA)Ⅱ5%SB培養(yǎng)基中培養(yǎng)與細(xì)菌鑒定。陰道清潔度檢測：用無菌棉拭子采集分泌物涂片并進行革蘭染色，在高倍顯微鏡下尋找檢查白假絲酵母菌、滴蟲、加德納菌等，清潔度判斷嚴(yán)格遵守《全國臨床檢驗規(guī)范》[5]。細(xì)菌性陰道病(BV)檢測采用唾液酸酶法。對過氧化氫(H2O2)、白細(xì)胞酯酶(LE)、唾液酸苷酶(SnaSe)、脯氨酸氨基肽酶(PIP)、乙酰氨基葡萄糖苷酶(NAG)陽性率分別采用陰道分泌物六聯(lián)檢試劑盒檢測[6-7]。

1.3 統(tǒng)計分析

2 結(jié)果

2.1 一般資料比較

兩組年齡、孕周、孕次、體重、產(chǎn)次等比較無差異(P>0.05)。見表1。

表1 兩組一般資料比較

2.2 兩組陰道PH值和清潔度比較

觀察組陰道pH值異常率(91.7%)高于對照組(46.2%)(P<0.05)，兩組陰道清潔度Ⅰ～Ⅱ(79.2%、44.6%)，Ⅲ～Ⅳ(20.8%、1.9%)無差異(P>0.05)。

2.3 妊娠晚期GBS感染與生殖道其它病原體感染的相關(guān)性

真菌陽性和細(xì)菌性陰道病者中GBS檢出率高于陰性者(P<0.05)；滴蟲陽性和陰性孕婦GBS檢出率比較無差異(P>0.05)。見表2。

表2 妊娠晚期GBS感染與其他微生物檢出相關(guān)性分析

2.4 兩組陰道分泌物成分的比較

H2O2、LE、PIP、SnaSe、NAG陽性率對照組均高于觀察組(P<0.05)，見表3。

表3 兩組陰道分泌物檢測陽性比較[例(%)]

3 討論

一般情況下，陰道中其他微生物與陰道乳酸桿菌并存，處于一種動態(tài)平衡狀態(tài)；但當(dāng)陰道中乳酸桿菌減少時，導(dǎo)致陰道微生態(tài)平衡被打亂，出現(xiàn)條件致病菌感染。GBS為條件致病菌，易發(fā)生機會感染[8]。當(dāng)陰道微生態(tài)失衡時，GBS在陰道內(nèi)大量繁殖，導(dǎo)致生殖道感染、羊膜炎、早產(chǎn)和胎兒死亡等一系列不良妊娠結(jié)局發(fā)生。既往報道顯示，歐美等發(fā)達國家妊娠晚期孕婦發(fā)生GBS感染率為5.00%～35.00%[9]。盡管美國和很多歐洲國家采用了適當(dāng)?shù)念A(yù)防措施，GBS仍然是發(fā)達國家嬰兒肺炎和死亡的主要原因。我國孕婦GBS陽性率為5.00%～30.00%[10]。既往研究證實，妊娠晚期孕婦易發(fā)生GBS感染，可能與以下幾個方面有關(guān)：①陰道乳酸濃度增加、上皮細(xì)胞的糖原含量增加，有益于耐酸微生物菌群的生長繁殖，進而使陰道內(nèi)環(huán)境微生態(tài)失衡；②陰道黏膜通透性增加、充血、甚至水腫，易引起陰道黏膜損傷，利于病原菌入侵；③機體免疫功能下降，增加了陰道感染的發(fā)生；④GBS能夠通過細(xì)菌蛋白水解酶及炎癥細(xì)胞吞噬作用直接侵襲機體[11-13]。如母體感染GBS可通過垂直傳播對新生兒造成影響，有研究表明GBS感染孕婦中2/3新生兒攜帶GBS[14-16]。

GBS被認(rèn)為是微生物群的一個組成部分和機會微生物，而不是典型的病原體，因為它不會扭曲女性生殖道正常菌群的組成[17-20]。當(dāng)前限制新生兒感染最有效的方法是對所有孕婦進行GBS攜帶篩查，實施有針對性的圍產(chǎn)期抗生素預(yù)防。

本研究結(jié)果顯示，陰道PH值對GBS感染有一定影響。真菌陽性和細(xì)菌陽性孕婦GBS檢出率均高于陰性孕婦；滴蟲陽性與陰性組GBS檢出率未見差異。對照組中H2O2、LE、PIP、SnaSe、NAG陽性率均高于觀察組。近年來發(fā)現(xiàn)陰道內(nèi)乳酸桿菌能直接產(chǎn)生酸性物質(zhì)，例如酸素和乳酸素B可抑制其他細(xì)菌生長并調(diào)節(jié)自身生長，乳酸桿菌可以合成過氧化氫進而抑制其它細(xì)菌。乳酸桿菌在維持陰道微生態(tài)平衡上起著至關(guān)重要的作用。GBS通過抑制乳酸桿菌生長使陰道PH值增高促進陰道假絲酵母菌繁殖。

綜上所述，陰道內(nèi)各微生物之間存在著相互制約并存的關(guān)系，陰道微生物對晚期妊娠婦女GBS感染的影響會一直持續(xù)，陰道乳桿菌對陰道正常菌群的調(diào)節(jié)有重要意義。本研究的局限性在于樣本數(shù)據(jù)過少，代表性相對較低。作為初步研究，也為陰道微生物對GBS感染影響深入研究提供參考。