線粒體解偶聯(lián)蛋白2在肝癌組織中的表達(dá)及其與紫杉醇化療耐藥的關(guān)系

趙乂

作者單位：儀隴縣人民醫(yī)院腫瘤內(nèi)科，四川 南充637600

肝癌是臨床常見的腫瘤疾病之一，有研究報(bào)道顯示，肝癌是全球第三大癌癥相關(guān)性死因疾病，中國(guó)的肝癌病人約占世界的55%［1］，且其發(fā)病率呈現(xiàn)逐年上升趨勢(shì)。目前對(duì)肝癌的治療主要采取手術(shù)治療，但是手術(shù)治療僅適用于早期肝癌病人，所以對(duì)病人的及早發(fā)現(xiàn)以及預(yù)后評(píng)估具有重要意義。線粒體解偶聯(lián)蛋白2（uncoupling protein2，UCP2）是線粒體解偶聯(lián)蛋白家族成員之一，通過(guò)對(duì)腫瘤細(xì)胞的三羧酸循環(huán)產(chǎn)生熱量［2］，抑制活性氧簇（reactive oxygen species，ROS）產(chǎn)生，降低自由基產(chǎn)生，提升病人巨噬細(xì)胞免疫應(yīng)激反應(yīng)。在對(duì)病人的化療過(guò)程中，紫杉醇被認(rèn)為是目前最為優(yōu)秀的抗癌天然物質(zhì)［3］，其顯著的生物活性對(duì)于病人血清腫瘤標(biāo)志物水平的下降具有積極的作用。但是隨著病人的治療，紫杉醇的化療耐藥性呈現(xiàn)上升趨勢(shì)［4］，本研究將通過(guò)UCP2在肝癌組織中表達(dá)的臨床意義及其與紫杉醇化療耐藥的關(guān)系分析，為臨床化療耐藥性預(yù)防提供科學(xué)依據(jù)。

1 資料與方法

1.1一般資料選取2012年2月至2013年2月在儀隴縣人民醫(yī)院住院的肝癌病人120例，隨訪時(shí)間從手術(shù)之日開始算起，對(duì)病人開展長(zhǎng)達(dá)5年的隨訪，以病人的死亡作為終點(diǎn)事件，與疾病無(wú)關(guān)的死亡作為失訪，平均隨訪時(shí)間為（58.72±10.22）月；男性59例，女性61例，年齡（53.48±12.59）歲，體質(zhì)量指數(shù)（BMI）為（24.06±3.76）kg∕m2；低分化肝癌61例，中分化肝癌30例，高分化肝癌29例，TNM分期：Ⅰ期37例，Ⅱ期83例。所有研究對(duì)象均對(duì)研究?jī)?nèi)容知情并簽署知情同意書。本研究符合《世界醫(yī)學(xué)協(xié)會(huì)赫爾辛基宣言》相關(guān)要求。

納入標(biāo)準(zhǔn)：①符合肝癌診斷標(biāo)準(zhǔn)［5］；②預(yù)計(jì)生存時(shí)間＞6個(gè)月；③KPS［6］評(píng)分均≥70分；④所有病人均為早期肝癌，化療方案均為紫杉醇聯(lián)合奧沙利鉑；⑤入組前，所有病人均進(jìn)行手術(shù)治療。排除標(biāo)準(zhǔn)：①心、肝、腎功能嚴(yán)重不全者；②存在交流障礙的病人；③血常規(guī)異常病人。

1.2研究方法病人入組后比較不同病理資料的UCP2水平，通過(guò)對(duì)病人展開為期5年的電話隨訪，比較不同預(yù)后以及紫杉醇的耐藥情況。

1.3觀察指標(biāo)

1.3.1 UCP2水平檢測(cè) 收集手術(shù)過(guò)程中的肝癌組織及癌旁正常肝組織，進(jìn)行石蠟包埋后，4μm連續(xù)切片，對(duì)切片進(jìn)行脫蠟水化處理后，使用枸櫞酸進(jìn)行高溫高壓修復(fù)，對(duì)內(nèi)源性過(guò)氧化酶進(jìn)行封閉后，滴加一抗，-4℃24 h后，徹底清洗后滴加鼠二抗，37℃40 min后，使用DAB顯色液進(jìn)行顯色，滴加蘇木精后進(jìn)行封片判定。免疫組化結(jié)果以高倍鏡下，胞質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)棕色顆粒為陽(yáng)性標(biāo)準(zhǔn)，隨機(jī)選取5個(gè)視野，每個(gè)視野觀察100個(gè)細(xì)胞，觀察陽(yáng)性細(xì)胞的比例，比例在15%以下為陰性，比例在15%及以上為陽(yáng)性。

1.3.2 不同病理資料的UCP2水平比較 分別針對(duì)不同年齡、性別、組織分化程度、肝內(nèi)轉(zhuǎn)移情況、TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、生存情況以及紫杉醇耐藥情況的UCP2水平進(jìn)行比較。紫杉醇耐藥判定［7］：連續(xù)使用2個(gè)療程紫杉醇聯(lián)合奧沙利鉑化療方案，未見腫瘤縮小甚至腫瘤增大。

1.3.3 影響紫杉醇耐藥的多因素分析 使用logistic回歸分析，分別以組織分化、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期、生存情況和UCP2水平作為自變量，是否發(fā)生紫杉醇耐藥為因變量，分析紫杉醇耐藥的影響因素。

1.3.4 Spearman相關(guān)性分析 分別對(duì)以上影響紫杉醇耐藥的多因素進(jìn)行相關(guān)性分析。

1.3.5 UCP2對(duì)肝癌病人生存狀態(tài)的影響 使用生存函數(shù)對(duì)不同UCP2表達(dá)情況病人的生存狀態(tài)進(jìn)行分析。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法所有數(shù)據(jù)均使用統(tǒng)計(jì)軟件SPSS 16.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)量資料以±s表示，組間比較采用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料以%表示，采用χ2檢驗(yàn)，對(duì)單因素分析有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的，進(jìn)一步行l(wèi)ogistic回歸分析，生存狀態(tài)分析采用Kaplan-Meier函數(shù)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 UCP2水平檢測(cè)肝癌組織的UCP2的陽(yáng)性表達(dá)情況明顯高于癌旁正常肝組織，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2＝65.931，P＝0.000）。見表1。染色結(jié)果顯示UCP2主要表達(dá)在細(xì)胞質(zhì)中，并且正常肝組織中幾乎無(wú)染色，而在肝癌組織中，細(xì)胞UCP2免疫組化呈現(xiàn)黃褐色，見圖1。

表1 肝癌120例正常肝組織與肝癌組織UCP2水平檢測(cè)∕例（%）

2.2不同病理資料的UCP2水平比較不同組織分化、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期、生存情況及紫杉醇耐藥情況的UCP2水平比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見表2。

2.3影響紫杉醇耐藥的多因素分析不同組織分化、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期、生存情況以及UCP2水平均為紫杉醇耐藥的獨(dú)立危險(xiǎn)因素，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見表3，4。

2.4 Spearman相關(guān)性分析通過(guò)對(duì)以上影響因素的相關(guān)性分析，病人的紫杉醇耐藥情況分別與組織分化、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期、生存情況以及UCP2水平呈現(xiàn)正相關(guān)（P＜0.05）。見表5。

2.5 UP2、組織分化、頸淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和TNM分期與病人的生存狀態(tài)分析通過(guò)生存函數(shù)分析，UP2陽(yáng)性病人的生存時(shí)間顯著低于UP2陰性病人，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。見表6、圖2。

3 討論

肝癌時(shí)我國(guó)常見的腫瘤性疾病之一［8］，具有顯著的地域性，好發(fā)40～50歲之間［9］，有研究報(bào)道顯示［10］，肝癌患病率呈現(xiàn)逐年上升趨勢(shì)，多數(shù)病人病情發(fā)展較為隱匿，一旦被確診，一般都已經(jīng)發(fā)展為中晚期肝癌，所以在臨床早期發(fā)現(xiàn)肝癌，對(duì)于病人的治療以及預(yù)后具有積極的意義。而在肝癌的治療過(guò)程中，由于耐藥情況的時(shí)有發(fā)生，常常在病人的治療中不能及時(shí)發(fā)現(xiàn)，甚至貽誤病情，所以，在臨床治療中，通過(guò)對(duì)常規(guī)化療方案病人的耐藥性相關(guān)性分析，及時(shí)早期對(duì)病人的耐藥情況進(jìn)行綜合評(píng)估，對(duì)于病人的治療具有積極的意義［11］。

表2 肝癌120例不同病理資料線粒體解偶聯(lián)蛋白（UCP2）水平比較∕例

表3 肝癌120例影響紫杉醇耐藥相關(guān)因素的變量賦值

表4 肝癌120例影響紫杉醇耐藥的多因素分析

表5 肝癌120例紫杉醇耐藥情況Spearman相關(guān)性分析

表6 肝癌120例線粒體解偶聯(lián)蛋白（UP2）、組織分化、頸淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和TNM分期與病人的生存狀態(tài)分析

圖2 肝癌120例線粒體解偶聯(lián)蛋白（UP2）與病人的生存狀態(tài)分析

人體細(xì)胞的能量提供主要來(lái)源于線粒體，而線粒體的氧化磷酸化是其產(chǎn)生能量的主要方式，細(xì)胞內(nèi)的煙酰胺腺嘌呤二核苷酸和還原性二核苷酸的高能電子通過(guò)細(xì)胞線粒體的呼吸鏈進(jìn)行能量釋放，使高能電子與三磷酸腺苷再次進(jìn)行磷酸化，最終形成人體易于吸收利用的能量［12］。但是，該種能量代謝過(guò)程并不能實(shí)現(xiàn)高效運(yùn)轉(zhuǎn)，必須通過(guò)UCP2的偶聯(lián)作用才可實(shí)現(xiàn)［13］。本研究發(fā)現(xiàn)，癌變組織的UCP2陽(yáng)性表達(dá)情況顯著高于癌旁組織（P＜0.05），分析其原因，可能是在腫瘤細(xì)胞中，由于腫瘤細(xì)胞的惡性增長(zhǎng)，能量需求較高，病人的UCPS的偶聯(lián)作用異常表達(dá)，UCP2陽(yáng)性表達(dá)與病人的腫瘤發(fā)展密切相關(guān)，氧化磷酸化主要集中線粒體內(nèi)膜，而UCP2作為陰離子轉(zhuǎn)運(yùn)體，通過(guò)對(duì)質(zhì)子的旁路回流，形成質(zhì)子漏，介導(dǎo)腫瘤細(xì)胞的適應(yīng)反應(yīng)，而腫瘤細(xì)胞證實(shí)通過(guò)其適應(yīng)性反應(yīng)，避免了氧化簇對(duì)其的凋亡調(diào)控，形成腫瘤細(xì)胞的惡性增長(zhǎng)。此外，本研究對(duì)比了兩組病人的不同病理資料UCP2水平，發(fā)現(xiàn)和不同組織分化、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期、生存情況以及紫杉醇耐藥情況之間的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），這進(jìn)一步證實(shí)了UCP2參與了肝癌的進(jìn)展。蔣滟蘄等［14］通過(guò)對(duì)結(jié)腸癌腫瘤病人的UCP2的基因多態(tài)性分析，病人的不良生存結(jié)局與UCP2的表達(dá)呈現(xiàn)正相關(guān)，與正常人相比，腫瘤病人的UCP2表達(dá)水平較高，與本研究結(jié)果一致。

紫杉醇是臨床常用的抗腫瘤類藥物，屬于具有抗癌活性的二萜生物堿類化合物，紫杉醇在臨床中腫瘤病人的化療中起到重要作用，但是對(duì)于惡性程度較高病人，往往在進(jìn)行化療治療中，病人的紫杉醇耐藥情況凸顯，在病人的治療過(guò)程中，由于耐藥情況的無(wú)法預(yù)知性，多數(shù)病人在進(jìn)行化療過(guò)程中，由于藥物的耐藥情況而貽誤病情，所以在臨床中，通過(guò)對(duì)病人的耐藥情況早期進(jìn)行綜合識(shí)別，對(duì)于病人的治療具有重要意義。本研究通過(guò)分析發(fā)現(xiàn)，病人的不同組織分化、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期、生存情況以及UCP2水平均為紫杉醇耐藥的獨(dú)立危險(xiǎn)因素，且與病人的耐藥情況呈現(xiàn)正相關(guān)，分析認(rèn)為，隨著病人的病理檢測(cè)惡性程度的升高，病人的耐藥情況呈現(xiàn)上升趨勢(shì)，惡性分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、生存情況的變差都是在對(duì)病人的不斷化療基礎(chǔ)上出現(xiàn)的進(jìn)行性發(fā)展，腫瘤細(xì)胞通過(guò)自身形態(tài)的改變?cè)黾悠淠芰看x水平，提高自身的存活能力，而在此過(guò)程中，耐藥細(xì)胞成倍增長(zhǎng)，甚至發(fā)生轉(zhuǎn)移，病人處于S期細(xì)胞顯著減少，病人的耐藥情況顯著增加。在未來(lái)的研究中，將病人的組織分化、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期以及UCP2水平的定量化研究，通過(guò)數(shù)據(jù)模型的綜合評(píng)估，及時(shí)對(duì)病人的化療藥物進(jìn)行調(diào)整，對(duì)于病人的治療具有重要意義。

綜上所述，UCP2陽(yáng)性肝癌病人的紫杉醇耐藥性較高，生存情況較差，可作為病人預(yù)后評(píng)估的依據(jù)。

圖1 肝組織中線粒體解偶聯(lián)蛋白2表達(dá)（免疫組化染色×400）：A為正常肝組織，B～D為肝癌組織