犀角散對(duì)肝衰竭小鼠胃腸激素的影響※

林暉明 吳中華 尹燕耀 林云華

（1 江西省南昌市第九醫(yī)院中西醫(yī)結(jié)合肝病科，南昌 330043；2 上海中醫(yī)藥大學(xué)科研實(shí)驗(yàn)中心，上海 200000）

犀角散對(duì)肝衰竭小鼠胃腸激素的影響※

林暉明1吳中華2尹燕耀1林云華1

（1 江西省南昌市第九醫(yī)院中西醫(yī)結(jié)合肝病科，南昌 330043；2 上海中醫(yī)藥大學(xué)科研實(shí)驗(yàn)中心，上海 200000）

目的 運(yùn)用肝衰竭小鼠模型，觀察犀角散對(duì)肝衰竭胃腸道動(dòng)力的作用，探索其作用機(jī)理。方法 將60只小鼠隨機(jī)分為犀角散組（A組）、對(duì)照組（B組）、生理鹽水組（C組），正常小鼠組（D組），前3組進(jìn)行卡介苗+脂多糖造模；13 d后，觀察各組肝臟結(jié)構(gòu)、血清SP、NO含量及回腸始段SP、NO表達(dá)。結(jié)果 造模組均可見明顯肝細(xì)胞壞死，A組肝臟壞死程度較輕；肝衰竭小鼠體內(nèi)血清SP水平及回腸始段SP表達(dá)明顯下降，血清NO水平及回腸始段NO表達(dá)明顯升高；犀角散可上調(diào)血清及回腸始段SP含量，下調(diào)血清內(nèi)NO含量。結(jié)論 肝衰竭小鼠胃腸動(dòng)力障礙與其體內(nèi)胃腸激素水平失調(diào)有關(guān)，犀角散可調(diào)整肝衰竭小鼠體內(nèi)胃腸激素水平。

胃腸激素；犀角散；肝衰竭；小鼠；動(dòng)物實(shí)驗(yàn)；急黃

肝衰竭患者中常見嚴(yán)重的消化道反應(yīng)，體表胃電圖參數(shù)亦存在異常[1]，提示患者存在胃腸道動(dòng)力障礙，胃腸激素是調(diào)節(jié)胃腸道運(yùn)動(dòng)的重要物質(zhì)之一，目前研究表明，肝衰竭胃腸動(dòng)力障礙與體內(nèi)胃腸道激素紊亂有關(guān)[2]。在多種疾病在治療過程中，中醫(yī)藥顯示了良好的促胃腸動(dòng)力作用[3]，但對(duì)于肝衰竭胃腸動(dòng)力的影響研究較少。P物質(zhì)（SP）是促進(jìn)胃腸運(yùn)動(dòng)的興奮性遞質(zhì)之一，而一氧化氮（NO）為胃腸運(yùn)動(dòng)的抑制性神經(jīng)遞質(zhì)之一，在胃腸道有廣泛的分布。為此，本研究通過觀察犀角散對(duì)肝衰竭小鼠回腸始段SP、NO含量的影響，以探討其促胃腸動(dòng)力的作用機(jī)理和中醫(yī)治療肝衰竭的可能機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 6～8周齡體重18～22 g雄性昆明種小白鼠60只，于上海中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心恒溫恒濕動(dòng)物房飼養(yǎng)，12 h明暗交替，自由飲食進(jìn)水。

1.1.2 實(shí)驗(yàn)藥品 犀角散藥物組成：水牛角30 g，茵陳30 g，黃芩15 g，梔子15 g，升麻15 g，竹葉9 g，生大黃6 g，上述藥物由上海中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物室煎制，制備成水煎劑，生藥含量為1.5 kg/L，保存于4℃冰箱備用。

1.1.3 試劑 皮內(nèi)注射用卡介苗，購(gòu)自上海生物制品研究所有限責(zé)任公司，批號(hào)：150102；內(nèi)毒素脂多糖（LPS）購(gòu)自美國(guó)sigma公司，批號(hào)：L-2880；SP、NO抗體購(gòu)于美國(guó) Santa Cruz公司；EnVision試劑 (HRP/Rabbit)即用型購(gòu)于丹麥Dako公司。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 分組及給藥 60只小鼠隨機(jī)分為4組：犀角散組（A組）、對(duì)照組（B組）、生理鹽水組（C組）以及正常小鼠組（D組），每組15只。A、B、C 3組于實(shí)驗(yàn)第1日尾靜脈注射卡介苗2.5 mg（0.2 mL）/只，第2日開始A組給予犀角散0.4 mL/日灌胃；B組不用藥；C組給予生理鹽水0.4 mL/日灌胃。第13日尾靜脈注射LPS 10 ug，16 h后處死。D組不進(jìn)行造模，同等條件下常規(guī)飼養(yǎng)[4]。

1.2.2 標(biāo)本采集 分組后定時(shí)觀察所有小鼠的一般情況。實(shí)驗(yàn)13 d后，所有小鼠眼眶采血后脫頸處死，并留取肝組織及回腸始段。

1.2.3 血清學(xué)檢測(cè) 小鼠血液經(jīng)靜置1 h后，以2500 r/min離心15 min，取血清，采用ELISA法檢測(cè)血清SP、NO。

1.2.4 病理學(xué)檢測(cè) 切取約1 mm×1 mm×1.5 mm的肝組織，10%中性福爾馬林固定液中固定48 h，經(jīng)常規(guī)漂洗、脫水、置換、包埋、切片、染色后，觀察肝臟組織結(jié)構(gòu)變化。切取約1 mm×1 mm×1.5 mm的回腸組織，10%中性福爾馬林固定液中固定48 h，經(jīng)常規(guī)漂洗、脫水、置換、包埋、切片、EnVision染色后，觀察回腸組織內(nèi)SP及NO表達(dá)。

1.2.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 所有數(shù)據(jù)采用SPSS 11.5統(tǒng)計(jì)軟件處理，計(jì)量資料用（±s）表示，采用完全隨機(jī)的方差分析（ANOVA），組間兩兩比較采用LSD-t檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

2.1 犀角散對(duì)肝衰竭小鼠肝組織結(jié)構(gòu)的影響 實(shí)驗(yàn)過程中，A組有3只小鼠于注射LPS后16 h內(nèi)死亡，B組有8只死亡，C組有7只死亡。組間比較死亡率差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。B、C組可見肝組織廣泛多發(fā)肝細(xì)胞壞死灶伴炎細(xì)胞浸潤(rùn)，而A組肝臟炎癥程度較輕，提示了犀角散對(duì)肝臟炎癥的抑制作用。

2.2 犀角散對(duì)肝衰竭小鼠血清SP、NO的影響 肝衰竭小鼠血清SP水平較正常小鼠明顯下降（P＜0.01），NO水平明顯升高（P＜0.01）；犀角散可以升高小鼠血清SP水平，下調(diào)NO水平。見表1。

表1 各組血清SP、NO的檢測(cè)結(jié)果 ±s，pg/ml）

表1 各組血清SP、NO的檢測(cè)結(jié)果 ±s，pg/ml）

注：與D組比較，a P＜0.01，b P＜0.05；與A組比較，c P＜0.01，d P＜0.05

組別 例數(shù) SP NO A組B組C組D組12 781 5 54.04±2.97 47.55±6.18ac 50.76±5.48a 56.68±2.20 22.64±2.25 25.41±1.98ac 24.84±1.61bd 21.08±3.27

2.3 犀角散對(duì)回腸始段SP、NO的影響 肝衰竭小鼠回腸始段SP水平較正常小鼠明顯下降（P＜0.05），NO水平明顯升高（P＜0.05）；犀角散可以升高小鼠回腸始段SP水平（P＜0.05），對(duì)NO水平的影響差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

表2 各組回腸始段SP、NO陽性面積的檢測(cè)結(jié)果 （s）

表2 各組回腸始段SP、NO陽性面積的檢測(cè)結(jié)果 （s）

注：與D組比較，a P＜0.01，b P＜0.05；與A組比較，c P＜0.05

組別 例數(shù) SP NO A組B組C組D組12 781 5 3.79±0.65 2.95±0.82bc 2.71±0.30ac 4.16±1.93 2.96±0.48 3.44±1.36b 3.36±0.85b 0.83±0.23

3 討論

肝衰竭患者常見惡心、嘔吐，腹脹等嚴(yán)重消化道癥狀，提示存在胃腸動(dòng)力障礙。胃腸道動(dòng)力不足嚴(yán)重降低患者的生活質(zhì)量，同時(shí)也導(dǎo)致患者營(yíng)養(yǎng)供應(yīng)不足，影響肝臟再生，對(duì)肝衰竭的治療產(chǎn)生不利影響；部分患者可因消化道動(dòng)力喪失而出現(xiàn)中毒性鼓腸而危及生命[5]。早期判斷胃腸道動(dòng)力障礙并及時(shí)處理，有助于提高肝衰竭治療的成功率。

胃腸動(dòng)力主要受中樞神經(jīng)系統(tǒng)、腸神經(jīng)系統(tǒng)及胃腸激素的控制和調(diào)節(jié)，腸神經(jīng)系統(tǒng)（ENS）是存在于胃腸壁內(nèi)一個(gè)獨(dú)立于大腦之外的完整神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)，具有高度的自主性，起著感知、啟動(dòng)和調(diào)控胃腸運(yùn)動(dòng)、分泌和血供功能，其包括黏膜下神經(jīng)叢和肌間神經(jīng)叢，其中肌間神經(jīng)叢的運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元主要支配腸道平滑肌，這些神經(jīng)元通過它們的末梢釋放神經(jīng)遞質(zhì)，調(diào)節(jié)小腸平滑肌的運(yùn)動(dòng)，ENS運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元包括興奮性和抑制性運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元，SP是腸興奮性運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元釋放的刺激肌肉收縮的主要神經(jīng)遞質(zhì)，NO是腸抑制性運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元釋放的抑制性遞質(zhì)[6]。本研究中可見肝衰竭小鼠回腸始段SP含量的下降及NO含量的升高，提示肝衰竭狀態(tài)下存在胃腸激素紊亂，SP含量的下降及NO含量的升高可使腸神經(jīng)系統(tǒng)興奮性下降，同時(shí)抑制腸道蠕動(dòng)。

肝衰竭病情進(jìn)展迅速，屬于中醫(yī)“急黃”范疇，即肝瘟病。其基本病機(jī)為濕熱疫毒內(nèi)蘊(yùn)，熏蒸肝膽，肝失疏泄，腸道不利，邪毒壅滯，不能外泄。其治療重點(diǎn)在于截?cái)嗖?shì)，扭轉(zhuǎn)病情，當(dāng)治以解毒通腑為主，犀角散是其治療的常用方劑之一。犀角散以犀角（水牛角）清熱解毒涼血，以黃芩、梔子、升麻、竹葉相配加強(qiáng)清熱解毒，以茵陳清熱利濕退黃，以生大黃通滌胃腸熱毒，共達(dá)清熱涼血、通腑解毒之目的。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，犀角散能上調(diào)血清及回腸始段SP含量，下調(diào)血清內(nèi)NO含量，減輕肝臟炎癥程度。探討其作用機(jī)制可能與本方有調(diào)整體內(nèi)胃腸激素水平，提高腸神經(jīng)系統(tǒng)興奮性，從而促進(jìn)腸道蠕動(dòng)，疏通大腸的作用有關(guān)。

明朝著名醫(yī)家李梴《醫(yī)學(xué)入門·臟腑》中有言“肝與大腸相通”“肝病宜疏通大腸”“肝寄腑于大腸，借道大腸降氣瀉濁”[7]。由此可見，自古以來腸道功能變化在肝病治療中的作用就已得到諸多醫(yī)家的重視，本實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示在肝衰竭治療中應(yīng)當(dāng)重視胃腸激素水平的變化，中醫(yī)藥治療可以通過調(diào)整體內(nèi)胃腸激素水平，改善胃腸動(dòng)力，從而達(dá)到糾正腸源性內(nèi)毒素血癥，截?cái)嗖?shì)，阻止肝損傷進(jìn)展，扭轉(zhuǎn)病情的目的。

[1]米軍，吳燕京，金瑞，等.慢性肝衰竭患者體表胃電圖表現(xiàn)[J].胃腸病學(xué)和肝病學(xué)雜志，2011，20(8):691-692.

[2]朱金照，饒俊偉.胃腸激素在肝衰竭大鼠胃腸道動(dòng)力改變中的影響[J].中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合消化雜志，2014，22(6):307-309.

[3]劉慧敏.中藥胃腸動(dòng)力學(xué)研究概況[J].時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥，2013，24(12):2983-2985.

[4]Xu HB，Gong YP，Cheng J，et al.CXCL16 participates in pathogenesis of immunological liver injury by regulating T lymphocyte infiltration in liver tissue[J].World J ofgastroenterol，2005，11(32):4979-4985.

[5]方興剛，過建春.肝功能衰竭患者胃腸道屏障障礙及其治療研究進(jìn)展[J].中西醫(yī)結(jié)合肝病雜志，2012，22(1):59-61.

[6]宋美芳，曾南.中藥對(duì)胃腸動(dòng)力的調(diào)節(jié)作用及機(jī)制研究[J].四川生理科學(xué)雜志，2007，29(4):179-181.

[7]陳英杰.“肝與大腸相通”探析[J].中醫(yī)研究，2007，20(11):3-8.

The Effect of Xijiao Powder on Gastrointestinal Hormone of Liver Failure Mice

LIN Huiming1,WU Zhonghua2,YIN Yanyao1,LIN Yunhua1
(1.Department of Integrative Medicine,Nanchang Ninth Hospital,Jiangsu Province,Nanchang 330002,China;2.Science Experiment Center,Shanghai University of Traditional Chinese Medicine,Shanghai 201203,China)

Objective To investigate the effects of Xijiao powder on gastrointestinal dysmotility of liver failure mice and to discuss its mechanism.Methods Sixty mice were randomly divided into 4 groups:Xijiao powder group (A group),control group (B group),NS group(C group);and normal group (D group).A group,B group and C group were induced by Bacille Calmette-Guerin and lipopolysaccharide.The mice were sacrificed on the 13th day.The liver tissues of mice were measured.SP and NO of blood and lieum were detected.Results Subsequent LPS challenge in BCG-primed mice induced multilobular hepatocellular necrosis in liver tissue.The hepatocellular necrosis of Xijiao powder group was lighter.The levels of SP were significantly decreased in the liver failure mice'serum and ileum,and the levels of NO were significantly increased.Xijiaosan powder up-regulated SP of blood and lieum,down-regulated blood NO in mice.Conclusion The gastrointestinal motility disorder in liver failure mice is related to the imbalance of gastrointestinal hormone levels.Xijiao powder adjusted gastrointestinal hormone in liver failure mice.

gastrointestinal hormone;Xijiao powder;liver failure;mice;animal experiment;fulminant jaundice

10.3969/j.issn.1672-2779.2017.24.065

1672-2779（2017）-24-0146-02

國(guó)家臨床重點(diǎn)?？平ㄔO(shè)項(xiàng)目經(jīng)費(fèi)資助【No.國(guó)衛(wèi)醫(yī)發(fā)[2013]42 號(hào)】；江西省科技計(jì)劃項(xiàng)目【No.20141BDH80031】；江西省衛(wèi)生廳中醫(yī)藥科研計(jì)劃【No.2013A169】

李海燕 本文校對(duì)：宗亞力

2017-10-24）