血清AFP、GP73水平檢測(cè)對(duì)非肝癌慢性HBV感染者的臨床價(jià)值

何 靜，王保龍，趙 亮，姜 徽，陳道俊

1.中國科技大學(xué)附屬第一醫(yī)院檢驗(yàn)科，安徽合肥 230001；2.安徽醫(yī)科大學(xué)公共衛(wèi)生學(xué)院，安徽合肥 230022

乙型肝炎病毒(HBV)感染是慢性乙型肝炎(CHB)肝硬化發(fā)生的主要原因。臨床上常用丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)、天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)等生化指標(biāo)以及肝組織穿刺活檢來評(píng)價(jià)患者病情和指導(dǎo)用藥；但是，肝功能生化指標(biāo)無法準(zhǔn)確反映肝臟損傷狀態(tài)；肝組織活檢雖然是判斷肝臟壞死性炎癥及肝纖維化程度的“金標(biāo)準(zhǔn)”，但為有創(chuàng)操作并存在潛在出血風(fēng)險(xiǎn)，并未被廣泛推薦使用[1-2]。血清甲胎蛋白(AFP)是世界范圍內(nèi)肝臟疾病應(yīng)用最廣泛的經(jīng)典標(biāo)志物，但其靈敏度和特異度均不高[3]；高爾基體糖蛋白-73(GP73)與肝病的關(guān)系密切，在肝臟出現(xiàn)急、慢性炎性反應(yīng)或肝纖維化時(shí)，GP73表達(dá)明顯上調(diào)[4-5]，可以作為CHB的有效監(jiān)測(cè)指標(biāo),與AFP聯(lián)合檢測(cè)可以提高診斷效能[6]。國內(nèi)外對(duì)這兩個(gè)指標(biāo)在肝癌中的應(yīng)用報(bào)道較多，而對(duì)在非肝癌慢性HBV感染者中的應(yīng)用報(bào)道較少。本研究旨在探討這兩種血清標(biāo)志物在非肝癌慢性HBV感染者不同疾病階段的水平特點(diǎn)，以及評(píng)價(jià)它們對(duì)CHB肝硬化失代償期的診斷價(jià)值，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 將2017年1月至2019年6月中國科技大學(xué)附屬第一醫(yī)院確診的157例慢性HBV感染者納入研究，排除慢性HBV感染所致肝病以外的其他良性肝病和惡性腫瘤患者。根據(jù)慢性HBV感染分類進(jìn)行分組[7]：CHB肝硬化失代償期組40例，男29例、女11例，平均年齡(54.03±13.01)歲；CHB肝硬化代償期組44例，男27例、女17例，平均年齡(56.57±11.48)歲；CHB組43例，男27例、女16例，平均年齡(53.39±12.46)歲；HBV攜帶者組30例，男20例、女10例，平均年齡(52.89±11.39)歲。另外，選取該院同期的30體檢合格的健康者30例作為健康組，男19例、女11例，平均年齡(54.33±17.55)歲。5組性別、年齡比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，納入研究者均知情同意并簽署知情同意書。CHB和肝硬化的診斷符合《慢性乙型肝炎防治指南》中的診斷標(biāo)準(zhǔn)[8]。通過詢問病史、實(shí)驗(yàn)室和病理、影像學(xué)檢查(包括超聲、上腹部CT及磁共振)確診。HBV攜帶者是指沒有肝炎的癥狀和體征，乙肝表面抗原(HBsAg)陽性持續(xù)半年以上，肝功能指標(biāo)正常的HBV感染者；肝硬化失代償期是指肝硬化發(fā)展到一定程度，超出肝功能的代償能力，臨床表現(xiàn)出肝功能減退和門靜脈高壓所致的癥狀和體征。

1.2方法 GP73檢測(cè)采用北京熱景公司UPT-3A上轉(zhuǎn)發(fā)光免疫分析儀及配套試劑；AFP檢測(cè)采用羅氏公司Cobas8000型全自動(dòng)電化學(xué)發(fā)光儀及配套試劑；嚴(yán)格按照說明書操作。分離膠試管采集所有研究對(duì)象空腹外周靜脈血3 mL，室溫放置1 h，以3 800 r/min離心5 min分離血清，并盡量于3 h 內(nèi)檢測(cè)；當(dāng)天無法檢測(cè)的血清標(biāo)本分離后保存在2～8 ℃冰箱中，次日檢測(cè)前于室溫靜置。結(jié)果判斷:(1)AFP≥7 ng/mL為陽性；(2)GP73≥150 ng/mL為陽性。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS18.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。計(jì)量資料呈非正態(tài)分布，故采用M(P25～P75)表示，組間比較采用Kruskal-WallisH檢驗(yàn)，多組間的兩兩比較采用Nemenyi檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料以百分率表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)；P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。采用二元logistic回歸建立預(yù)測(cè)模型，引入標(biāo)準(zhǔn)為P<0.05，剔除標(biāo)準(zhǔn)為P>0.10，方法為Enter，從而產(chǎn)生多指標(biāo)聯(lián)合預(yù)測(cè)概率這個(gè)新變量，以此作出受試者工作特征(ROC)曲線，得到曲線下面積(AUC)及95%置信區(qū)間(CI)，評(píng)價(jià)血清AFP、GP73對(duì)CHB肝硬失代償期的診斷價(jià)值。

2 結(jié) 果

2.1各組血清AFP、GP73檢測(cè)水平的比較 CHB肝硬化失代償期組血清AFP水平高于健康組(P<0.05)，與其余各組比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；各組間GP73水平兩兩比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表1。

表1 各組血清AFP、GP73檢測(cè)結(jié)果比較[M(P25～P75)，ng/mL]

2.2血清AFP、GP73單項(xiàng)和聯(lián)合檢測(cè)用于CHB肝硬化失代償期的診斷 ROC曲線分析顯示，AFP、GP73聯(lián)合檢測(cè)的AUC大于單項(xiàng)檢測(cè)，見表2、圖1。AFP、GP73用于鑒別診斷的臨界值設(shè)定：AFP為9.90 ng/mL，GP73為66.36 ng/mL。

圖1 血清AFP與GP73單項(xiàng)和聯(lián)合檢測(cè)的ROC曲線分析

表2 AFP、GP73單項(xiàng)及聯(lián)合檢測(cè)用于肝硬化失代償期診斷的ROC曲線參數(shù)

2.3血清AFP和GP73單項(xiàng)及聯(lián)合檢測(cè)用于肝硬化失代償期診斷的靈敏度、特異度、準(zhǔn)確度 見表3。

表3 單項(xiàng)或聯(lián)合檢測(cè)的部分診斷效能參數(shù)[%(n/n)]

3 討 論

肝硬化的病理基礎(chǔ)是肝纖維化，由于肝纖維化具有可逆性，因此對(duì)肝纖維化的早期檢出和準(zhǔn)確評(píng)估有重要的臨床意義。特別是有部分慢性HBV感染者血清ALT水平在正常范圍，但是肝組織卻已經(jīng)發(fā)生了明顯的炎癥和纖維化，若僅根據(jù)血清ALT水平作出判斷，將延誤抗病毒治療的時(shí)機(jī)[9]。AFP是一種糖原蛋白，來源于胚胎干細(xì)胞，可通過肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞以及卵黃囊細(xì)胞合成，在新生兒出生15 d之后AFP水平逐漸減少，最終由清蛋白替代，因此在成人體內(nèi)AFP的水平很低[10]。本研究顯示，不同類型的HBV感染組間AFP水平無明顯差異，但均高于健康組。

GP73主要由膽管上皮細(xì)胞表達(dá)，而肝細(xì)胞表達(dá)很少甚至不表達(dá)，GP73的表達(dá)受炎性因子調(diào)控。在培養(yǎng)的肝細(xì)胞中，IFN-γ、IL-6能上調(diào)細(xì)胞內(nèi)GP73水平，TNF-α能下調(diào)GP73表達(dá)[11]；在損傷的肝細(xì)胞中，GP73的表達(dá)明顯上調(diào)[12]，導(dǎo)致大量GP73分泌入血，乙型肝炎及肝硬化患者的肝臟組織中GP73表達(dá)水平比正常肝臟組織高70倍[13]。本研究中，血清GP73水平由低至高依次為HBV攜帶者組、CHB組、CHB肝硬化代償期組、CHB肝硬化失代償期組，GP73的水平隨著慢性HBV感染者的疾病進(jìn)展以及纖維化程度加重而升高。CHB肝硬化失代償期組GP73中位數(shù)水平高達(dá)157.61 ng/mL；GP73單項(xiàng)檢測(cè)用于肝硬化失代償期診斷的特異度、準(zhǔn)確度較高；AFP和GP73聯(lián)合檢測(cè)的AUC最大，兩項(xiàng)指標(biāo)聯(lián)合檢測(cè)的特異度、準(zhǔn)確度較高，與文獻(xiàn)[10，12]的報(bào)道一致。兩項(xiàng)指標(biāo)聯(lián)合檢測(cè)可以提高診斷效能，這對(duì)于慢性HBV感染者病情進(jìn)展的判斷具有參考價(jià)值，也有助于肝硬化失代償期的診斷。

綜上所述，血清AFP、GP73檢測(cè)，方法簡(jiǎn)單、快速，血清GP73表達(dá)隨著肝纖維化程度加重而升高；兩者聯(lián)合檢測(cè)有助于慢性HBV感染者病情和CHB纖維化進(jìn)程的判斷；未來還需要對(duì)血清GP73這一標(biāo)志物進(jìn)行更大樣本量的前瞻性研究,深入探討其生物學(xué)特征。