半乳糖凝集素3在尿素干預(yù)眼部靜脈畸形組織中的表達(dá)情況分析

程銘 管文琦 許穎茗 張蕙 張嬋 劉紅

[摘要]目的：探討半乳糖凝集素3（Galectin-3）在尿素干預(yù)眼部靜脈畸形組織中的表達(dá)情況。方法：選擇2015年7月-2019年3月筆者醫(yī)院收治的56例眼部靜脈畸形患者作為研究組，并選擇同期入院但眼部靜脈組織正常的56例患者作為對(duì)照組，比較兩組Galectin-3水平，并觀察眼部靜脈畸形患者經(jīng)尿素干預(yù)后Galectin-3水平變化。結(jié)果：研究組患者的Galectin-3蛋白陽(yáng)性表達(dá)率55.36%、Galectin-3 mRNA陽(yáng)性表達(dá)率62.50%顯著高于對(duì)照組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。研究組患者經(jīng)尿素干預(yù)后的Galectin-3蛋白陽(yáng)性表達(dá)率35.71%、Galectin-3 mRNA陽(yáng)性表達(dá)率42.86%顯著低于治療前，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。結(jié)論：眼部靜脈畸形組織中Galectin-3表達(dá)升高，經(jīng)尿素干預(yù)可有效減輕Galectin-3水平，延緩眼部靜脈畸形侵襲發(fā)展。

[關(guān)鍵詞]眼部靜脈畸形;半乳糖凝集素3;尿素干預(yù);表達(dá)情況;原位雜交染色法;Galectin-3 mRNA

[中圖分類號(hào)]R77? ? [文獻(xiàn)標(biāo)志碼]A? ? [文章編號(hào)]1008-6455（2020）07-0091-03

Abstract： Objective? To investigate the expression of Galectin-3 in ocular venous malformation after urea intervention. Methods? 56 patients with ocular venous malformation admitted to our hospital from July 2015 to March 2019 were selected as the research group， and 56 patients with normal ocular venous tissue admitted to our hospital during the same period were selected as the control group. The level of Galectin-3 was compared between the two groups， and the changes of Galectin-3 in patients with ocular venous malformation were observed after urea intervention. Results? The positive expression rate of galectin-3 protein was 55.36% and the positive expression rate of galectin-3 mRNA was 62.50% in the study group， which was significantly higher than that in the control group， and the difference was statistically significant （P<0.05）. The positive expression rate of galectin-3 protein and positive expression rate of galectin-3 mRNA in the study group after urea intervention were 35.71% and 42.86%， which were significantly lower than those before treatment （P<0.05）. Conclusion? Galectin-3 expression is increased in ocular venous malformation tissues， and urea intervention can effectively reduce Galectin-3 and delay the invasion and development of ocular venous malformation.

Key words： ocular venous malformation; Galectin-3; urea intervention; expression; in situ hybridization staining; Galectin-3 mRNA

眼部靜脈畸形是一種比較罕見(jiàn)的先天性血管發(fā)育畸形，會(huì)呈終身漸進(jìn)性發(fā)展，還會(huì)累及眼瞼與部分眼肌，嚴(yán)重時(shí)會(huì)導(dǎo)致眼球萎縮，造成患者視力喪失[1]。研究發(fā)現(xiàn)，半乳糖凝集素3（Galectin-3）在血管發(fā)生、形成中起著重要作用[2]。而尿素對(duì)于血管瘤和靜脈畸形的治療作用已有報(bào)道，發(fā)現(xiàn)其對(duì)于靜脈畸形可起到預(yù)防作用，減少對(duì)眼球產(chǎn)生進(jìn)一步的傷害，且尿素屬于人體代謝產(chǎn)物，對(duì)于人體無(wú)明顯不良反應(yīng)，在手術(shù)前使用可以讓畸形靜脈硬化[3]。因此，本研究探討Galectin-3在尿素干預(yù)眼部靜脈畸形組織中的表達(dá)情況，以期為臨床診斷、治療提供科學(xué)參考依據(jù)，現(xiàn)報(bào)道如下。

1? 資料和方法

1.1 一般資料：經(jīng)醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)同意，選擇2015年7月-2019年3月筆者醫(yī)院收治的56例眼部靜脈畸形患者作為研究組，納入標(biāo)準(zhǔn)：①均經(jīng)檢查符合國(guó)際脈管性疾病研究學(xué)會(huì)（International Society for the Study of Vascular Anomalies，ISSVA）提出的眼部靜脈血管畸形的診斷標(biāo)準(zhǔn)[4];②均接受手術(shù)治療;③簽署知情同意書。排除標(biāo)準(zhǔn)：①精神系統(tǒng)疾病者;②溝通交流障礙者;③合并其他眼部疾病者;④合并其他靜脈畸形組織者;⑤臨床資料不完整者。并選擇同期入院但眼部靜脈組織正常的56例患者作為對(duì)照組。研究組：男17例，女39例;年齡7～64歲，平均（37.42±7.10）歲。對(duì)照組：男20例，女36例;年齡9～68歲，平均（37.66±9.98）歲。兩組基礎(chǔ)資料比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），均衡可比。

1.2 方法：對(duì)照組患者手術(shù)前均不接受尿素注射治療。研究組患者接受每日尿素局部注射治療，連續(xù)治療7～10d，再開展手術(shù)治療。在病理科收集眼眶靜脈畸形標(biāo)本，所有病理標(biāo)本均常規(guī)石蠟包埋后制成3μm、6μm厚連續(xù)切片，取1張HE染色復(fù)查診斷。其余切片分別進(jìn)行原位雜交染色、免疫組織化學(xué)（Galectin-3蛋白表達(dá)采用免疫組織化學(xué)法檢測(cè)，Galectin-3 mRNA表達(dá)采用原位雜交染色法檢測(cè)）。切片常規(guī)脫蠟至水，體積分?jǐn)?shù)在3%水在室溫環(huán)境下處理12min，將內(nèi)源性過(guò)氧化物酶滅活，然后再使用檸檬酸與新鮮配置的胃蛋白酶在室溫環(huán)境下消化15min，將DNA結(jié)合蛋白去除掉。每張切片需要加入20μl預(yù)雜交液，再經(jīng)過(guò)洗滌之后，加入封閉液37℃環(huán)境下30min。另外加入生物素化鼠抗地高辛，加入原位雜交專用PBS液洗滌之后，再加入SABC，接受類似前步驟的洗滌，觀察DAB顯色情況。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析：采用SPSS 25.0計(jì)算數(shù)據(jù)，使用“%”代表計(jì)數(shù)資料，采用χ2檢驗(yàn)，以P<0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2? 結(jié)果

2.1 兩組Galectin-3蛋白、Galectin-3 mRNA干預(yù)前陽(yáng)性表達(dá)率比較：研究組患者的Galectin-3蛋白陽(yáng)性表達(dá)率為55.36%、Galectin-3 mRNA陽(yáng)性表達(dá)率為62.5%顯著高于對(duì)照組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。見(jiàn)表1。Galectin-3蛋白表達(dá)情況見(jiàn)圖1，研究組Galectin-3蛋白表達(dá)陽(yáng)性顆粒主要表達(dá)于細(xì)胞質(zhì)以及細(xì)胞核中，而對(duì)照組的蛋白表達(dá)少數(shù)在細(xì)胞核處。

2.2 研究組尿素干預(yù)前后Galectin-3蛋白、Galectin-3 mRNA表達(dá)水平比較：研究組患者經(jīng)尿素干預(yù)后的Galectin-3蛋白陽(yáng)性表達(dá)率35.71%、Galectin-3 mRNA陽(yáng)性表達(dá)率42.86%顯著低于治療前，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。見(jiàn)表2。

3? 討論

常見(jiàn)的眶內(nèi)血管畸形是靜脈性血管畸形，也稱靜脈性血管瘤。因病變范圍常較廣泛，CT顯示眶內(nèi)病變呈界限清楚，形狀不規(guī)則，且范圍較廣泛的高密度占位病變，但也有單個(gè)的血管畸形性病變[5]。眼靜脈性血管畸形因其基本病理組織學(xué)成分是為管壁厚薄不一的靜脈團(tuán)塊，往往被混同于靜脈畸形（如靜脈曲張），又由于腫物內(nèi)有許多高度擴(kuò)張的薄壁血管而被病理學(xué)家診為海綿狀血管瘤。靜脈性血管瘤在國(guó)人中較為多見(jiàn)，世界衛(wèi)生組織（WHO）腫瘤分類的血管瘤中包括靜脈性血管瘤，并稱靜脈性血管瘤是一種由不規(guī)則形的中等至大的血管，主要以靜脈型血管所構(gòu)成的良性病變，可伴有散在的平滑肌纖維及脂肪組織?？魞?nèi)靜脈血管瘤自有其特點(diǎn)，與發(fā)生于其他部位者有所不同[6]。靜脈管徑較小，纖維組織多，但基本病理組織學(xué)改變應(yīng)屬于這一范疇。也曾以蔓狀血管瘤來(lái)命名此類腫瘤，蔓狀血管瘤雖有動(dòng)脈性、靜脈性及動(dòng)、靜脈之分，但一般都意味著動(dòng)、靜脈并存，且有直接交通。病理學(xué)檢查該腫瘤缺乏包膜，在多量的纖維組織中有豐富的小靜脈，有時(shí)被診斷為纖維血管瘤[7]。

半乳糖凝集素（Galectin）是凝集素家族中的一員，Galectin家族的蛋白都具有識(shí)別并結(jié)合B-半乳糖苷的特點(diǎn)，現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)十多個(gè)成員，并按發(fā)現(xiàn)的時(shí)間先后順序依次命名為Galectin-1、Galectin-2…，其中對(duì)Galectin-3的研究最為廣泛，人Galectin-3基因由6個(gè)外顯子和5個(gè)內(nèi)含子組成，長(zhǎng)約17kb，Galectin-3具有一個(gè)獨(dú)特的嵌合體結(jié)構(gòu)，包括一個(gè)長(zhǎng)的氨基末端結(jié)構(gòu)域和羧基末端的單一碳水化合物識(shí)別結(jié)構(gòu)域以及兩者之間的脯氨酸、甘氨酸、酪氨酸富含區(qū)的重復(fù)膠原樣序列構(gòu)成.Galectin-3首先發(fā)現(xiàn)于巨噬細(xì)胞中，主要定位于胞核、胞質(zhì)，它的表達(dá)取決于細(xì)胞增生的不同階段，當(dāng)細(xì)胞處于靜止?fàn)顟B(tài)時(shí)主要位于胞質(zhì)，當(dāng)細(xì)胞位于增殖狀態(tài)時(shí)則主要位于胞核，其通過(guò)非典型途徑分泌到胞外組織間隙[8]。Galectin-3也廣泛分布于各種正常組織和腫瘤細(xì)胞，參與多種生理和病理過(guò)程，包括細(xì)胞生長(zhǎng)和凋亡、細(xì)胞黏附及新生血管形成和腫瘤浸潤(rùn)與轉(zhuǎn)移等，被稱為腫瘤相關(guān)蛋白[9]。有多項(xiàng)研究報(bào)道，Galectin-3能夠參與到血管形成中，且能夠調(diào)節(jié)細(xì)胞功能[10-11]。喬軍波等認(rèn)為，Galectin-3在眼部病變中起著重要作用，能夠減輕缺血誘導(dǎo)下眼部視網(wǎng)膜發(fā)生變性。本研究結(jié)果中，研究組患者的Galectin-3蛋白陽(yáng)性表達(dá)率、Galectin-3 mRNA陽(yáng)性表達(dá)率顯著高于對(duì)照組（P<0.05）。本研究結(jié)果與相關(guān)研究結(jié)果相似，進(jìn)一步說(shuō)明Galectin-3在眼部靜脈畸形組織中呈高表達(dá)[12]。表2中，研究組患者經(jīng)尿素干預(yù)后的Galectin-3蛋白陽(yáng)性表達(dá)率、Galectin-3 mRNA陽(yáng)性表達(dá)率顯著低于治療前（P<0.05）。結(jié)果說(shuō)明，經(jīng)尿素干預(yù)能夠有效降低眼部靜脈畸形組織中Galectin-3表達(dá)。

綜上所述，眼部靜脈畸形組織中Galectin-3表達(dá)升高，經(jīng)尿素干預(yù)可有效減輕Galectin-3促進(jìn)眼部靜脈畸形侵襲發(fā)展的能力。

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[收稿日期]2019-07-29

本文引用格式：程銘，管文琦，許穎茗，等.半乳糖凝集素3在尿素干預(yù)眼部靜脈畸形組織中的表達(dá)情況分析[J].中國(guó)美容醫(yī)學(xué)，2020，29（7）：91-93.