順德地區(qū)無償獻(xiàn)血人群開展不規(guī)則抗體篩查的研究

梁麗雯 葉偉亮 劉志泉 李交 陳永飛 于艷濤

【摘要】 目的：探究順德地區(qū)無償獻(xiàn)血人群開展不規(guī)則抗體篩查結(jié)果。方法：選取2018年2月-2020年

2月順德地區(qū)無償獻(xiàn)血者25 029例，利用全自動凝聚胺微板法對其實施不規(guī)則抗體篩查，利用試劑譜抗體鑒定及效價測定細(xì)胞陽性標(biāo)本。分析不規(guī)則抗體的檢出情況。結(jié)果：本研究中的25 029例樣本中，篩查出7例不規(guī)則抗體，其檢出率為0.028%，另外規(guī)則抗體為25 022例，其檢出率為99.972%;本研究中16 241例男性進(jìn)行不規(guī)則抗體檢查，其中檢出的不規(guī)則抗體為4例，檢出率為0.025%;8788例女性進(jìn)行不規(guī)則抗體檢查，其中檢出不規(guī)則的抗體為3例，檢出率為0.034%;女性無償獻(xiàn)血者中不規(guī)則抗體的陽性率與男性比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。7例不規(guī)則抗體中，IgG型1例，IgM型抗體6例，其中1例抗-D，2例抗-M，冷抗體4例。結(jié)論：隨著輸血醫(yī)學(xué)技術(shù)的不斷革新，對血型鑒定和抗體篩查成為臨床輸血中的必備部分。對順德地區(qū)無償獻(xiàn)血者實施不規(guī)則抗體的檢查，能夠清楚認(rèn)識到機(jī)體內(nèi)不規(guī)則抗體所存在的頻率、類型以及特異性、效價，能夠促進(jìn)電子交叉配血的實行，同時為順德地區(qū)臨床輸血提供真實的數(shù)據(jù)支持，保障了臨床用血安全、有效和及時的特性，值得推廣應(yīng)用。

【關(guān)鍵詞】 無償獻(xiàn)血人群 不規(guī)則抗體 篩查

[Abstract] Objective： To explore the results of irregular antibody screening among free blood donors in Shunde area. Method： A total of 25 029 free blood donors in Shunde area from February 2018 to February 2020 were selected. It was screened for irregular antibodies by automatic polyamine microplate method. The positive samples were identified by reagent spectrum antibody and titer. The detection of irregular antibody was analyzed. Result： Among the 25 029 samples in this study， 7 irregular antibodies were screened， with a detection rate of 0.028%， in addition， 25 022 cases were regular antibody， the detection rate was 99.972%. In this study， 16 241 male patients were examined for irregular antibodies， 4 of them were irregular antibodies， the detection rate was 0.025%. 8，788 women were examined for irregular antibodies， 3 of them were irregular antibodies， the detection rate was 0.034%. The positive rate of irregular antibody in female unpaid blood donors was compared with that in male， there was no significant difference （P>0.05）. Among 7 cases of irregular antibodies， 1 case of IgG type and 6 cases of IgM type antibody， including 1 case of anti-D， 2 cases of anti-M and 4 cases of cold antibody. Conclusion： With the continuous innovation of transfusion medical technology， blood group identification and antibody screening become an essential part of clinical transfusion. Irregular antibody tests are carried out on blood donors in Shunde area， it can clearly recognize the frequency， type， specificity and titer of irregular antibodies in the body， promote the implementation of electronic cross matching， provide real data support for clinical blood transfusion in Shunde area， and ensure the safety， effectiveness and timeliness of clinical blood use， which is worthy of promotion and application.

[Key words] Free blood donors Irregular antibody Screening

First-authors address： Foshan City Shunde District Central Blood Station， Foshan 528300， China

doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2020.18.016

采供血機(jī)構(gòu)及時且有效地向臨床治療提供足夠的血液制品，從而保障臨床用血的正常運(yùn)行，因為臨床用血關(guān)系到患者的生命健康，因此輸血的安全和血液的質(zhì)量成為比較重要的部分，近幾年因不規(guī)則抗體造成臨床輸血出現(xiàn)不良反應(yīng)的情況被著重關(guān)注[1]。不規(guī)則抗體是指除抗-A、抗-B之外的其他血型抗體。研究表明，不規(guī)則抗體是因為人體遭受到相應(yīng)抗原類似物質(zhì)的免疫進(jìn)行刺激后形成的[2]。在健康獻(xiàn)血者中也極有可能產(chǎn)生不規(guī)則抗體，為預(yù)防臨床輸血所用的血漿中存在不規(guī)則抗體，造成交叉配血出現(xiàn)不相合的情況，本文對2018年2月-2020年2月順德地區(qū)的標(biāo)本實施不規(guī)則抗體篩檢，對呈陽性的標(biāo)本利用譜細(xì)胞實施抗體特異性鑒定以及效價檢測，現(xiàn)報道如下。

1 對象與方法

1.1 對象 選取2018年2月-2020年2月順德地區(qū)無償獻(xiàn)血者25 029例，其中男16 241例，女8 788例;年齡19～61歲，平均（40.0±1.5）歲，均實施血漿不規(guī)則抗體篩查。

1.2 方法

1.2.1 儀器和試劑 由上海血液生物醫(yī)藥有限責(zé)任公司、長春博德生物技術(shù)有限責(zé)任公司提供的篩選細(xì)胞，由上海血液生物醫(yī)藥有限責(zé)任公司、匈牙利REAGENS公司提供的譜細(xì)胞，由上海血液生物醫(yī)藥有限責(zé)任公司生產(chǎn)的陽性對照IgG抗D試劑，珠海貝索生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)研究的凝聚胺試劑盒，西班牙Grifols公司、DianaGel提供的微柱凝膠抗人球蛋白卡，由Hamilton公司生產(chǎn)的Star全自動加樣儀，所使用的型號為TITRAMAX 101的震蕩儀由德國Heidolph公司生產(chǎn)，Tecan Sunrise全自動酶標(biāo)儀由瑞士帝肯公司生產(chǎn)，所使用的型號為ROTINA 35R平板離心機(jī)由德國Hettich公司生產(chǎn)，日本久保田公司生產(chǎn)的型號為KA-2200的離心機(jī)，西班牙Grifols公司提供的戴愛娜手工卡式血型/配型系統(tǒng)以及浙江拱東提供的96孔U型板[3]。

1.2.2 檢測方法 （1）篩選不規(guī)則抗體：將待檢血漿和相關(guān)試劑依據(jù)設(shè)置加入96孔U型板中，每板將IgG抗D試劑為8孔陽性對照。將50 μL的血漿和20 μL篩選細(xì)胞以及150 μL IM，在此基礎(chǔ)上加入50 μL的凝聚胺溶液，通過震蕩將其混勻，利用1 000 r/min的離心機(jī)將上清液從血漿中分離出來，震蕩頻率為7檔/min，依據(jù)是否出現(xiàn)凝集現(xiàn)象判定上述步驟是否有效，隨后加入50 μL的重新懸浮液，震蕩頻率仍為7檔/min，由全自動酶標(biāo)儀對結(jié)果進(jìn)行判讀。出現(xiàn)凝集現(xiàn)象是陽性標(biāo)本[4]。（2）鑒定不規(guī)則抗體：利用譜細(xì)胞使用試管法及微柱凝膠法對不規(guī)則抗體篩選陽性的樣本實施特異性鑒定[5]。（3）測定抗體效價：倍比稀釋已鑒定完抗體特異性的樣本，利用微柱凝膠法對抗體效價進(jìn)行測定[6]。

1.3 觀察指標(biāo) （1）分析不規(guī)則抗體的檢出情況。（2）分析不同性別不規(guī)則抗體檢出情況。（3）分析不規(guī)則抗體的特異性、類型、效價。

1.4 統(tǒng)計學(xué)處理 采用SPSS 22.0軟件對所得數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計分析，計量資料用（x±s）表示，比較采用t檢驗;計數(shù)資料以率（%）表示，比較采用字2檢驗。以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 不規(guī)則抗體的檢出情況分析 經(jīng)過上述儀器和試劑的篩選和鑒定，本研究中的25 029例樣本中，篩查出7例不規(guī)則抗體，其檢出率為0.028%（7/25 029），另外規(guī)則抗體為25 022例，其檢出率為99.972%（25 022/25 029）。

2.2 不同性別不規(guī)則抗體檢出情況分析 女性無償獻(xiàn)血者中不規(guī)則抗體的陽性率與男性比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（字2=1.258，P>0.05），見表1。

2.3 不規(guī)則抗體的效價、類型、特異性分析 最終的鑒定結(jié)果表明，7例不規(guī)則抗體中，IgG型1例，IgM型抗體6例，其中1例抗-D，2例抗-M。4例冷抗體，以上抗體效價均<8。見表2。

3 討論

在歐美地區(qū)等多個發(fā)達(dá)國家中，普遍采用紅細(xì)胞對獻(xiàn)血者體內(nèi)的不規(guī)則抗體進(jìn)行篩選，中國香港、臺灣等地區(qū)的采供血機(jī)構(gòu)在進(jìn)行常規(guī)篩查時，將不規(guī)則抗體篩選作為項目[7]。對世界上不同地區(qū)的無償獻(xiàn)血人群進(jìn)行不規(guī)則抗體檢查，其檢出率存在一定的不同，造成這一現(xiàn)象的原因可能為不同地區(qū)、不同人種人群存在的血型系統(tǒng)差異[8]?，F(xiàn)階段，國內(nèi)尚未形成統(tǒng)一且規(guī)范的篩查規(guī)范，因此未對獻(xiàn)血者必須接受不規(guī)則抗體篩查進(jìn)行強(qiáng)制要求[9]。但隨著醫(yī)學(xué)技術(shù)中檢測技術(shù)的持續(xù)革新，因不規(guī)則抗體造成不良的臨床輸血事故越來越多，同時醫(yī)學(xué)界對不良的臨床輸血的關(guān)注、引入電子交叉配血理念等多種因素，使得采血站的醫(yī)生提高了對獻(xiàn)血者實施不規(guī)則抗體篩選的重視程度[10]?，F(xiàn)階段，東莞、武漢和杭州以及廣州等多個地區(qū)都對獻(xiàn)血者進(jìn)行不規(guī)則抗體篩查的活動，同時依據(jù)臨床實踐獲得的有關(guān)數(shù)據(jù)進(jìn)行報道[11]。

輸血在臨床救治危重患者的過程中發(fā)揮著極為關(guān)鍵的作用，血站應(yīng)該保證所提供的血液制品安全且有效[12]。近幾年，隨著醫(yī)學(xué)技術(shù)的不斷進(jìn)步，輸血技術(shù)水平也得到了迅速的發(fā)展，同時臨床上血型鑒定試劑具有極高的敏感度。目前，已經(jīng)很少發(fā)生因弄錯血型造成臨床救治期間出現(xiàn)溶血性輸血反應(yīng)，但除ABO血型外，其他血型系統(tǒng)極有可能存在不規(guī)則抗體，其極易造成不良的臨床輸血反應(yīng)。依據(jù)美國食品、藥品管理局的有關(guān)統(tǒng)計，因不良輸血反應(yīng)造成的死亡患者中，因溶血性輸血反應(yīng)死亡的人數(shù)占總死亡人數(shù)的55.5%，其中因為不規(guī)則抗體造成的占14.0%[13]。如果將包含不規(guī)則抗體陽性的血液向血液中存在紅細(xì)胞抗原的患者輸入，抗原抗體馬上出現(xiàn)免疫反應(yīng)，在此基礎(chǔ)上加入補(bǔ)體，使得患者體內(nèi)的紅細(xì)胞出現(xiàn)嚴(yán)重的溶血現(xiàn)象，從而形成溶血性輸血反應(yīng)，病情嚴(yán)重時對患者的生命健康產(chǎn)生極大的威脅[14]。不規(guī)則抗體分為兩種類型，主要是IgM型以及IgG型。其中IgM型不規(guī)則抗體通過一定濃度的鹽水，能夠與對應(yīng)的紅細(xì)胞進(jìn)行直接連接，使其產(chǎn)生凝集現(xiàn)象，這種現(xiàn)象比較明顯，肉眼均可見;而IgG型抗體通過鹽水并不會出現(xiàn)凝集現(xiàn)象，只能致敏相應(yīng)抗原的紅細(xì)胞，其檢驗利用酶法、低離子強(qiáng)度溶液法和抗人球蛋白法以及聚凝胺法、凝膠法等多種方法和先進(jìn)的血型血清學(xué)技術(shù)進(jìn)行實現(xiàn)[15]。

本研究中主要利用全自動凝聚胺微板法對2018年2月-2020年2月順德地區(qū)無償獻(xiàn)血者實施抗體篩查項目，結(jié)果顯示，本研究中的25 029例樣本中，篩查出7例不規(guī)則抗體，其檢出率為0.028%，另外規(guī)則抗體為25 022例，其檢出率為99.972%。7例不規(guī)則抗體中，IgG型1例，IgM型抗體6例，其中1例抗-D，2例抗-M。4例冷抗體。研究可知，IgG型抗體一般在造成臨床輸血反應(yīng)發(fā)生的抗體中占有主要地位，但在本文的研究中，所檢查出的IgG型抗體效價均小于8，所以其臨床上免疫性溶血反應(yīng)的出現(xiàn)率極低。其他不規(guī)則抗體權(quán)屬于IgM型，具有比較低的抗體效價，主要是在4～8。抗體能夠在4～20 ℃的溫度下與紅細(xì)胞膜抗原相互結(jié)合，極易對臨床的血型鑒定以及交叉配血等操作產(chǎn)生消極的影響[16]。IgM型抗體是一種天然抗體，IgG型抗體一般是利用輸血、器官移植等多種免疫刺激方式形成的，據(jù)相關(guān)報道可知，每進(jìn)行一次臨床輸血，其抗體的形成率占4%，大部分抗體普遍形成于輸血1～2次后[17]。

本研究結(jié)果顯示，研究中16 241例男性進(jìn)行不規(guī)則抗體檢查，其中檢出的不規(guī)則抗體為4例，檢出率為0.025%;8 788例女性進(jìn)行不規(guī)則抗體檢查，其中檢出不規(guī)則的抗體為3例，檢出率為0.034%;女性無償獻(xiàn)血者中不規(guī)則抗體的陽性率與男性比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。相關(guān)的資料報道，IgG型抗體的產(chǎn)生與女性個體特有的妊娠等免疫刺激具有密切的關(guān)系，但因為獻(xiàn)血者在獻(xiàn)血時所登記的一般資料中未記錄妊娠狀況，所以本研究并未對妊娠狀況和IgG型抗體的形成之間的關(guān)系進(jìn)行深入研究分析。而IgM型抗體呈現(xiàn)陽性差異的形成原因仍未明晰，相關(guān)權(quán)威研究顯示，其與自身的性激素調(diào)節(jié)身體免疫功能具有一定的相關(guān)性[18]。女性獻(xiàn)血者所獻(xiàn)出的血漿，其輸入對象為特殊患者，包括麻醉患者、老人或者兒童等，應(yīng)該進(jìn)行不規(guī)則抗體篩查。通過對其進(jìn)行特異性鑒定，本研究表明所檢測出的不規(guī)則抗體普遍存在于Rh、P、MN、Lewis等四類血型系統(tǒng)中[19]。本研究結(jié)果顯示，2例抗-M，1例抗-D，冷抗體4例。與世界上其他地區(qū)具有一定的差異性[20]，其說明不同地區(qū)、不同人種的獻(xiàn)血者的特異性具有一定的差異。

綜上所述，隨著現(xiàn)階段輸血醫(yī)學(xué)技術(shù)的不斷革新，對血型鑒定和抗體篩查成為臨床輸血中的必備部分。對順德地區(qū)無償獻(xiàn)血者實施不規(guī)則抗體的檢查，能夠清楚認(rèn)識到機(jī)體內(nèi)不規(guī)則抗體所存在的頻率、類型以及特異性、效價，能夠促進(jìn)電子交叉配血的實行，同時為順德地區(qū)臨床輸血提供真實的數(shù)據(jù)支持，保障了臨床用血安全、有效和及時的特性，值得推廣應(yīng)用。

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（收稿日期：2020-04-21） （本文編輯：姬思雨）