• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    泥東風(fēng)螺EST-SSR開發(fā)及其群體遺傳多樣性分析*

    2020-07-26 10:36:06王曉清陳貞年周先文曾志南
    漁業(yè)科學(xué)進(jìn)展 2020年4期
    關(guān)鍵詞:分析

    熊 鋼 王曉清 王 佩 陳貞年 周先文,3 康 驪 曾志南

    泥東風(fēng)螺EST-SSR開發(fā)及其群體遺傳多樣性分析*

    熊 鋼1,2王曉清2①王 佩2陳貞年2周先文2,3康 驪1曾志南4

    (1. 湖南生物機(jī)電職業(yè)技術(shù)學(xué)院動物科技系 長沙 410127;2. 湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)動物科技學(xué)院 長沙 410128;3. 湘西州水產(chǎn)工作站 吉首 416000;4. 福建省水產(chǎn)研究所 廈門 361013)

    本研究采用MISA軟件分析泥東風(fēng)螺()轉(zhuǎn)錄組中微衛(wèi)星信息。結(jié)果顯示,從轉(zhuǎn)錄組中共獲得16324個SSR,共有181種重復(fù)基元;泥東風(fēng)螺轉(zhuǎn)錄組中不同類型微衛(wèi)星的重復(fù)基元具有不同的分布特征,其中,二核苷酸重復(fù)基元中AC/GT(70.58%)重復(fù)基元以重復(fù)6次出現(xiàn)頻率占優(yōu);長度為12~20 bp的SSR占63.95%,長度為21~25 bp的SSR占9.14%,總體的平均長度為18.4 bp。隨機(jī)選取其中50條序列設(shè)計引物,通過對福建野生泥東風(fēng)螺群體(WP)DNA樣本進(jìn)行PCR擴(kuò)增和分型,結(jié)果獲得23個多態(tài)性位點(diǎn),等位基因數(shù)目為2~7個不等,期望雜合度(e)為0.190~0.937,觀察雜合度(o)為0.065~0.936,多態(tài)性信息含量(PIC)為0.061~0.777,有4個位點(diǎn)顯著偏離哈迪溫伯格平衡(Hardy-Weinberg equilibrium, HWE) (<0.05)。對野生群體和養(yǎng)殖群體(BP)遺傳多樣性分析顯示,野生群體和養(yǎng)殖群體的平均e分別為0.491和0.544,平均o分別為0.477和0.564,平均PIC分別為0.541和0.407。is結(jié)果顯示,野生群體和養(yǎng)殖群體分別有13個和9個位點(diǎn)雜合子過剩。群體間遺傳分化指數(shù)(st)為0.001~0.655,平均值為0.053 (0.05

    泥東風(fēng)螺;轉(zhuǎn)錄組;EST-SSR;遺傳多樣性

    東風(fēng)螺(sp)隸屬于軟體動物的腹足綱、新腹足目、蛾螺科、東風(fēng)螺屬(王如才等, 1988),俗稱花螺、泥螺、南風(fēng)螺等,分布于熱帶和亞熱帶海域,是我國沿海重要的經(jīng)濟(jì)軟體動物。我國現(xiàn)有方斑東風(fēng)螺()、泥東風(fēng)螺()和臺灣東風(fēng)螺 () 3種(張漢華等, 2004; 陳利雄等, 2004)。泥東風(fēng)螺分布于我國福建至廣西沿海地區(qū)。隨著人類活動對海洋的影響,海洋中野生泥風(fēng)螺銳減,我國研究人員已開展了泥東風(fēng)螺的人工選育(葉泉土等, 2015a; 林國清等, 2015)、人工養(yǎng)殖(葉泉土等, 2015b)、人工增殖放流(葉泉土等, 2015b)和群體遺傳多樣性AFLP分析(秦溱等, 2014)的相關(guān)研究。

    簡單重復(fù)序列(Simple sequence repeats, SSR)又稱微衛(wèi)星DNA、短串聯(lián)重復(fù)序列,一般以1~6個堿基為核心序列,廣泛存在真核生物的基因組中,具有數(shù)量豐富、多態(tài)性高、共顯性等特點(diǎn)(Powell, 1996)。Morgante等(1993)將微衛(wèi)星用于遺傳和物理圖譜的構(gòu)建、品種鑒定、基因定位、遺傳多樣性、分類和進(jìn)化及比較基因組等方面的研究。目前,SSR標(biāo)記主要分為基因組SSR(Genomic SSR, gSSR)和表達(dá)序列標(biāo)簽SSR(Expressed sequence tag SSR, EST-SSR)兩種。EST-SSR反映的是基因的編碼部分,可為功能基因提供更可靠的功能性標(biāo)記,所以它在物種起源與進(jìn)化、資源多樣性、遺傳作圖、功能基因的發(fā)現(xiàn)與定位和比較基因組學(xué)研究等方面都有重要的利用價值。EST-SSR多態(tài)性可能與基因功能直接相關(guān),因此,比gSSR標(biāo)記具有更高通用性(Eujayl, 2002)。新一代測序技術(shù)可以對全基因組范圍內(nèi)的轉(zhuǎn)錄本進(jìn)行大規(guī)模的高通量測序,并能產(chǎn)生海量的轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)(Simon, 2009),這為功能基因組SSR標(biāo)記的開發(fā)提供了更豐富和極有價值的可利用資源(Graham, 2010)。我國研究工作者采用新一代測序技術(shù)已從曼氏無針烏賊()(管奧等, 2018)、長江刀鱭()(于愛清等, 2018)、櫛江珧()(李東明等, 2017)、凡納濱對蝦()(李東宇等, 2017)、扇貝() (張廣明等, 2018; 倪守勝等, 2018)、黃口荔枝螺()(李威等, 2015)和泥蚶() (史松富等, 2013)等水生動物中成功開發(fā)并應(yīng)用于物種群體遺傳多樣性分析的SSR標(biāo)記。本課題組利用軟件分析泥東風(fēng)螺轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)中微衛(wèi)星分布特點(diǎn)和規(guī)律,利用篩選SSR標(biāo)記對野生群體和養(yǎng)殖群體的遺傳多樣性進(jìn)行分析,可為泥東風(fēng)螺微衛(wèi)星標(biāo)記的開發(fā)及應(yīng)用研究奠定基礎(chǔ)。

    1 材料與方法

    1.1 材料

    野生泥東風(fēng)螺采自福建連江和長樂,共62只。養(yǎng)殖群體來源于福建長樂泥東風(fēng)螺育種場,共206只。

    1.2 方法

    1.2.1 泥東風(fēng)螺轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)來源 泥東風(fēng)螺轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)是由腹足和肝胰腺組織的mRNA建立混合池,經(jīng)Illumina HiSeqTM2000高通量測序平臺獲得的轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)文庫。

    1.2.2 泥東風(fēng)螺轉(zhuǎn)錄組SSR的篩選及引物設(shè)計

    利用軟件MISA(Kanehisa, 2008) (http://pgrc. ipk-gatersleben.de/misa/)對泥東風(fēng)螺轉(zhuǎn)錄組中Unigene的cDNA序列數(shù)據(jù)進(jìn)行SSR搜索,設(shè)置參數(shù):單堿基最少重復(fù)10次以上,雙堿基最少重復(fù)6次以上,3~6堿基最少重復(fù)5次以上;混合重復(fù)的2個重復(fù)之間的距離不能大于100 bp。隨機(jī)挑選EST-SSR序列,參照引物設(shè)計原則(張新宇等, 2004),利用軟件Primer premier 5.0在重復(fù)序列兩側(cè)保守區(qū)設(shè)計微衛(wèi)星擴(kuò)增引物。

    1.2.3 DNA提取 取泥東風(fēng)螺腹足,采用天澤基因柱式動物DNA提取試劑盒提取泥東風(fēng)螺總DNA??侱NA用1%瓊脂糖凝膠電泳檢測,?20℃保存?zhèn)溆?。SSR分析采用20 μl PCR擴(kuò)增反應(yīng)體系,擴(kuò)增條件為:94℃預(yù)變性5 min;94℃變性30 s,退火(退火溫度見表3) 30 s,72℃延伸30 s,30個循環(huán);72℃延伸5 min,在4℃條件下保存。擴(kuò)增產(chǎn)物采用8%變性聚丙烯酰胺凝膠電泳,銀染顯色,人工讀帶后記錄帶型。

    1.2.4 EST-SSR分析 用PopGene 1.3.1(Yeh, 1997)軟件計算有效等位基因數(shù)(Effective numbers of allele,e)、觀測雜合度(Observed heterozygosity,o)、(Expected heterozygosity,e)、群體間基因流(m)、固定系數(shù)(st)和群體近交系數(shù)(is)。位點(diǎn)多態(tài)性(Polymorphis information content, PCI)采用軟件包計算,Cervus 3.03 (Kalinowsk, 2007)軟件計算哈迪溫伯格平衡(Hardy-Weinberg equilibrium, HWE)。

    2 結(jié)果

    2.1 轉(zhuǎn)錄組中EST-SSR特性

    利用MISA軟件對Unigenes的cDNA序列數(shù)據(jù)中篩選1 kb以上的Unigenes進(jìn)行SSR分析,共篩選到16324個SSR符合設(shè)置條件(表1),泥東風(fēng)螺轉(zhuǎn)錄組中SSR種類豐富,共有181種重復(fù)類型;各種類型的出現(xiàn)頻率差異較大,主要集中在單核苷酸重復(fù)、二核苷酸重復(fù)和三核苷酸重復(fù),分別占SSR總數(shù)量的40.17%、29.75%和15.27%,四核苷酸重復(fù)和五核苷酸重復(fù)數(shù)量少,分別占0.76%和0.04%,未發(fā)現(xiàn)多于5個核苷酸重復(fù)。SSR在整個泥東風(fēng)螺轉(zhuǎn)錄組中的出現(xiàn)頻率和發(fā)生頻率分別為13.62%和6.86%,平均每350.78 kb出現(xiàn)1個SSR。各種重復(fù)基元出現(xiàn)頻率差異大(表2),如:AC/GT重復(fù)基元占二核苷酸重復(fù)的70.58%,AGG/CCT和ACC/GGT重復(fù)基元分別占三核苷酸重復(fù)的22.60%和20.50%。從整體分布分析中發(fā)現(xiàn)多核苷酸重復(fù)序列以重復(fù)6次出現(xiàn)頻率占優(yōu)勢。長度為12~20 bp的SSR占63.95%,長度為21~25 bp的SSR占9.14%,總體的平均長度為18.4 bp。

    表1 泥東風(fēng)螺轉(zhuǎn)錄組中EST-SSRs重復(fù)次數(shù)分布

    Tab.1 Repeat number of EST-SSRs in B. lutosa transcriptome

    表2 二核苷酸和三核苷酸EST-SSRs不同重復(fù)基元分布比例

    Tab.2 Percentage of different motifs dinucleotide and trinucleotide EST-SSRs

    2.2 擴(kuò)增位3點(diǎn)的多態(tài)性

    隨機(jī)選取其中50條序列設(shè)計引物,通過對福建野生泥東風(fēng)螺62只個體DNA樣本進(jìn)行PCR擴(kuò)增和分型,獲得23個多態(tài)性位點(diǎn)(表3)。23個位點(diǎn)的等位基因數(shù)為2~7個不等,平均a為3.5,平均e為0.491,平均o為0.477,平均PIC為0.451。HWE平衡檢驗(yàn)顯示,4個位點(diǎn)顯著偏離平衡(<0.05)(表4)。

    表3 泥東風(fēng)螺EST-SSR引物信息

    Tab.3 Information of EST-SSR primer in the B. lutosa

    2.3 野生群體和養(yǎng)殖群體遺傳多樣性

    利用23個多態(tài)性位點(diǎn)分析泥東風(fēng)螺野生群體和養(yǎng)殖群體遺傳多樣性(表4),結(jié)果顯示,福建野生群體e值為0.190~0.937,o為0.065~0.936,PIC為0.061~ 0.777,其中,9個微衛(wèi)星位點(diǎn)表現(xiàn)為高度多態(tài)性(PIC>0.5),11個位點(diǎn)表現(xiàn)為中度多態(tài)性(0.5>PIC>0.25),3個位點(diǎn)表現(xiàn)為低度多態(tài)性(PIC<0.25)。養(yǎng)殖群體e(0.183~0.979)和o(0.130~0.980)的平均值均高于野生群體,但PIC(0.020~0.787)的平均值低于野生群體。SPSS分析群體間e、o和is差異顯著(<0.05),PIC差異極顯著((<0.01)。養(yǎng)殖群體高度多態(tài)性位點(diǎn)和低度多態(tài)性位點(diǎn)分別為7個和5個。在養(yǎng)殖群體樣本中檢測到B05、B08、B12、B15、B16和B20位點(diǎn)中出現(xiàn)等位基因缺失現(xiàn)象。野生群體和養(yǎng)殖群is分別為–0.214~0.377和–0.130~0.129,群體的is平均值都大于0,在野生群生群體和養(yǎng)殖群體中,位點(diǎn)is<0的分別有13個和9個。HWE平衡檢驗(yàn)顯示,野生群體和養(yǎng)殖群體分別有4個和9個位點(diǎn)偏離平衡。

    2.4 野生群體和養(yǎng)殖群體遺傳分化

    Popgene分析野生群體與養(yǎng)殖體間的位點(diǎn)基因流值(m)為0.132~543.787(表4),平均m為4.450,說明這2個群體間的遺傳分化小。群體間位點(diǎn)遺傳分化指數(shù)(st)為0.001~0.655(表4),平均st為0.053,屬于遺傳分化中等(0.05

    3 討論

    3.1 轉(zhuǎn)錄組中EST-SSR分布

    不同物種轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)庫中微衛(wèi)星分布的頻率存在差異。本研究分析了泥東風(fēng)螺轉(zhuǎn)錄組中SSR的分布頻率和重復(fù)基元的特點(diǎn)。從泥東風(fēng)螺SSR重復(fù)基元來看,二核苷酸重基元中AC/GT占70.58.%,這與其他水產(chǎn)動物中AC/GT重復(fù)最多一致(曾聰?shù)? 2013)。三核苷酸重基元占總數(shù)15.27%,其中,CCG/CGG重復(fù)基元數(shù)量最少,這與一些真核生物中發(fā)現(xiàn)一定比例的CCG/CGG重復(fù)相似(Toth, 2000)。Schlottere等(1992)推測微衛(wèi)星的長度因在復(fù)制過程中的滑動而反映了微衛(wèi)星位點(diǎn)獲得(或失去)重復(fù)基元的活躍程度。Schlotterer(2000)認(rèn)為,SSR位點(diǎn)的變異頻率與基元重復(fù)數(shù)存在一定正相關(guān),即重復(fù)次數(shù)越多,SSR產(chǎn)生變異的可能性越大。Temnykh等(2001)進(jìn)一步研究表明,SSR的長度是影響其多態(tài)性高低的重要因素,據(jù)此分析,泥東風(fēng)螺轉(zhuǎn)錄組基因所含的微衛(wèi)星長度絕大部分分布在12~25 bp之間,推測是受到強(qiáng)烈趨同選擇的壓力影響。

    表4 泥東風(fēng)螺23個EST-SSR位點(diǎn)的野生群體和養(yǎng)殖群體遺傳多樣性分析

    Tab.4 Genetic diversity of wild and breeding populations in B. lutosa at 23 EST-SSR loci

    3.2 EST-SSR在泥東風(fēng)螺野生和養(yǎng)殖群體中的多態(tài)性變化

    對福建野生群體和養(yǎng)殖群體的位點(diǎn)各項(xiàng)參數(shù)進(jìn)行分析,結(jié)果顯示,野生群體雜合子過剩(is<0,表明存在雜合子過剩)現(xiàn)象比養(yǎng)殖群體多4個位點(diǎn)。養(yǎng)殖群體有6個位點(diǎn)檢測到等位基因缺失,這可能與本研究選取樣本數(shù)量較少及養(yǎng)殖群體選擇的親本來自不同地理群體有關(guān)。o和e是判定群體遺傳多樣性水平的重要指標(biāo),養(yǎng)殖群體中平均o和e顯著高于野生群體,推測是因目前養(yǎng)殖群體選育采用的技術(shù)策略導(dǎo)致養(yǎng)殖群體的遺傳多樣性發(fā)生變化。

    3.3 泥東風(fēng)螺野生群體和養(yǎng)殖群體遺傳多樣性與遺傳分化

    野生群體和養(yǎng)殖群體間st為0.053 (0.054),表明不同地理群體親本種群間的基因交流充分。

    本研究中,泥東風(fēng)螺養(yǎng)殖群體的遺傳多樣性顯著低于野生群體,這與中國明對蝦()(王軍等, 2018)、草魚()(王沈同等, 2018)、大黃魚() (趙廣泰等, 2010)、鱖()(鄭荷子等, 2013)水產(chǎn)動物養(yǎng)殖群體比野生群體遺傳多性低的研究結(jié)果一致,其原因可能為目前養(yǎng)殖泥東風(fēng)螺繁育親本群體來源和個體數(shù)量問題。研究表明,本研究所開發(fā)的SSR具有較高的多態(tài)性,研究的群體具有較高的遺傳多樣性,具有進(jìn)一步選育的價值。

    SSR標(biāo)記在水生生物之間通用性較好(張瓊等, 2010; 劉必謙等, 2007),SSR遺傳作圖將使物種之間連鎖信息的轉(zhuǎn)換更快,實(shí)現(xiàn)多個圖譜整合,從而更有利于比較基因組學(xué)的研究。本研究開發(fā)的泥東風(fēng)螺EST-SSR標(biāo)記對泥東風(fēng)螺的親子譜系分析、群體遺傳結(jié)構(gòu)分析、圖譜構(gòu)建、增殖放流效果評估和分子輔助育種等研究方面具有重要的意義。

    Chen LX, Wu JF. Culture technique and industrial prospect of ivory shell. Shandong Fisheries, 2004, 21(10): 9–11 [陳利雄, 吳進(jìn)鋒. 東風(fēng)螺的增養(yǎng)殖技術(shù)及產(chǎn)業(yè)化前景. 齊魯漁業(yè), 2004, 21(10): 9–11]

    Eujayl I, Sorrells ME, Baum M,. Isolation of EST-derived microsatellite markers for genotyping the A and B genomes of wheat. Theoretical and Applied Genetics, 2002, 104(2–3): 399–407

    Graham IA, Besser K, Blumer S,. The genetic map ofL. identifies loci affecting yield of the antimalarial drug artemisinin. Science, 2010, 327(5963): 328–331

    Guan A, Wu YT, Chen Y,. Deep sequence-based transcriptome analysis of microsatellites in the cuttlefish (). Progress in Fishery Sciences, 2018, 39(3): 144–151 [管奧, 毋玉婷, 陳宇, 等. 曼氏無針烏賊轉(zhuǎn)錄組微衛(wèi)星特征分析. 漁業(yè)科學(xué)進(jìn)展, 2018, 39(3): 144–151]

    Kalinowski ST, Taper ML, Marshall TC. Revising how the computer program CERVUS accommodates genotyping error increases success in paternity assignment. Molecular Ecology, 2007, 16(5): 1099–1106

    Kanehisa M, Araki M, Goto S,. KEGG for linking genomes to life and the environment. Nucleic Acids Research, 2008, 36: D480–D484

    Li DM, Yang AG, Wu B,. Development and application of the EST-SSR markers in. Progress in Fishery sciences, 2017, 38(2): 137–142 [李東明, 楊愛國, 吳彪, 等. 櫛江珧() EST-SSR標(biāo)記的開發(fā)與應(yīng)用. 漁業(yè)科學(xué)進(jìn)展, 2017, 38(2): 137–142]

    Li DY, Meng XH, Kong J,. The difference of genetic diversity and the comparison of growth performance between selected population and hybridized population of pacific white shrimp () under low temperature conditions. Progress in Fishery sciences, 2017, 38(4): 69–77 [李東宇, 孟憲紅, 孔杰, 等. 凡納濱對蝦()選育群體與雜交群體遺傳多樣性差異及其在低溫條件下生長性能的比較. 漁業(yè)科學(xué)進(jìn)展, 2017, 38(4): 69–77]

    Li W, Zhao S, Jiao HF,. Characterization and analysis of microsatellite markers inusing next generation sequencing. Marine Sciences, 2015, 39(11): 61–67 [李威, 趙姍, 焦海峰, 等. 黃口荔枝螺轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)的微衛(wèi)星標(biāo)記開發(fā)與分析. 海洋科學(xué), 2015, 39(11): 61–67]

    Lin GQ, Lin D, Chen XF,. Research on the scale artificial breeding technique and the morphological observation of the early developmental stages of. Journal of Fujian Fisheries, 2015, 37(1): 20–28 [林國清, 林丹, 陳曦飛, 等. 泥東風(fēng)螺()規(guī)?;斯び缂夹g(shù)和早期發(fā)育觀察. 福建水產(chǎn), 2015, 37(1): 20–28]

    Liu BQ, Zeng QG, Wang YJ,. The cross-species amplification and validation of EST-SSR loci in. Acta Hydrobiolonica Sinica, 2007, 31(2): 149–154 [劉必謙, 曾慶國, 王亞軍, 等. 條斑紫菜EST-SSR引物種間轉(zhuǎn)移擴(kuò)增真實(shí)性研究. 水生生物學(xué)報, 2007, 31(2): 149–154]

    Morgante M, Olivieri AM. PCR-amplified microsatellites as markers in plant genetics. Plant Journal, 1993, 3(1): 175–182

    Ni SS, Yang Y, Liu SF,. Microsatellite analysis ofusing next-generation sequencing method. Progress in Fishery sciences, 2018, 39(1): 107–113 [倪守勝, 楊鈺, 柳淑芳, 等. 基于高通量測序的蝦夷扇貝基因組微衛(wèi)星特征分析. 漁業(yè)科學(xué)進(jìn)展, 2018, 39(1): 107–113]

    Powell WMGCP. Polymorphism revealed by simple sequence repeats. Trends in Plant Science, 1996, 7(1): 215–222

    Qin Z, Wang XQ, Zeng ZN,. Genetic distance in four populations of(Lamer) assessed by AFLP makers. Journal of Hunan Agricultural University (Natural Sciences), 2014, 40(3): 299–304 [秦溱, 王曉清, 曾志南, 等. 泥東風(fēng)螺4個群體遺傳多樣性的AFLP分析. 湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版), 2014, 40(3): 299–304]

    Schlotterer C, Tautz D. Slippage synthesis of simple sequence DNA. Nucleic Acids Research, 1992, 20(2): 211–215.

    Schlotterer C. Evolutionary dynamics of microsatellite DNA. Chromosoma, 2000, 109(6): 365–371

    Shi SF, Yao HH, Lin ZH,. Characterization and analysis of 24 polymorphic EST-SSR loci in. Marine Sciences, 2013, 37(8): 42–46 [史松富, 姚韓韓, 林志華, 等. 24個泥蚶EST-SSR標(biāo)記的開發(fā)與分析. 海洋科學(xué), 2013, 37(8): 42–46]

    Simon SA, Zhai J, Nandety RS,. Short-read sequencing technologies for transcriptional analyses. Annual Review of Plant Biology, 2009, 60: 305–333

    Temnykh S, DeClerck G, Lukashova A,. Computational and experimental analysis of microsatellites in rice (L.): Frequency, length variation, transposon associations, and genetic marker potential. Genome Research, 2001, 11(8): 1441–1452

    Toth G, Gaspari Z, Jurka J. Microsatellites in different eukaryotic genomes: Survey and analysis. Genome Research, 2000, 10(7): 967–981

    Wang J, Wang QY, Kong J,. SSR analysis on genetic diversity in breeding and wild populations of. Progress in Fishery sciences, 2018, 39(2): 104–111 [王軍, 王清印, 孔杰, 等. 中國明對蝦人工選育群體與野生群體遺傳多樣性的SSR分析. 漁業(yè)科學(xué)進(jìn)展, 2018, 39(2): 104–111]

    Wang RC. China aquatic shellfish primary color guide. Hangzhou: Zhejiang Science and Technology Press, 1988 [王如才. 中國水生貝類原色圖鑒. 杭州: 浙江科學(xué)技術(shù)出版社, 1988]

    Wang ST, Shen YB, Meng XZ,. Genetic variability in wild and selected populations ofusing microsatellite markers. Journal of Fisheries of China, 2018(8): 1273–1284 [王沈同, 沈玉幫, 孟新展, 等. 草魚野生與選育群體遺傳變異微衛(wèi)星分析. 水產(chǎn)學(xué)報, 2018(8): 1273–1284]

    Ye QT, Liu Y, Zeng ZN,. Tracking survey after enhancement and releasing ofand its effects analysis. Journal of Fujian Fisheries, 2015a, 37(2): 140–147 [葉泉土, 劉勇, 曾志南, 等. 泥東風(fēng)螺增殖放流跟蹤調(diào)查及效果分析. 福建水產(chǎn), 2015a, 37(2): 140–147]

    Ye QT, Wu QS, Zeng ZN,. Effect of different bottom sowing density on growth and survival ofjuveniles. Journal of Fujian Fisheries, 2015b, 37(1): 36–42 [葉泉土, 巫旗生, 曾志南, 等. 不同底播密度對泥東風(fēng)螺()幼螺生長和存活的影響. 福建水產(chǎn), 2015b, 37(1): 36–42]

    Yeh FC,Boyle TJB. Population genetic analysis of codominant and dominant markers and quantitative traits. Belgian Journal of Botany, 1997, 129–157

    Yu AQ, Shi YH, Xu JB,. Characteristic analysis of microsatellites in the selectedbased on transcriptome dataset. Progress in Fishery Sciences, 2019, 40(5): 101–109 [于愛清, 施永海, 徐嘉波, 等. 長江刀鱭選育群體轉(zhuǎn)錄組EST-SSR的分布特征分析. 漁業(yè)科學(xué)進(jìn)展, 2019, 40(5): 101–109]

    Zeng C, Gao ZX, Luo W,. Characteristics of microsatllites in blunt snout bream () EST sequences using 545 FLX. Acta Hydrobiolonica Sinica, 2013, 37(5): 982–988 [曾聰, 高澤霞, 羅偉, 等. 基于454GS FLX高通量測序的團(tuán)頭魴ESTs中微衛(wèi)星特征分析. 水生生物學(xué)報, 2013, 37(5): 982–988]

    Zhang GM, Sun XJ, Wu B,. Transferability of EST-SSR frominto. Progress in Fishery Sciences, 2018, 39(4): 1–8 [張廣明, 孫秀俊, 吳彪, 等. 蝦夷扇貝EST-SSR標(biāo)記在櫛孔扇貝中的通用性研究. 漁業(yè)科學(xué)進(jìn)展, 2018, 39(4): 1–8]

    Zhang HH, Wu JF, Chen LX,. Prospect of artificial breeding, breeding and industrialization of. Southern Aquaculture, 2004(11): 2–5 [張漢華, 吳進(jìn)鋒, 陳利雄, 等. 東風(fēng)螺人工育苗、養(yǎng)殖及產(chǎn)業(yè)化發(fā)展前景. 南方水產(chǎn), 2004(11): 2–5]

    Zhang Q, Liu XL, Li XL,. Application of simple sequence repeats derived from expression sequence tags (EST-SSRs) in aquatic animal genomics. Fisheries Science, 2010, 29(5): 302–306 [張瓊, 劉小林, 李喜蓮, 等. EST-SSR分子標(biāo)記在水生動物遺傳研究中的應(yīng)用. 水產(chǎn)科學(xué), 2010, 29(5): 302–306]

    Zhang XY, Gao YN. To design PCR primers with Oligo 6 and Primer premier 5. China Journal of Bioinformatics, 2004, 2(4): 15–18 [張新宇, 高燕寧. PCR引物設(shè)計及軟件使用技巧. 生物信息學(xué), 2004, 2(4): 15–18]

    Zhao GT, Liu XD, Wang ZY,. Genetic structure and genetic diversity analysis of four consecutive breeding generations of large yellow croaker () using microsatellite markers. Journal of Fisheries of China, 2010, 34(4): 500–507 [趙廣泰, 劉賢德, 王志勇, 等. 大黃魚連續(xù)4代選育群體遺傳多樣性與遺傳結(jié)構(gòu)的微衛(wèi)星分析. 水產(chǎn)學(xué)報, 2010, 34(4): 500–507]

    Zheng HZ, Yi TL, Liang XF,. Genetic structure and genetic diversity analysis of four consecutive breeding generations of. Freshwater Fisheries, 2013, 43(6): 8–12 [鄭荷子, 易提林, 梁旭方, 等. 翹嘴鱖連續(xù)4代選育群體遺傳多樣性及遺傳結(jié)構(gòu)分析. 淡水漁業(yè), 2013, 43(6): 8–12]

    Development and Genetic Diversity Analysis ofwith EST-SSR Markers

    XIONG Gang1,2, WANG Xiaoqing2①, WANG Pei2, CHEN Zhennian2, ZHOU Xianwen2,3, KANG Li1, ZENG Zhinan4

    (1. Department of Animal Science and Technology, Hunan Biological and Electromechanical Polytechnic, Changsha 410127;2. College of Animal Science and Technology, Hunan Agriculture University, Changsha 410128;3. Station of Aquaculture in Xiang xi, Jishou 416000;4. Fisheries Research Institute of Fujian, Xiamen 361013)

    is a marine shellfish that has high economic values. In recent decades, the natural resource ofhas declined due to the environment destruction and overfishing. To further understand the level of genetic diversity and population genetic structure ofwe have evaluated the information characteristics of’s microsatellites, after obtaining transcriptome sequences using MISA software. The results show that a total of 16342 microsatellites and 181 nucleotide repeat motifs were identified. Different types of repeat microsatellites had considerably different distribution characteristics. Mononucleotide and dinucleotide microsatellite repeating units were the most abundant in thetranscriptome, in which 6 repeats of AC/GT (70.58%) were the dominant repeating dinucleotide units. The length of the dominant repeating units was 12~20 bp (63.95%) and 21~25 bp (9.14%), respectively, and the average length was 18.4 bp. Among the 50 designed primer pairs, 23 proved to be polymorphic microsatellite markers in thewild populations (WP). The results showed that the allele number of these microsatellites ranged from 2 to 7. The expected heterozygosity (e) and observed heterozygosity (o) ranged from 0.190 to 0.937, and 0.065 to 0.936, respectively. The polymorphism information content (PIC) ranged from 0.061 to 0.777. Theevalues of the WP and breeding population (BP) were 0.491 and 0.544, respectively. Theovalues of the WP and BP populations were 0.477 and 0.564, respectively. The PIC values for WP and BP were 0.541 and 0.407, respectively. There were 13 population loci that were heterozygote excesses in WP, and 13 population loci in BP. The genetic differentiation index (st) ranged from 0.001 to 0.655, with an average value of 0.053 (0.05

    ; Transcriptome; EST-SSR; Polymorphism

    WANG Xiaoqing, E-mail: wangxiao8258@126.com

    S917.4

    A

    2095-9869(2020)04-0117-08

    10.19663/j.issn2095-9869.20190417002

    http://www.yykxjz.cn/

    熊鋼, 王曉清, 王佩, 陳貞年, 周先文, 康驪, 曾志南. 泥東風(fēng)螺EST-SSR開發(fā)及其群體遺傳多樣性分析. 漁業(yè)科學(xué)進(jìn)展, 2020, 41(4): 117–124

    Xiong G, Wang XQ,Wang P, Chen ZN, Zhou XW, Kang L, Zeng ZN. Development and genetic diversity analysis ofwith EST-SSR markers. Progress in Fishery Sciences, 2020, 41(4): 117–124

    * 海洋公益性行業(yè)科研專項(xiàng)經(jīng)費(fèi)項(xiàng)目(201205021)、國家自然科學(xué)基金(31672640)、湖南省自然科學(xué)基金(2017JJ3134; 2016NK2115)和湖南省教育廳基金項(xiàng)目(17C0935)共同資助[This work was supported by Public Science and Technology Research Funds Projects of Ocean (201205021), National Natural Science Foundation of China (31672640), Natural Science Foundation of Hunan Province(2017JJ3134; 2016NK2115), and Scientific Research Fund of Hunan Province Education Department (17C0935)]. 熊 鋼,E-mail: xionggang709@126.com

    王曉清,教授,E-mail: wangxiao8258@126.com

    2019-04-17,

    2019-05-12

    (編輯 馮小花)

    猜你喜歡
    分析
    禽大腸桿菌病的分析、診斷和防治
    隱蔽失效適航要求符合性驗(yàn)證分析
    電力系統(tǒng)不平衡分析
    電子制作(2018年18期)2018-11-14 01:48:24
    電力系統(tǒng)及其自動化發(fā)展趨勢分析
    經(jīng)濟(jì)危機(jī)下的均衡與非均衡分析
    對計劃生育必要性以及其貫徹實(shí)施的分析
    GB/T 7714-2015 與GB/T 7714-2005對比分析
    出版與印刷(2016年3期)2016-02-02 01:20:11
    網(wǎng)購中不良現(xiàn)象分析與應(yīng)對
    中西醫(yī)結(jié)合治療抑郁癥100例分析
    偽造有價證券罪立法比較分析
    国产成人精品久久久久久| 亚洲精品国产色婷婷电影| 色吧在线观看| 又粗又硬又长又爽又黄的视频| 一边亲一边摸免费视频| 国产视频首页在线观看| 9色porny在线观看| 国产亚洲欧美精品永久| 久久热在线av| 亚洲婷婷狠狠爱综合网| 欧美 亚洲 国产 日韩一| 人妻少妇偷人精品九色| 国产无遮挡羞羞视频在线观看| 久久久久久久国产电影| 国产精品久久久av美女十八| 国产精品不卡视频一区二区| 国产白丝娇喘喷水9色精品| 成年美女黄网站色视频大全免费| 天天操日日干夜夜撸| 久久99蜜桃精品久久| 国产国语露脸激情在线看| 亚洲精品色激情综合| 久久ye,这里只有精品| 美女福利国产在线| 曰老女人黄片| 欧美亚洲日本最大视频资源| 涩涩av久久男人的天堂| 少妇被粗大的猛进出69影院 | 国产av精品麻豆| 一级片免费观看大全| 亚洲熟女精品中文字幕| 久久精品熟女亚洲av麻豆精品| 国产精品不卡视频一区二区| 国产高清不卡午夜福利| 亚洲激情五月婷婷啪啪| av福利片在线| 777米奇影视久久| 免费大片18禁| 夜夜骑夜夜射夜夜干| 日韩一区二区三区影片| 韩国精品一区二区三区 | 国国产精品蜜臀av免费| 亚洲精品av麻豆狂野| 亚洲精品日本国产第一区| 国产精品久久久久久精品古装| 涩涩av久久男人的天堂| 久久av网站| 国产av码专区亚洲av| 国产极品天堂在线| 精品一区二区三区四区五区乱码 | 高清不卡的av网站| 男人爽女人下面视频在线观看| 啦啦啦啦在线视频资源| 精品亚洲成a人片在线观看| 国产精品人妻久久久久久| 90打野战视频偷拍视频| 久久久亚洲精品成人影院| 成人国产麻豆网| 男女高潮啪啪啪动态图| 国产成人a∨麻豆精品| 国产精品99久久99久久久不卡 | 观看美女的网站| 99久久精品国产国产毛片| 妹子高潮喷水视频| 亚洲国产毛片av蜜桃av| 伦精品一区二区三区| 久久人妻熟女aⅴ| 亚洲天堂av无毛| 高清av免费在线| 中文字幕av电影在线播放| 9热在线视频观看99| 在线亚洲精品国产二区图片欧美| 成年女人在线观看亚洲视频| 伦理电影大哥的女人| 亚洲av中文av极速乱| 国产成人免费观看mmmm| 精品第一国产精品| 亚洲四区av| 在线亚洲精品国产二区图片欧美| 人妻 亚洲 视频| 久久女婷五月综合色啪小说| 亚洲av中文av极速乱| 一本—道久久a久久精品蜜桃钙片| 精品少妇久久久久久888优播| 亚洲四区av| 久久人人97超碰香蕉20202| 两个人免费观看高清视频| av有码第一页| 2022亚洲国产成人精品| 免费不卡的大黄色大毛片视频在线观看| 精品第一国产精品| 国产在视频线精品| 999精品在线视频| 男女无遮挡免费网站观看| 成人免费观看视频高清| 美女大奶头黄色视频| www.色视频.com| 亚洲情色 制服丝袜| av女优亚洲男人天堂| 亚洲图色成人| 欧美激情 高清一区二区三区| av.在线天堂| 成人国产麻豆网| 成人18禁高潮啪啪吃奶动态图| 中文字幕精品免费在线观看视频 | 又大又黄又爽视频免费| av一本久久久久| 亚洲精品国产av成人精品| 晚上一个人看的免费电影| 国产av一区二区精品久久| 99re6热这里在线精品视频| 色5月婷婷丁香| 成人亚洲精品一区在线观看| 波野结衣二区三区在线| 亚洲美女黄色视频免费看| 一边亲一边摸免费视频| 日韩欧美精品免费久久| 亚洲精品中文字幕在线视频| 成年动漫av网址| 国产男女超爽视频在线观看| 亚洲美女黄色视频免费看| 男女边吃奶边做爰视频| 亚洲欧美清纯卡通| 在线亚洲精品国产二区图片欧美| 亚洲精华国产精华液的使用体验| 久久人妻熟女aⅴ| 亚洲国产av新网站| 日韩成人av中文字幕在线观看| 国产成人aa在线观看| 亚洲欧美色中文字幕在线| 国产一区二区激情短视频 | 夜夜爽夜夜爽视频| 免费高清在线观看日韩| 免费观看a级毛片全部| 男女高潮啪啪啪动态图| 99久国产av精品国产电影| 女的被弄到高潮叫床怎么办| av视频免费观看在线观看| 亚洲第一区二区三区不卡| 精品国产一区二区久久| 大片电影免费在线观看免费| 丝袜美足系列| 如何舔出高潮| 一个人免费看片子| 波野结衣二区三区在线| 最黄视频免费看| 一级a做视频免费观看| 一本久久精品| 国产爽快片一区二区三区| 亚洲,欧美精品.| 国产福利在线免费观看视频| 一区在线观看完整版| 成人影院久久| 熟女人妻精品中文字幕| 亚洲欧美色中文字幕在线| 99精国产麻豆久久婷婷| 又大又黄又爽视频免费| 亚洲,一卡二卡三卡| 啦啦啦啦在线视频资源| 日韩在线高清观看一区二区三区| 男女下面插进去视频免费观看 | 精品一区二区三卡| av.在线天堂| 国产成人免费观看mmmm| 99久久综合免费| 亚洲精品国产av蜜桃| 欧美+日韩+精品| 日韩av在线免费看完整版不卡| 亚洲国产欧美在线一区| 日韩免费高清中文字幕av| 亚洲伊人色综图| 少妇高潮的动态图| 日韩中字成人| 观看美女的网站| 免费看av在线观看网站| 97超碰精品成人国产| 亚洲精品日韩在线中文字幕| 日韩av免费高清视频| 欧美 亚洲 国产 日韩一| 国产亚洲av片在线观看秒播厂| videosex国产| 少妇被粗大猛烈的视频| 亚洲欧美日韩卡通动漫| 飞空精品影院首页| 欧美激情国产日韩精品一区| 亚洲精品,欧美精品| 狂野欧美激情性xxxx在线观看| 欧美精品亚洲一区二区| 男女无遮挡免费网站观看| 成人毛片60女人毛片免费| 精品午夜福利在线看| 国内精品宾馆在线| 乱码一卡2卡4卡精品| 国产av码专区亚洲av| 十分钟在线观看高清视频www| 国语对白做爰xxxⅹ性视频网站| 新久久久久国产一级毛片| 国产av码专区亚洲av| av免费在线看不卡| 人妻人人澡人人爽人人| 老女人水多毛片| 九九在线视频观看精品| 日本vs欧美在线观看视频| 日日爽夜夜爽网站| 中文字幕免费在线视频6| 久久久久国产网址| 26uuu在线亚洲综合色| 久久久久久久精品精品| 婷婷色av中文字幕| 久久久久久久久久成人| 成人黄色视频免费在线看| 久久久久久久精品精品| 国产欧美日韩一区二区三区在线| 九草在线视频观看| 免费在线观看黄色视频的| 热re99久久国产66热| 久久精品国产鲁丝片午夜精品| 成人亚洲精品一区在线观看| 日本vs欧美在线观看视频| 亚洲综合精品二区| 丝袜喷水一区| 99视频精品全部免费 在线| 亚洲综合色惰| 日韩免费高清中文字幕av| 免费少妇av软件| 亚洲av日韩在线播放| 亚洲国产欧美在线一区| 人妻少妇偷人精品九色| 18+在线观看网站| 一区二区三区精品91| 精品少妇久久久久久888优播| 在线亚洲精品国产二区图片欧美| 性高湖久久久久久久久免费观看| 亚洲av成人精品一二三区| 日韩欧美精品免费久久| 国产精品久久久av美女十八| 亚洲av欧美aⅴ国产| 欧美精品av麻豆av| 三级国产精品片| 在线精品无人区一区二区三| 中文字幕人妻熟女乱码| 久久韩国三级中文字幕| 久久精品国产鲁丝片午夜精品| 免费观看av网站的网址| 亚洲内射少妇av| 亚洲五月色婷婷综合| 亚洲性久久影院| 99热国产这里只有精品6| 午夜老司机福利剧场| 亚洲国产看品久久| 午夜日本视频在线| 天堂8中文在线网| 18禁观看日本| 大陆偷拍与自拍| 亚洲内射少妇av| 天堂俺去俺来也www色官网| 亚洲精品美女久久久久99蜜臀 | 2021少妇久久久久久久久久久| 国产色婷婷99| 国产精品 国内视频| 欧美日韩视频高清一区二区三区二| 妹子高潮喷水视频| 色94色欧美一区二区| 大码成人一级视频| 久久久久国产精品人妻一区二区| 亚洲,欧美,日韩| 日韩精品有码人妻一区| 一区二区三区乱码不卡18| 精品一品国产午夜福利视频| 超色免费av| 日日爽夜夜爽网站| 亚洲少妇的诱惑av| 日本-黄色视频高清免费观看| 午夜久久久在线观看| 亚洲成色77777| 亚洲精品乱久久久久久| 少妇人妻精品综合一区二区| 91精品三级在线观看| 亚洲美女视频黄频| 欧美国产精品va在线观看不卡| 黑人巨大精品欧美一区二区蜜桃 | 一本久久精品| 考比视频在线观看| 国产 一区精品| 美女内射精品一级片tv| 日韩视频在线欧美| 国产精品偷伦视频观看了| 亚洲成人手机| 国产色婷婷99| 欧美精品一区二区免费开放| 热re99久久国产66热| 精品国产一区二区三区四区第35| 国产黄色免费在线视频| 亚洲色图综合在线观看| 国产亚洲精品第一综合不卡 | 99热6这里只有精品| 日本黄色日本黄色录像| 一本色道久久久久久精品综合| 国产精品99久久99久久久不卡 | 国产69精品久久久久777片| 亚洲av电影在线进入| 国产国拍精品亚洲av在线观看| 青春草国产在线视频| 成人亚洲精品一区在线观看| 九色成人免费人妻av| 亚洲av综合色区一区| 国产男女超爽视频在线观看| 国产精品欧美亚洲77777| 晚上一个人看的免费电影| 欧美xxⅹ黑人| 制服人妻中文乱码| 自线自在国产av| 狠狠婷婷综合久久久久久88av| 自拍欧美九色日韩亚洲蝌蚪91| 少妇熟女欧美另类| 日韩熟女老妇一区二区性免费视频| av又黄又爽大尺度在线免费看| 三级国产精品片| 大陆偷拍与自拍| 久久午夜综合久久蜜桃| 精品亚洲乱码少妇综合久久| 伊人亚洲综合成人网| av在线播放精品| 成人综合一区亚洲| 欧美人与性动交α欧美精品济南到 | 久热这里只有精品99| 国产欧美日韩综合在线一区二区| 亚洲四区av| 欧美+日韩+精品| 免费不卡的大黄色大毛片视频在线观看| 国产乱来视频区| 免费高清在线观看日韩| 成人影院久久| 新久久久久国产一级毛片| 国产精品国产三级专区第一集| av卡一久久| 日韩欧美一区视频在线观看| 国产 一区精品| 欧美国产精品va在线观看不卡| 91精品三级在线观看| 精品午夜福利在线看| 国产日韩欧美视频二区| 看十八女毛片水多多多| 国产精品人妻久久久影院| 成人二区视频| 男女下面插进去视频免费观看 | 亚洲精品美女久久av网站| 欧美精品国产亚洲| 美女视频免费永久观看网站| 亚洲一码二码三码区别大吗| 一区二区三区四区激情视频| 日韩一区二区视频免费看| 国产极品粉嫩免费观看在线| 亚洲欧美一区二区三区国产| 国产成人精品在线电影| 国产男女内射视频| 韩国精品一区二区三区 | 欧美日韩av久久| 波野结衣二区三区在线| 亚洲av电影在线观看一区二区三区| 亚洲精品一区蜜桃| 日产精品乱码卡一卡2卡三| 好男人视频免费观看在线| 亚洲精品久久成人aⅴ小说| 26uuu在线亚洲综合色| 欧美精品亚洲一区二区| 亚洲成人av在线免费| 各种免费的搞黄视频| 另类精品久久| 亚洲国产精品一区二区三区在线| 亚洲情色 制服丝袜| 久久久久久久亚洲中文字幕| 91aial.com中文字幕在线观看| 欧美国产精品va在线观看不卡| 国产成人精品福利久久| 伦理电影免费视频| 国产高清三级在线| 久久99蜜桃精品久久| 国产片特级美女逼逼视频| 国产欧美亚洲国产| 久久久精品94久久精品| 高清在线视频一区二区三区| 2022亚洲国产成人精品| 国产精品熟女久久久久浪| 女人久久www免费人成看片| 狂野欧美激情性xxxx在线观看| 亚洲国产毛片av蜜桃av| 日韩精品有码人妻一区| 国产乱来视频区| 亚洲一码二码三码区别大吗| 亚洲婷婷狠狠爱综合网| 欧美激情国产日韩精品一区| 色哟哟·www| 十八禁高潮呻吟视频| 亚洲熟女精品中文字幕| 欧美xxxx性猛交bbbb| 狠狠婷婷综合久久久久久88av| 日日爽夜夜爽网站| 熟女av电影| 有码 亚洲区| 亚洲少妇的诱惑av| 哪个播放器可以免费观看大片| 亚洲欧美中文字幕日韩二区| 精品国产一区二区三区久久久樱花| 人人妻人人添人人爽欧美一区卜| 精品一品国产午夜福利视频| 一级毛片 在线播放| 18禁动态无遮挡网站| 欧美日韩成人在线一区二区| 丝袜脚勾引网站| 中文字幕另类日韩欧美亚洲嫩草| xxxhd国产人妻xxx| 97超碰精品成人国产| 高清av免费在线| 久久久a久久爽久久v久久| 又大又黄又爽视频免费| 欧美3d第一页| 一级片免费观看大全| 大香蕉97超碰在线| 久久久久久久久久人人人人人人| av在线播放精品| 国产毛片在线视频| 欧美另类一区| 在线观看一区二区三区激情| 精品一区二区免费观看| 女的被弄到高潮叫床怎么办| 国产黄频视频在线观看| 九色亚洲精品在线播放| 巨乳人妻的诱惑在线观看| 日韩伦理黄色片| 亚洲av综合色区一区| 18在线观看网站| 在线 av 中文字幕| 欧美日韩综合久久久久久| 久久国产亚洲av麻豆专区| 国产精品不卡视频一区二区| 色哟哟·www| 精品一区二区三卡| 一本色道久久久久久精品综合| 久久精品国产亚洲av天美| 中文字幕人妻熟女乱码| 妹子高潮喷水视频| 蜜臀久久99精品久久宅男| 亚洲欧美一区二区三区国产| 最近最新中文字幕大全免费视频 | 欧美精品高潮呻吟av久久| 美女国产视频在线观看| 九九爱精品视频在线观看| 中文字幕人妻熟女乱码| 免费看av在线观看网站| 汤姆久久久久久久影院中文字幕| 国产成人aa在线观看| 交换朋友夫妻互换小说| 99久国产av精品国产电影| 插逼视频在线观看| 亚洲色图综合在线观看| 91精品三级在线观看| 国产精品女同一区二区软件| 亚洲人成网站在线观看播放| 男女边吃奶边做爰视频| 亚洲丝袜综合中文字幕| 亚洲av福利一区| 亚洲第一av免费看| 桃花免费在线播放| av黄色大香蕉| 一级黄片播放器| 成人毛片60女人毛片免费| 热99国产精品久久久久久7| av.在线天堂| 一本大道久久a久久精品| 90打野战视频偷拍视频| 少妇猛男粗大的猛烈进出视频| 久久鲁丝午夜福利片| 综合色丁香网| 欧美激情国产日韩精品一区| 中国国产av一级| 97超碰精品成人国产| 狂野欧美激情性xxxx在线观看| 另类亚洲欧美激情| 亚洲精品国产色婷婷电影| 久久久欧美国产精品| 国产片内射在线| 两个人免费观看高清视频| 夫妻午夜视频| 两个人免费观看高清视频| 欧美另类一区| 国产精品国产av在线观看| 午夜久久久在线观看| 秋霞伦理黄片| 精品久久国产蜜桃| 久久精品熟女亚洲av麻豆精品| 国产男女内射视频| 精品人妻在线不人妻| 国产精品免费大片| 日韩一区二区视频免费看| 国产精品欧美亚洲77777| 考比视频在线观看| 精品一区在线观看国产| 国产av一区二区精品久久| 男女高潮啪啪啪动态图| 国产精品人妻久久久久久| 青春草亚洲视频在线观看| 国产毛片在线视频| 黄色怎么调成土黄色| 久久久久国产网址| 久久韩国三级中文字幕| 波野结衣二区三区在线| 丰满少妇做爰视频| 99视频精品全部免费 在线| 春色校园在线视频观看| 寂寞人妻少妇视频99o| 99久国产av精品国产电影| 纵有疾风起免费观看全集完整版| 下体分泌物呈黄色| 亚洲av国产av综合av卡| 99热全是精品| 日本与韩国留学比较| 国产精品久久久久久精品古装| 观看av在线不卡| 精品99又大又爽又粗少妇毛片| 日韩不卡一区二区三区视频在线| 高清在线视频一区二区三区| 各种免费的搞黄视频| 男女无遮挡免费网站观看| 精品久久国产蜜桃| 97超碰精品成人国产| 国产成人av激情在线播放| 国产成人精品福利久久| 久久精品国产综合久久久 | 男人爽女人下面视频在线观看| 22中文网久久字幕| 少妇人妻精品综合一区二区| 中文欧美无线码| 成年av动漫网址| 我的女老师完整版在线观看| 国产精品麻豆人妻色哟哟久久| 十分钟在线观看高清视频www| 日韩视频在线欧美| 精品一区在线观看国产| 高清视频免费观看一区二区| 日日摸夜夜添夜夜爱| 性高湖久久久久久久久免费观看| 咕卡用的链子| 国产福利在线免费观看视频| 少妇 在线观看| 两性夫妻黄色片 | 国产av码专区亚洲av| 久久国内精品自在自线图片| 满18在线观看网站| 欧美xxxx性猛交bbbb| 日本av免费视频播放| 韩国精品一区二区三区 | 精品一区二区三卡| 久久ye,这里只有精品| 国产一区二区三区综合在线观看 | 国产av码专区亚洲av| 曰老女人黄片| 国产黄频视频在线观看| 精品99又大又爽又粗少妇毛片| 亚洲av男天堂| 日韩一区二区视频免费看| 亚洲情色 制服丝袜| 国产白丝娇喘喷水9色精品| 一区二区三区乱码不卡18| 纵有疾风起免费观看全集完整版| 人妻系列 视频| 五月伊人婷婷丁香| 91成人精品电影| 久久久国产一区二区| 欧美激情 高清一区二区三区| 午夜免费鲁丝| 夫妻性生交免费视频一级片| 欧美国产精品va在线观看不卡| 日韩av在线免费看完整版不卡| 蜜桃国产av成人99| 久久久久久伊人网av| 久久精品熟女亚洲av麻豆精品| 黑人欧美特级aaaaaa片| 岛国毛片在线播放| 最后的刺客免费高清国语| 男的添女的下面高潮视频| 免费看av在线观看网站| 亚洲国产精品专区欧美| h视频一区二区三区| 天美传媒精品一区二区| 国产成人精品在线电影| 久久久久网色| 蜜臀久久99精品久久宅男| 熟妇人妻不卡中文字幕| 亚洲综合色网址| 国产成人一区二区在线| av国产久精品久网站免费入址| 国产成人精品久久久久久| a级毛色黄片| 一区二区av电影网| 日韩电影二区| 黄片播放在线免费| 国产av精品麻豆| 51国产日韩欧美| 最黄视频免费看| 国产精品久久久av美女十八| av天堂久久9| 国产成人精品在线电影| 国产 精品1| 成人黄色视频免费在线看| 精品亚洲成国产av| 久久ye,这里只有精品| 久久精品人人爽人人爽视色| 亚洲欧美中文字幕日韩二区| 波多野结衣一区麻豆| tube8黄色片| 中文字幕最新亚洲高清| 成人亚洲精品一区在线观看| a 毛片基地| 久久精品久久久久久噜噜老黄|