西洋參淫羊藿片緩解體力疲勞作用研究

王 鶴，劉 磊，任立煥，侯金才

(神威藥業(yè)集團有限公司，河北 石家莊 051430)

體力疲勞是人們生活中常見的癥狀，易疲勞人群廣泛，抗疲勞食品市場需求大。在我國，抗疲勞保健食品在保健食品市場中占據(jù)著相當(dāng)大的份額。疲勞已成為國內(nèi)外關(guān)注的病癥和研究的熱點。多種中藥具有抗疲勞作用[1-3]，西洋參性涼、味甘、微苦，具有補氣養(yǎng)陰、清熱生津之功效?，F(xiàn)代藥理學(xué)研究發(fā)現(xiàn)西洋參提取物具有抗疲勞、抗氧化、抗應(yīng)激、抑制血小板聚集、調(diào)節(jié)血糖等作用。西洋參中的皂苷類成分可有效增強中樞神經(jīng)興奮性，達到靜心凝神、消除疲勞、增強記憶力之功效[4-7]。淫羊藿始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，又稱仙靈脾，李時珍在《本草綱目》中稱其有“益精氣，堅筋骨，補腰膝，強心力”之功效。淫羊藿中不同活性成分能在提高機體免疫能力、增加骨代謝能力、增強心肌收縮力、改善心腦血管血液循環(huán)以及抗氧化、抗腫瘤等方面具有重要的作用，并且能夠促進睪酮的分泌，具有雄激素樣作用。淫羊藿在延緩疲勞的發(fā)生、促進疲勞的恢復(fù)、提高運動能力方面具有重要的功效[8-12]。紅景天補氣清肺、益智養(yǎng)心、散瘀消腫，具有增強學(xué)習(xí)記憶、改善心腦血管系統(tǒng)、抗疲勞、耐缺氧、抗衰老、增強免疫、抗病毒及保護臟器的作用。紅景天提取物已被證實可在細胞水平表現(xiàn)出抗疲勞功效[13-16]。雪蓮培養(yǎng)物富含黃酮類物質(zhì)，含量高達10%以上，多酚、紫丁香甙、綠原酸、1，5-二咖啡?？崴岬乃幮Ш恳策h遠高于野生型天山雪蓮。已經(jīng)被證實的功效包括：抗輻射、抗疲勞、抗炎鎮(zhèn)痛、調(diào)節(jié)免疫力、抗氧化、提高骨密度、調(diào)血脂、抑菌等[17-20]。

結(jié)合市場需求，我公司根據(jù)現(xiàn)代科學(xué)理論結(jié)合傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)理論，選用西洋參提取物、淫羊藿提取物、紅景天提取物、雪蓮培養(yǎng)物為主要原料，配以適當(dāng)?shù)妮o料加工制成保健食品，研究其緩解體力疲勞作用。

1 材料與方法

1.1 樣品

西洋參淫羊藿片，神威藥業(yè)集團有限公司生產(chǎn)，每100 g含總皂苷2.0 g，淫羊藿苷1.9 g，紅景天苷320 mg，總黃酮4 g，人體推薦劑量為1.1 g/人/日。

1.2 實驗動物

由西安交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院實驗動物中心提供的雄性昆明種小鼠190只，生產(chǎn)許可證號：SCXK(陜)2018-001，體重18～22 g，SPF級。質(zhì)量合格證號：61001700003136(負重游泳、血乳酸試驗和血清尿素試驗)，61001700003141(肝糖原試驗)。動物飼料、墊料均由西安交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院實驗動物中心提供。試驗動物房為屏障系統(tǒng)，使用許可證號為 SYXK(陜)2018-009，溫度20～25 ℃，相對濕度45%～65%。

1.3 主要儀器與試劑

電子天平(AL204)(梅特勒-托利多儀器有限公司);紫外可見分光光度計(UV-2550)(島津)；全自動生化分析儀(BS-420)(深圳邁瑞)；離心機(TG16-WS)(湖南湘儀實驗室儀器開發(fā)有限公司)；試劑盒(南京建成賽浩科技有限公司)；生化分析試劑(深圳邁瑞生物醫(yī)療電子股份有限公司)。

1.4 劑量設(shè)計及配制

將西洋參淫羊藿片設(shè)計為0.55 g/kg/BW、0.37 g/kg/BW、0.18 g/kg/BW三個劑量組，其劑量分別相當(dāng)于人體推薦用量的30倍、20倍、10倍，另設(shè)一個陰性對照組(蒸餾水)。樣品配制：準(zhǔn)確稱取受試樣品0.55 g、0.37 g、0.18 g分別加蒸餾水至20mL混合均勻，備用。

1.5 試驗方法

預(yù)游泳后選姿勢正確雄性小鼠160只，共分4個試驗組，每試驗組用40只小鼠并隨機分為4小組，各試驗組均設(shè)3個劑量組和1個陰性對照組，每組10只小鼠。試驗一組為負重游泳試驗，試驗二組為血清尿素測定試驗，試驗三組為肝糖原測定試驗，試驗四組為血乳酸測定試驗。按上述劑量每天經(jīng)口給予受試樣品1次，陰性對照組給予等容量的蒸餾水，灌胃容量為20 mL/kg/BW，連續(xù)30天。然后分別進行各項指標(biāo)的測定，方法如下。

1.5.1 負重游泳試驗 末次給予受試樣品后30 min，置于游泳箱中游泳，水深35 cm，水溫25 ℃，鼠尾根部負荷5%體重的鉛皮。記錄各組小鼠自游泳開始至死亡的時間，作為小鼠負重游泳時間，各劑量組結(jié)果與陰性對照組比較進行方差分析。死亡判斷標(biāo)準(zhǔn)為：小鼠沉至游泳箱底并停止張口呼吸。若劑量組游泳時間明顯長于陰性對照組游泳時間，且差異顯著(P<0.05)，可判定該受試樣品有延長小鼠負重游泳時間的作用。

1.5.2 血清尿素測定 末次給予受試樣品后30 min，在溫度為30 ℃的水中不負重游泳90 min，休息60 min后拔眼球采血0.5 mL，分離血清后用全自動生化分析儀進行血清尿素測定，各劑量組結(jié)果與陰性對照組比較進行方差分析。若劑量組血清尿素含量明顯低于陰性對照組，且差異顯著(P<0.05)，可判定該受試樣品有減少疲勞小鼠尿素產(chǎn)生的作用。

1.5.3 肝糖原測定 末次給予受試樣品后30min處死動物，解剖取出肝臟，按試劑盒要求進行肝糖原測定，各劑量組結(jié)果與陰性對照組比較進行方差分析。若劑量組肝糖原含量明顯高于陰性對照組，且差異顯著(P<0.05)，可判定該受試樣品有促進小鼠肝糖原儲備的作用。

1.5.4 血乳酸測定 末次給予受試樣品，30 min后采血，然后小鼠在30 ℃水中不負重游泳10 min，于游泳前、游泳后立即及游泳后休息20 min，分別3次采血(內(nèi)眥采血)測定血乳酸含量，以3個時間點血乳酸曲線下面積為指標(biāo)，將各劑量組結(jié)果與陰性對照組比較進行方差分析。若劑量組血乳酸曲線下面積明顯小于陰性對照組，且差異顯著(P<0.05)，可判定該受試樣品有減小小鼠運動后血乳酸曲線下面積的作用。

1.6 試驗數(shù)據(jù)統(tǒng)計

采用SPSS 20.0軟件對各試驗原始數(shù)據(jù)進行方差齊性檢驗，滿足“方差齊”要求的數(shù)據(jù)資料用單因素方差分析方法以及多個試驗組和一個對照組間均數(shù)的兩兩比較方法進行統(tǒng)計處理；對非正態(tài)分布或方差不齊的數(shù)據(jù)資料進行適當(dāng)?shù)淖兞哭D(zhuǎn)換，待滿足“正態(tài)方差齊”要求后，用轉(zhuǎn)換所得的數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計處理。

2 結(jié)果

2.1 小鼠負重游泳試驗

由表1可見，各劑量組小鼠各期體重及增重與陰性對照組比較，差異均無顯著性(P>0.05)。由表2可見，各劑量組小鼠平均游泳時間較陰性對照組游泳時間均延長，且高劑量組與陰性對照組比較差異有顯著性(P<0.01)。結(jié)果表明，該樣品有延長小鼠負重游泳時間的作用。

表1 樣品對小鼠體重的影響

表2 樣品對小鼠負重游泳時間的影響

2.2 小鼠血清尿素測定

由表3可見，各劑量組小鼠各期體重及增重與陰性對照組比較，差異均無顯著性(P>0.05)。由表4可見，高劑量組小鼠血清尿素含量與陰性對照組比較，差異有極顯著性(P<0.01)。結(jié)果表明，該樣品可減少疲勞小鼠尿素的產(chǎn)生。

表3 樣品對小鼠體重的影響

表4 樣品對小鼠血清尿素含量的影響

2.3 小鼠肝糖原測定

由表5可見，各劑量組小鼠各期體重及增重與陰性對照組比較，差異均無顯著性(P>0.05)。由表6可見，各劑量組小鼠肝糖原含量均高于陰性對照組，且高、中劑量組與陰性對照組比較均有極顯著性差異(P<0.01)。結(jié)果表明，該樣品有促進小鼠肝糖原儲備的作用。

表5 樣品對小鼠體重的影響

表6 樣品對小鼠肝糖原含量的影響

2.4 小鼠血乳酸測定

由表7可見，各劑量組小鼠各期體重及增重與陰性對照組比較，差異均無顯著性(P>0.05)。由表8可見，各劑量組與陰性對照組比較，血乳酸曲線下面積均無顯著性差異(P>0.05)。結(jié)果表明，該樣品對運動后小鼠血乳酸含量無顯著作用。

表7 樣品對小鼠體重的影響

表8 樣品對小鼠運動前、后血乳酸含量的影響

3 結(jié)論

本研究結(jié)果表明各劑量組與陰性對照組比較小鼠體重差異均無顯著性，可明顯延長小鼠負重游泳時間，降低運動后血清尿素含量，增加小鼠肝糖原的儲備量，根據(jù)《保健食品檢驗與評價技術(shù)規(guī)范》(2003年版)中“緩解體力疲勞功能檢驗方法”可以判定西洋參淫羊藿片具有緩解體力疲勞的功能，但本次小鼠血乳酸試驗結(jié)果為陰性，因此該樣品緩解體力疲勞保健功能的作用機制還需要進一步研究探討。本實驗結(jié)果為西洋參淫羊藿片在保健品和醫(yī)藥等方面進一步的開發(fā)、利用提供了科學(xué)依據(jù)。