曲靖市栽培半夏質(zhì)量考察

朱正華 王 喆 張 馨

曲靖市食品藥品檢驗(yàn)檢測(cè)中心，云南 曲靖 655000

半夏之名始見于《禮記·月令》，“五月半夏生，蓋當(dāng)夏半也”，《本草綱目》及《神農(nóng)本草經(jīng)》等經(jīng)典著作中均有記載。依據(jù)其附圖及文字說(shuō)明即可確定本草半夏與2015版《中國(guó)藥典》記載的半夏為同一種屬。半夏(Pinellia ternata)屬天南星目天南星科半夏屬植物，古稱地文、守田等，云南又名地珠半夏，藥用部位為其干燥塊莖。野生于山地、農(nóng)田、溪邊或林下[1]，云南屬主產(chǎn)區(qū)之一。半夏喜溫和潮濕、蔭蔽的沙壤土環(huán)境，怕干旱及強(qiáng)光照射，耐寒，塊莖能夠自然越冬。繁殖主要以塊莖和珠芽為主。半夏為多年生草本，塊莖球形，夏、秋二季采挖，洗凈，除去外皮和須根，曬干即可入藥。塊莖含有揮發(fā)油如：茴香腦，檸檬醛、1-新烯、β-辛香烯等。還含有有機(jī)酸、生物堿、微量元素等[2]。味辛、性溫，有毒。歸脾、胃、肺經(jīng)。因半夏有毒性，其對(duì)眼、咽喉、胃腸等粘膜具有強(qiáng)烈的刺激性。故內(nèi)服入藥前須炮制去毒，保證其藥用的安全、有效。根據(jù)炮制方法的不同，分為法半夏、姜半夏、清半夏、醋制半夏等。具有燥濕化痰、降逆止吐、消痞散結(jié)等作用。用于治療濕痰寒痰，咳喘痰多，痰飲眩悸，風(fēng)痰眩暈，胸悶脹滿、惡心嘔吐。外用治癰腫痰核[3]。

曲靖市屬半夏主產(chǎn)區(qū)之一，傳統(tǒng)以野生半夏入藥，但由于野生半夏資源日趨減少，不能滿足臨床需要，故需發(fā)展半夏的家種栽培來(lái)緩解半夏市場(chǎng)的供需矛盾[4]。半夏的主要活性成份為多種生物堿、氨基酸[5]，本文以《中國(guó)藥典》2015年版為依據(jù)通過對(duì)曲靖產(chǎn)半夏的原植物形態(tài)、藥材外觀性狀、顯微特征、薄層色譜鑒別、總酸含量測(cè)定等多個(gè)指標(biāo)的研究，從而確定家種半夏的質(zhì)量，為曲靖市地產(chǎn)半夏的人工種植、開發(fā)利用及臨床應(yīng)用提供理論依據(jù)。

藥材來(lái)源： A：富源縣后所鎮(zhèn)鐵翅藥材種植基地 B：師宗縣丹鳳鎮(zhèn)藥材種植基地 C：沾益縣炎方鄉(xiāng)藥材種植基地

1 儀器與材料

1.1 儀器 OLYMPUS電子顯微鏡(日本)；瑞士萬(wàn)通916型全自動(dòng)電位滴定儀；METTLER TOLEDO XS 105電子天平(梅特勒-托利多儀器有限公司)；HH-4型數(shù)顯恒溫水浴鍋(國(guó)華電器有限公司)；AS系列超聲波清洗機(jī)(天津奧特賽恩斯儀器有限公司)。

1.2 材料 半夏對(duì)照藥材(批號(hào)：121272-201806)、纈氨酸對(duì)照品(批號(hào)：140681-201703)、亮氨酸對(duì)照品(批號(hào)：140687-201804)、精氨酸對(duì)照品(批號(hào)：140685-201707)、丙氨酸對(duì)照品(批號(hào)：140680-201604)等均為中國(guó)食品藥品檢定研究院提供；硅膠G薄層板(青島海洋化工廠)；甘油(丙三醇)、乙醇、石油醚(60～90 ℃)、乙酸乙酯、丙酮、甲酸、甲醇、乙醚、三氯甲烷、硫酸、正丁醇、冰醋酸、茚三酮、氫氧化鈉為國(guó)產(chǎn)分析純；水為超純水。

2 方法與結(jié)果

2.1 鑒別

2.1.1 原植物形態(tài)鑒別 塊莖圓球形，直徑1～2 cm，具須根。葉2～5枚，幼時(shí)單葉。葉柄長(zhǎng)5～8 cm，基部具鞘，鞘內(nèi)、鞘部以上或葉片基部(葉柄頂頭)有直徑3～5 mm的珠芽，珠芽在母株上萌發(fā)或落地后萌發(fā)；幼苗葉片卵狀心形至戟形，為全緣單葉，長(zhǎng)2～3 cm，寬2～2.5 cm；老株葉片3全裂，裂片綠色，背淡，長(zhǎng)圓狀橢圓形或披針形，兩頭銳尖，中裂片長(zhǎng)3～10 cm，寬1～3 cm；側(cè)裂片稍短；全緣或具不明顯的淺波狀圓齒，側(cè)脈8～10對(duì)，細(xì)弱，細(xì)脈網(wǎng)狀，密集，集合脈2圈?；ㄐ虮L(zhǎng)25～30(-35)cm，長(zhǎng)于葉柄。佛焰苞綠色或綠白色，管部狹圓柱形，長(zhǎng)1.5～2 cm；檐部長(zhǎng)圓形，綠色，有時(shí)邊緣青紫色，長(zhǎng)4～5 cm，寬1.5 cm，鈍或銳尖。肉穗花序：雌花序長(zhǎng)2 cm，雄花序長(zhǎng)5～7 mm，其中間隔3 mm；附屬器綠色變青紫色，長(zhǎng)6～10 cm，直立，有時(shí)“S”形彎曲。漿果卵圓形，黃綠色，先端漸狹為明顯的花柱。花期5～7月，果8月成熟。結(jié)果：A、B、C三個(gè)樣品的原植物形態(tài)均符合以上描述，經(jīng)鑒定均為藥典品半夏Pinelliaternata(Thunb.)Breit．

2.1.2 性狀鑒別 本品呈類球形，有的稍偏斜，直徑1～1.5 cm。表面白色或淺黃色，頂端有凹陷的莖痕，周圍密布麻點(diǎn)狀根痕；下面鈍圓，較光滑。質(zhì)堅(jiān)實(shí)，斷面潔白，富粉性。氣微，味辛辣、麻舌而刺喉。具體見圖1。此外，在云南很多地方有半夏的習(xí)用品、代用品。如盾葉半夏、土半夏、掌葉半夏等，均為民間習(xí)用草藥，在用法和功效上也與藥典半夏有所不同，不能混用，以免影響半夏的臨床療效。

樣品A 樣品B 樣品C圖1 半夏樣品圖

2.1.3 顯微鑒別 本品粉末類白色：①淀粉粒：甚多，單粒類圓形、半圓形或圓多角形，臍點(diǎn)裂縫狀、人字狀或星狀；復(fù)粒由2～6分粒組成。②草酸鈣針晶：成束存在于橢圓形黏液細(xì)胞中，或隨處散在，針晶長(zhǎng)20～144 μm。③導(dǎo)管：螺紋為主，直徑10～24 μm。 粉末顯微圖見圖2。

1 2 31.淀粉粒；2.草酸鈣針晶；3.導(dǎo)管圖2 樣品的顯微特征

2.1.4 薄層色譜鑒別 取本品粉末1 g，加乙醇10 mL，加熱回流1 h，濾過，濾液濃縮至0.5 mL，作為供試品溶液。另取半夏對(duì)照藥材1 g，同法制成對(duì)照藥材溶液。照薄層色譜法(通則0502)試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各5 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以石油醚(60～90 ℃)-乙酸乙酯-丙酮-甲酸(30∶6∶4∶0.5)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在105 ℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。如圖3。

1 2 3 4 5 6 7 8 9注：1、2為樣品A；3、4為對(duì)照藥材；5、6為樣品B；7、8、9為樣品C圖3 半夏薄層色譜圖(1)

取本品粉末1 g，加甲醇10 mL，加熱回流30 min，濾過，濾液揮至0.5 mL，作為供試品溶液。另取精氨酸對(duì)照品、丙氨酸對(duì)照品、纈氨酸對(duì)照品、亮氨酸對(duì)照品，加70%甲醇制成每1 mL各含1 mg 的混合溶液，作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法(通則0502)試驗(yàn)，吸取供試品溶液5 μL、對(duì)照品溶液1 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以正丁醇-冰醋酸-水(8∶3∶1)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以茚三酮試液，在105 ℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。如圖4。

A B C 混合對(duì)照品圖4 半夏薄層色譜圖(2)

2.2 檢查

2.2.1 水分 水分測(cè)定按照2015年版《中國(guó)藥典》四部(通則0832)第二法(烘干法)測(cè)定三批藥材水分，規(guī)定本品水分不得超過14.0%，結(jié)果A、B、C三個(gè)樣品的水分均符合規(guī)定。結(jié)果見表1。

表1 樣品水分含量

2.2.2 總灰分[8]按照灰分測(cè)定法《中國(guó)藥典》2015年版四部(通則2302) 測(cè)定三批藥材總灰分，規(guī)定本品總灰分不得超過4.0%，結(jié)果A、B、C三個(gè)樣品的總灰分均超過規(guī)定限度，不符合規(guī)定。見表2。

表2 樣品總灰分

2.2.3 浸出物[6]按照水溶性浸出物項(xiàng)下的冷浸法，《中國(guó)藥典》2015年版四部(通則2201)測(cè)定三批藥材浸出物，規(guī)定本品水溶性浸出物不得少于9.0%，結(jié)果A、B、C三個(gè)樣品的浸出物均符合規(guī)定。見表3。

表3 品浸出物含量

2.3 含量測(cè)定[7]采用直接電位滴定法測(cè)定總酸含量。取本品粉末(過四號(hào)篩)約5 g，精密稱定，置錐形瓶中，加乙醇50 mL，加熱回流1 h，同上操作，再重復(fù)提取2次，放冷，濾過，合并濾液，蒸干，殘?jiān)芗尤霘溲趸c滴定液(0.1 mol/L)10 mL，超聲處理(功率500 W，頻率40 kHz)30 min，轉(zhuǎn)移至50 mL量瓶中，加新沸過的冷水至刻度，搖勻，精密量取25 mL，照電位滴定法(通則0701)測(cè)定，用鹽酸滴定液(0.1 mol/L)滴定，并將滴定的結(jié)果用空白實(shí)驗(yàn)校正。每1 mL氫氧化鈉滴定液(0.1 mol/L)相當(dāng)于5.904 mg的琥珀酸(C4H6O4)。本品按干燥品計(jì)算，含總酸以琥珀酸(C4H6O4)計(jì)，不得少于0.25%，結(jié)果A、B、C三個(gè)樣品的總酸含量均符合規(guī)定。見表4。

表4 樣品總酸含量

3 討論

研究從原植物形態(tài)、藥材性狀、顯微鑒別[11]、薄層色譜鑒別、水分檢查、總灰分檢查、浸出物檢查、總酸的含量測(cè)定這幾方面來(lái)對(duì)比考察曲靖栽培半夏的藥用質(zhì)量，除總灰分測(cè)定超出規(guī)定限度以外，其他幾項(xiàng)均符合2015年版《中國(guó)藥典》的要求。

浸出物分別以水、乙醇和甲醇為溶劑，照水溶性浸出物項(xiàng)下的冷浸法和熱浸法測(cè)定。實(shí)測(cè)藥材3批結(jié)果表明，采用水為溶劑，熱浸法與冷浸法的浸出物較高，且差異不大。根據(jù)方便快捷、可行性高為原則，本標(biāo)準(zhǔn)選擇水溶性浸出物項(xiàng)下的冷浸法[6]。

酸堿滴定法一般常用于中藥中總有機(jī)酸含量的測(cè)定，但由于中藥的水提液或醇提液常常具有較深的顏色，指示劑的選擇受到了限制，同時(shí)滴定終點(diǎn)指示不明顯，影響實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性。而電位滴定法是利用電極電位的突躍來(lái)指示終點(diǎn)的，并可實(shí)現(xiàn)自動(dòng)化和連續(xù)滴定，具有靈敏、準(zhǔn)確、可靠等優(yōu)點(diǎn)[7]，因此用直接電位法對(duì)半夏中總游離有機(jī)酸含量進(jìn)行測(cè)定。半夏中所含化學(xué)成分比較復(fù)雜，如還含有多種氨基酸和生物堿，炮制品法半夏中還含有甘草次酸等，其有效成分及毒性成分尚未完全明確[10]，所以現(xiàn)在只能以含量偏高、樣品處理方法不太繁雜、檢測(cè)成本不高的總酸為其控制指標(biāo)，隨著檢測(cè)技術(shù)的不斷提高，對(duì)其有效成分及毒性成分的含量測(cè)定會(huì)不斷走向科學(xué)化、標(biāo)準(zhǔn)化和成熟化。

質(zhì)量檢測(cè)中總灰分的測(cè)定超標(biāo)，灰分測(cè)定是衡量中藥材質(zhì)量的重要指標(biāo)，它反應(yīng)了藥材中摻假及其受污染的程度，一般中藥材的總灰分通常都在一定的范圍內(nèi)，故可用于中藥材的純度檢查[8]。實(shí)驗(yàn)測(cè)定三批次供試品的總灰分測(cè)定結(jié)果均超出《中國(guó)藥典》2015年版規(guī)定的中藥材總灰分的最高限量，則必定有其他無(wú)機(jī)物污染或摻雜，常見的無(wú)機(jī)物為泥土、砂。根據(jù)對(duì)采集樣品的仔細(xì)觀察比較，發(fā)現(xiàn)其塊莖上殘留少許須根及未洗凈的泥沙，分析原因應(yīng)為農(nóng)民在半夏的采收并進(jìn)行粗加工的過程中，未除盡非藥用部位(須根等)、未洗凈泥沙等其它雜質(zhì)[9]，排除總灰分這一影響因素，曲靖地區(qū)栽培半夏質(zhì)量符合藥用標(biāo)準(zhǔn)，可推廣半夏的家種栽培，并制定一套切實(shí)可行的管理措施以確保其質(zhì)量。