漁用中草藥的研究進(jìn)展(上)

王雅麗 王語同 吳叢迪 胡 鯤

(上海海洋大學(xué)國(guó)家水生動(dòng)物病原庫，上海海洋大學(xué)水產(chǎn)科學(xué)國(guó)家級(jí)實(shí)驗(yàn)教學(xué)示范中心，農(nóng)業(yè)農(nóng)村部淡水水產(chǎn)種質(zhì)資源重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，上海 201306)

中草藥是中國(guó)傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)的瑰寶，除了被用于水產(chǎn)養(yǎng)殖過程中，還常常作為飼料添加劑，在增加魚類食欲、促進(jìn)新陳代謝、加速蛋白質(zhì)的合成、增加酶活性、提高免疫力、增加抗病性等方面發(fā)揮著重要作用(朱淼等，2020)。雖然中草藥具有很多優(yōu)勢(shì)，但其化學(xué)成分復(fù)雜且生物活性不穩(wěn)定，還需要進(jìn)一步研究來揭示其有效成分和功能機(jī)制。本文介紹了中草藥的有效成分并對(duì)其作為水產(chǎn)養(yǎng)殖用藥和飼料添加劑的研究進(jìn)行綜述。

一、中草藥的有效成分

目前在獸藥范圍內(nèi)的中草藥種類達(dá)到1000多種，其種類繁多且化學(xué)成分復(fù)雜多樣，因此很難對(duì)中草藥的有效成分進(jìn)行分析鑒定(朱淼等，2020)。隨著氣相色譜、高效液相色譜、紫外分光光度法等分析技術(shù)的發(fā)展，人們對(duì)越來越多的中草藥進(jìn)行詳細(xì)研究，并確定其有效成分。中草藥的有效成分主要包括多糖、甙類、生物堿、有機(jī)酸、揮發(fā)油，此外還有起到營(yíng)養(yǎng)作用的脂類、糖類、蛋白質(zhì)、氨基酸、維生素、常量元素和微量元素以及未知促生長(zhǎng)活性物質(zhì)。對(duì)于目前常見的漁用中草藥及其主要有效成分統(tǒng)計(jì)見表1。

二、中草藥作為水產(chǎn)養(yǎng)殖用藥

天然中草藥毒副作用小且成本低廉，具有廣譜抗菌、抗病毒、抗寄生蟲作用。我國(guó)中草藥品種繁多，目前已知具有免疫活性的中草藥有200多種，具有抗菌作用的中草藥有130多種，有抑殺病毒作用的中草藥有50多種，能夠抑菌、殺菌的中草藥有400多種(胡建平，2017)。

1.中草藥作為抗病毒藥物

中草藥對(duì)于病毒的抑殺作用主要是通過其免疫活性物質(zhì)直接抑制、殺死體內(nèi)病毒，阻斷病毒的生物吸附、復(fù)制、增殖等過程，從而達(dá)到抗病毒感染的目的。Wang等(2015)研究發(fā)現(xiàn)，綠茶提取物兒茶素(epigallocatechin gallate，EGCG)能夠阻斷抑制草魚呼腸孤病毒與細(xì)胞的黏連作用，從而抑制病毒的復(fù)制，達(dá)到抑制草魚呼腸孤病毒感染草魚腎細(xì)胞的效果。另一項(xiàng)研究表明，1.0毫克/千克EGCG可以通過阻斷WSSV晚期基因的表達(dá)，顯著提高擬穴青蟹的免疫能力和存活率(Wang et al，2018)。EGCG的轉(zhuǎn)化物(epicatechin gallate，ECG)也具有很好的抗GCRV和增強(qiáng)免疫的作用(Zhang et al，2020)。此外，板藍(lán)根、射干、穿心蓮、野菊花均具有抗病毒吸附和復(fù)制作用，連翹、柴胡、麻黃、貫眾能夠直接滅活病毒(王國(guó)霞，2005)。

表1 常見水產(chǎn)用中草藥及主要有效成分

除了直接抑制作用外，中草藥還能通過增強(qiáng)提高網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)的吞噬功能，增強(qiáng)機(jī)體細(xì)胞免疫，或通過誘生干擾素，從而增強(qiáng)機(jī)體的特異性和非特異性免疫反應(yīng)以達(dá)到抗病毒的作用。Chen等(2017)通過細(xì)胞試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)：(2.51±0.51)毫克/毫升厚樸酚及(3.18±0.61)毫克/毫升和厚樸酚能有效抑制GCRV感染的草魚腎細(xì)胞。其中，厚樸酚顯著提高細(xì)胞中干擾素(IFN)調(diào)節(jié)因子和白細(xì)胞介素(IL-1β)的表達(dá)，和厚樸酚促進(jìn)了IL-1β、腫瘤壞死因子α(TNFα)和NF-κB的表達(dá)。Haetrakul T.等(2018)發(fā)現(xiàn)在錦鯉感染錦鯉皰疹病毒(koi herpesvirus，KHV)前后注射0.99毫克/毫升的山核桃粗提取物均有顯著的抗病毒作用。Wang等(2018)以日本對(duì)蝦為實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ停冒装呔C合征病毒(WSSV)對(duì)其進(jìn)行攻擊，兒茶素(EGCG)使得機(jī)體中MID、肌球蛋白、p53、TNF-a等免疫相關(guān)基因的表達(dá)顯著增強(qiáng)，提高蝦的免疫水平。Aiyakani Y.等(2012)用對(duì)蝦白斑綜合征病毒(WSSV)感染斑節(jié)對(duì)蝦，同時(shí)將苦參、生姜、南非醉茄等提取物作為免疫增強(qiáng)劑喂食，5天后對(duì)照組的蝦全部死亡，而投喂中草藥添加劑飼料組在5天、30天、60天的成活率分別為30%、50%和60%。彭軍輝等(2018)研究得出20～40毫克/升的番石榴水提取物可以顯著增強(qiáng)攜帶蟹呼腸孤病毒(MCRV)擬穴青蟹的成活率。由此可見中草藥對(duì)于魚類、蝦類、蟹類水產(chǎn)品病毒感染性疾病具有很好的治療作用。

2.中草藥作為抗菌藥物

中草藥通過其活性成分直接作用于病原菌，影響或破壞其生長(zhǎng)、繁殖和代謝過程，從而達(dá)到殺菌、抗菌的目的。

(1)增強(qiáng)機(jī)體器官與組織抗菌功能。用1.0%韓國(guó)槲寄生提取物混合飼料喂養(yǎng)日本鰻鱺14天后，用嗜水氣單胞菌感染存活率達(dá)到80%(對(duì)照組為26.6%)，同時(shí)魚體的免疫指標(biāo)提高(Choi et al，2008)。Kakoolaki等(2016)發(fā)現(xiàn)200毫克/千克綠茶提取物能顯著增強(qiáng)鯔魚的免疫反應(yīng)，提高溶菌酶活性，進(jìn)而使其對(duì)美人魚發(fā)光桿菌的抗菌能力增強(qiáng)。TANG等(2014)用不同劑量的黃芪、當(dāng)歸、山楂、甘草根和金銀花組成的中草藥混合飼料喂養(yǎng)尼羅羅非魚4周后，對(duì)其進(jìn)行嗜水氣單胞菌感染實(shí)驗(yàn)，結(jié)果顯示，和對(duì)照組相比實(shí)驗(yàn)組的死亡率明顯降低，說明該中草藥復(fù)方制劑能有效增強(qiáng)魚體的抗菌能力。

(2)直接作用于細(xì)菌的結(jié)構(gòu)和代謝過程。賈春紅(2013)研究證明了中草藥復(fù)合配方(由桉葉、猴耳環(huán)和蘇木組成)通過破壞細(xì)菌細(xì)胞壁和細(xì)胞膜的完整性，導(dǎo)致其細(xì)胞膜通透性增加，從而對(duì)哈維氏弧菌、創(chuàng)傷弧菌和副溶血弧菌產(chǎn)生抑制作用。張冬星等(2016)研究表明高濃度五倍子、紅花及黃連水煎液能抑制維氏氣單胞菌TH0426株生物膜的形成，具有抗AV TH0426株生物膜的作用。

中草藥能有效地抑殺弧菌屬、氣單胞菌屬、愛德華氏菌、假單胞菌屬、鏈球菌等水產(chǎn)常見的致病菌。Md.Abdul Hannan等(2019)篩選出21種對(duì)溶藻弧菌生長(zhǎng)有強(qiáng)烈抑制作用的中草藥提取物。在活體條件下，以10毫克/克飼料為劑量，用乙酸乙酯提取物成功地控制了對(duì)蝦弧菌病。王玉娥等(2008)研究表明五倍子和黃連對(duì)5種海洋致病弧菌(溶藻弧菌、哈氏弧菌、副溶血弧菌、河流弧菌、麥?zhǔn)匣【?的抑殺作用最強(qiáng)。另一項(xiàng)研究表明，五倍子和石榴皮對(duì)溶藻弧菌、副溶血弧菌、鰻弧菌、創(chuàng)傷弧菌也具有很好的抑菌效果(林炎權(quán)等，2019)。朱成科等(2018)研究發(fā)現(xiàn)五倍子、石榴皮、地榆和烏梅對(duì)維氏氣單胞菌的抑菌效果最好。其中，五倍子的抑菌作用和殺菌作用最強(qiáng)，地榆次之。Tang等(2014)對(duì)羅非魚的研究表明，黃芪、當(dāng)歸、山楂、甘草根和金銀花能顯著降低嗜水氣單胞菌感染導(dǎo)致的死亡率。王瑋等(2018)研究表明，大黃對(duì)愛德華氏菌的抑菌效果最好，其次是黃柏、黃連，黃芪并未表現(xiàn)出抑菌效果。此外，五倍子、石榴訶子、黃芩對(duì)愛德華氏菌也具有明顯的抑菌效果(杜迎春等，2017；馬玉和等，2014)。夏與晴等(2019)研究25種中草藥及其聯(lián)合用藥配伍對(duì)5種水產(chǎn)養(yǎng)殖常見致病菌的抑菌作用，結(jié)果表明，烏梅＋石榴皮組合對(duì)嗜水氣單胞菌、副溶血弧菌具有最佳抑菌作用，烏梅＋白頭翁、石榴皮＋白頭翁組合對(duì)蠟樣芽孢桿菌、熒光假單胞菌、弗氏檸檬酸桿菌具有最佳抑菌作用。姚麗等(2020)通過水煎煮法提取30種中草藥對(duì)鱘魚源海豚鏈球菌進(jìn)行體外抑菌試驗(yàn)，證明黃連、黃芩、連翹、丁香和秦皮都具有很好的抑菌、殺菌功效，其中黃連功效最佳。另一項(xiàng)研究表明，秦皮對(duì)金黃色葡萄球菌也有明顯的抑制作用(翁遠(yuǎn)超等，2014)。