調(diào)節(jié)性B淋巴細(xì)胞在自身免疫性肝炎發(fā)生發(fā)展中的作用機(jī)制

童 聰，向曉星

1 揚(yáng)州大學(xué)，江蘇 揚(yáng)州 225009；2 江蘇省蘇北人民醫(yī)院 消化內(nèi)科，江蘇 揚(yáng)州 225001

B淋巴細(xì)胞是適應(yīng)性免疫的重要組成環(huán)節(jié)之一，具有產(chǎn)生抗體、分泌多種細(xì)胞因子調(diào)節(jié)自身免疫的作用。根據(jù)其作用可分為效應(yīng)B淋巴細(xì)胞和調(diào)節(jié)性B淋巴細(xì)胞(regulatory B cells,Breg)，其中Breg有類似調(diào)節(jié)性T淋巴細(xì)胞(regulatory T cells,Treg)的負(fù)性調(diào)節(jié)功能，參與維持免疫系統(tǒng)穩(wěn)態(tài)。研究[1]發(fā)現(xiàn)Breg可以通過產(chǎn)生多種細(xì)胞因子，如IL-10、IL-35、TGFβ等發(fā)揮其負(fù)性調(diào)節(jié)作用，還可以通過多種膜表面分子如人凋亡相關(guān)因子配體(FasL)、細(xì)胞程序性死亡-配體1(programmed cell death-ligand 1，PD-L1)和糖皮質(zhì)激素誘導(dǎo)的腫瘤壞死因子受體配體(glucocorticoid-induced tumor necrosis factor receptor ligand，GITRL)作用于其他免疫細(xì)胞發(fā)揮調(diào)節(jié)免疫作用[2]。目前多項研究[3-4]證實Breg在自身免疫性肝炎(AIH)發(fā)病機(jī)制中起著重要的作用，但尚未見詳細(xì)的報道。本文將圍繞Breg的分類及表型，與AIH的關(guān)系及Breg作為治療靶標(biāo)的可能性作一綜述。

1 Breg的特征

1.1 Breg的發(fā)現(xiàn) 1974年，Katz等[5]通過豚鼠遲發(fā)超敏反應(yīng)模型的研究發(fā)現(xiàn)了B淋巴細(xì)胞具有免疫調(diào)節(jié)的作用。1996年，Wolf等[6]通過先天B淋巴細(xì)胞缺乏的小鼠實驗性自身免疫性腦脊髓炎模型，首先提出B淋巴細(xì)胞的調(diào)節(jié)功能。隨后Mizoguchi等[7]通過小鼠炎癥性腸病模型表明了B淋巴細(xì)胞具有負(fù)向免疫調(diào)節(jié)功能，并首次提出“Breg”概念。2008年，Yanaba等[8]發(fā)現(xiàn)分泌IL-10的B淋巴細(xì)胞亞型，故稱之B10細(xì)胞。2010年，Blair等[9]首次證實人外周血中存在可分泌IL-10的B淋巴細(xì)胞，表面標(biāo)志CD19+CD24hiCD38hi。此后越來越多的人把目光放到了Breg上，對Breg的了解也在不斷加深。

1.2 Breg的分化及亞群 Breg的生成受一些因素影響，Toll樣受體對Breg的分化起著重要的作用，Toll樣受體9能夠與非甲基化CpG基序結(jié)合，刺激Breg產(chǎn)生IL-10。Mizoguchi等[7]通過小鼠炎癥性腸病模型表明了CD80和CD86對Breg有一定的作用。CD40的表達(dá)影響B(tài)淋巴細(xì)胞免疫耐受的產(chǎn)生，CD40與CD154相交聯(lián)是激活Breg的基本路徑之一[10]。除此之外，Breg的分化還受B淋巴細(xì)胞抗原受體、IL-7R、CD21等其他信號的參與[11]。人外周血中目前發(fā)現(xiàn)具有免疫調(diào)節(jié)的Breg見表1，隨著對Breg的研究，人們發(fā)現(xiàn)不同的情況(不同的疾病、不同的刺激、不同的對象等)下，表現(xiàn)出免疫抑制的B淋巴細(xì)胞的表面標(biāo)志不完全相同。Breg是一個異質(zhì)性群體，在獨特的亞群之間具有多種表型和功能差異，所以目前對Breg的特異性表型有待進(jìn)一步的研究。

1.3 Breg的生物學(xué)效應(yīng) Breg主要通過分泌IL-10、IL-35、TGFβ等抑炎因子來發(fā)揮其負(fù)向免疫調(diào)節(jié)功能。研究[17]表明，Breg通過分泌IL-10下調(diào)自身CD86表達(dá)，進(jìn)而抑制Th的活化。Wei等[18]在病毒性心肌炎小鼠模型中發(fā)現(xiàn)，Breg通過下調(diào)T-bet和RORγtmRNA的表達(dá)從而降低Th1和Th17的比例。Breg也可通過分泌IL-10或直接作用于CD8+T淋巴細(xì)胞。據(jù)研究[19]報道，Breg通過分泌IL-10抑制T淋巴細(xì)胞的分化及IFNγ的分泌從而抑制免疫反應(yīng)。其次，Breg可分泌TGFβ誘導(dǎo)PD-L1hiBreg分化及促進(jìn)Treg的產(chǎn)生發(fā)揮負(fù)向免疫調(diào)節(jié)功能[20]。Hussain等[21]研究表明，Breg可以通過產(chǎn)生IL-35誘導(dǎo)Breg, 促進(jìn)IL-10以及IL-35的分泌，產(chǎn)生的IL-35還可作用于T淋巴細(xì)胞, 誘導(dǎo)Foxp3+Treg細(xì)胞群來抑制炎癥。Shen等[22]在沙門氏菌感染的小鼠模型中發(fā)現(xiàn)，缺乏IL-35的B淋巴細(xì)胞可導(dǎo)致小鼠脾臟中巨噬細(xì)胞數(shù)量增多，提示Breg對巨噬細(xì)胞存在負(fù)性調(diào)節(jié)作用。

表1 Breg的亞型及表型

Breg也可以通過膜表面分子FasL、PDL-1和GITRL調(diào)節(jié)免疫。B10細(xì)胞調(diào)節(jié)功能部分由Fas/FasL途徑介導(dǎo)，最近有研究[23]報道，抗FasL抗體可部分拮抗Breg對CD4+T淋巴細(xì)胞增殖的抑制作用，離體實驗則發(fā)現(xiàn)LPS誘導(dǎo)的Bregs通過高表達(dá)FasL可直接介導(dǎo)活化的B淋巴細(xì)胞凋亡[24]。最近有研究[25]報道表達(dá)PD-1的B淋巴細(xì)胞通過PD-1/PD-L1依賴性途徑抑制CD4+和CD8+T淋巴細(xì)胞，PD-L1hiB淋巴細(xì)胞通過改變下游信號通路抑制濾泡性輔助性T淋巴細(xì)胞(follicular helper T cells，Tfh)的分化[2]，而Tfh與漿細(xì)胞分化、B淋巴細(xì)胞增殖密切相關(guān)。GITR/GITRL通路在Breg調(diào)節(jié)免疫中也起到一定的作用，Meiler等[26]在動脈粥樣硬化小鼠模型中發(fā)現(xiàn)Breg通過GITR/GITRL通路調(diào)節(jié)CD4與Treg之前平衡來減輕炎癥，起到保護(hù)作用。

2 Breg在AIH中的作用機(jī)制

AIH是一種自身免疫性疾病，表現(xiàn)為自身抗體陽性、高血清IgG/γ-球蛋白血癥和界面性肝炎[27]，其發(fā)病機(jī)制仍不清。既往研究[28]認(rèn)為AIH主要是由T淋巴細(xì)胞介導(dǎo)的免疫疾病。Th0在不同細(xì)胞因子的作用下分化為Treg、Th1、Th2及Th17。Th1通過分泌TNFα、IL-2等細(xì)胞因子促進(jìn)細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞活化，生成IFNγ作用于肝細(xì)胞，引起肝損傷。Th2促進(jìn)B淋巴細(xì)胞誘導(dǎo)產(chǎn)生自身抗體，參與AIH的發(fā)生發(fā)展[29]。Th17可以通過分泌IL-17誘導(dǎo)多種炎性因子產(chǎn)生，引起組織損傷。而Treg通過分泌IL-10、TGFβ等免疫抑制性細(xì)胞因子，或直接接觸抑制、分泌穿孔素、顆粒酶產(chǎn)生負(fù)向免疫調(diào)控的作用抑制效應(yīng)T淋巴細(xì)胞增殖與分化[30]。Treg數(shù)量和功能受損，導(dǎo)致免疫抑制作用下降是AIH發(fā)病的重要機(jī)制。但近幾年越來越多的證據(jù)[3]表明Breg細(xì)胞具有Treg細(xì)胞相似的免疫調(diào)節(jié)功能，在AIH的發(fā)病機(jī)制中起著重要的作用。

2.1 Breg的數(shù)量 Tfh是Th一個特別的亞群，主要參與自身反應(yīng)性B淋巴細(xì)胞的分化、成熟及抗體的分泌，有研究表明CD25+Foxp3+Tfh細(xì)胞具有促進(jìn)Breg細(xì)胞分化的能力。Ma等[31]比較AIH小鼠與健康小鼠血清Tfh細(xì)胞百分率，發(fā)現(xiàn)AIH小鼠血清Tfh細(xì)胞百分率顯著高于健康對照組。田佳駿等[32]發(fā)現(xiàn)AIH患者體內(nèi)抑制性細(xì)胞因子IL-10水平降低，同時對AIH患者及對照組外周血進(jìn)行流式細(xì)胞術(shù)檢測，結(jié)果顯示AIH組CD19+IL-10+細(xì)胞占比低于對照組，后對B淋巴細(xì)胞亞群進(jìn)行檢測，AIH組CD19+CD24hiCD38hiBreg、CD19+CD24hiCD27+Breg占比均低于對照組。提示AIH發(fā)病過程中IL-10等抑炎因子分泌減少可能與Bregs數(shù)量及功能降低相關(guān)。

2.2 Breg的功能 目前，B淋巴細(xì)胞在AIH中發(fā)揮的作用逐漸引起學(xué)者的關(guān)注。Béland等[4]的研究表明，在小鼠AIH模型中用CD20抗體清除B淋巴細(xì)胞既可以預(yù)防AIH，又可以對已發(fā)病的小鼠起到緩解作用，表明B淋巴細(xì)胞對AIH的誘導(dǎo)和進(jìn)展都起到一定的作用。而Liu等[3]在小鼠AIH模型中發(fā)現(xiàn)，B淋巴細(xì)胞缺乏引起炎癥加重，Breg通過上調(diào)CD11b的表達(dá)抑制CD4+T淋巴細(xì)胞的增殖及IFNγ的分泌從而減輕炎癥。進(jìn)一步研究[33]發(fā)現(xiàn)Tim-1+Breg通過調(diào)節(jié)Th1/Th17細(xì)胞與Foxp3+Tregs和一類適應(yīng)性調(diào)節(jié)T淋巴細(xì)胞亞群之間的平衡緩解小鼠炎癥，Tim-1可能是AIH的B淋巴細(xì)胞靶向療法的重要治療靶標(biāo)。此外，Breg還可以通過直接分泌細(xì)胞因子來發(fā)揮其免疫調(diào)節(jié)作用，在小鼠AIH模型中，分泌IFNγ及TNFα的B淋巴細(xì)胞增多，而分泌IL-10的B淋巴細(xì)胞數(shù)量減少[4]，IFNγ作用于肝細(xì)胞，引起肝損傷，Breg在AIH究竟扮演什么樣的角色目前仍需要繼續(xù)研究。

3 結(jié)語

綜上所述，Breg在不同的亞群之間具有多種表型和功能差異，其獨特表型和特異性標(biāo)志物尚不明確，關(guān)于Breg的作用機(jī)制及是否與AIH疾病嚴(yán)重程度相關(guān)還有待研究的深入。Breg與AIH的相關(guān)性提示其在AIH發(fā)病及發(fā)展中起到一定的作用，通過對Breg的研究可以探求AIH發(fā)病機(jī)制新的角度，對開展AIH新的治療策略有一定的意義。