雪蓮培養(yǎng)物保健食品的抗氧化功能研究

廉翠翠，查圣華，王俊亮，張宏

（北京同仁堂健康藥業(yè)股份有限公司研發(fā)中心，北京100085）

自由基可導(dǎo)致人體亞健康狀態(tài)并引發(fā)多種疾病[1]，因此，適當(dāng)補(bǔ)充抗氧化食品，清除自由基，是目前保健食品的市場(chǎng)熱點(diǎn)。研究表明，雪蓮能有效去除自由基，起到抗疲勞、調(diào)節(jié)免疫的作用[2-4]。雪蓮培養(yǎng)物是以天山雪蓮為種子，運(yùn)用細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)生產(chǎn)，與天然雪蓮化學(xué)成份相似，功效相近[5]，含有大量的抗氧化類物質(zhì)，如黃酮和多酚等[6]，具有較強(qiáng)的抗炎、鎮(zhèn)痛、抗疲勞等作用[7]。目前有關(guān)雪蓮培養(yǎng)物的抗氧化研究，多數(shù)是以單一的雪蓮培養(yǎng)物為原料，研究?jī)H限于動(dòng)物實(shí)驗(yàn)，而雪蓮培養(yǎng)物保健食品在人體內(nèi)的抗氧化作用少有研究。

本文針對(duì)雪蓮培養(yǎng)物與其他具有抗氧化功能的原料：海洋魚膠原蛋白、針葉櫻桃、透明質(zhì)酸鈉，復(fù)配制成保健食品。其中，海洋魚膠原蛋白是以海洋魚皮為原料，用酶解法生產(chǎn)的海洋膠原低聚肽混合物。研究表明[8]，海洋生物活性肽具有抗氧化、降血壓、降低膽固醇等多種生理活性，因小分子低聚肽易被人體消化、吸收和利用，在人體氧化平衡和脂質(zhì)代謝體系中的功能顯著。透明質(zhì)酸（hyaluronic acid，HA）是一種天然的高分子直鏈黏多糖，商品HA一般為其鈉鹽。透明質(zhì)酸具有很好的抗氧化性。研究發(fā)現(xiàn)[9]，體內(nèi)產(chǎn)生的過(guò)量自由基可通過(guò)HA的降解來(lái)清除，保護(hù)機(jī)體免受其害。西印度櫻桃，又名針葉櫻桃，維生素C的含量高達(dá)1 215 mg/100 g～3 024 mg/100 g，是番石榴、木瓜及草莓等水果的10倍～50倍，為極佳的天然維生素C來(lái)源[10]。維生素C作為天然的自由基清除劑，可以直接或間接消除自由基[11]，起到抗氧化的作用?；谝陨戏治?，此保健食品各原料協(xié)同作用，可充分增強(qiáng)超氧化物歧化酶、過(guò)氧化氫酶和谷胱甘肽過(guò)氧化物酶活性，減少自由基生成，從而發(fā)揮良好的抗氧化作用，具有生產(chǎn)工藝簡(jiǎn)單、質(zhì)量穩(wěn)定、吸收好和服用量小的優(yōu)點(diǎn)，為雪蓮培養(yǎng)物保健食品的抗氧化功能研究提供參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

1.1.1 樣品

雪蓮培養(yǎng)物抗氧化保健食品，規(guī)格10 g/袋，置陰涼干燥處保存。

1.1.2 試劑

生理鹽水、血液過(guò)氧化脂質(zhì)（malondialdehyde，MDA）、蛋白質(zhì)羰基、超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）、谷胱甘肽（glutathione，GSH）試劑盒、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶（glutathione peroxidase，GSH-Px）測(cè)定試劑盒：南京建成生物工程研究所。

1.2 儀器與設(shè)備

URIT-800半自動(dòng)生化分析儀：桂林優(yōu)利特電子集團(tuán)有限公司；FA1604N電子分析天平：上海菁華科技儀器有限公司；TG16KR低溫離心機(jī)：長(zhǎng)沙東旺實(shí)驗(yàn)儀器有限公司；WB-2010A恒溫水浴箱：天津奧特賽恩斯儀器有限公司；Vortex-Genie2旋渦混勻器：美國(guó)Scientific Industries公司；iE 12數(shù)字式心電圖機(jī)：深圳邦健電子有限公司；DHT01醫(yī)用X線透視機(jī)：上海東和電器技術(shù)有限公司；KX2800全數(shù)字B型超聲診斷儀：徐州市凱信電子設(shè)備有限公司；BC-2800血球計(jì)數(shù)儀：深圳邁瑞生物醫(yī)療電子股份有限公司；YXY-61醫(yī)用電子血壓計(jì)：北京東華原醫(yī)療設(shè)備有限公司。

1.3 方法

1.3.1 試驗(yàn)對(duì)象

1.3.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及環(huán)境

選用廣西醫(yī)科大學(xué)動(dòng)物中心繁殖的SPF級(jí)10月齡以上 SD 種雄性大鼠 40只，體重（561.3±39.6）g，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào)：SCXK（桂）2009-0002，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物質(zhì)量合格證號(hào)：0006691。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室為屏障系統(tǒng)，使用許可證號(hào)：SYXK（桂）2011-0005。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室溫度22℃～25℃，相對(duì)濕度：55%～70%。

1.3.1.2 人體試食試驗(yàn)受試對(duì)象

受試者納入標(biāo)準(zhǔn)為年齡在40歲～65歲，身體健康狀況良好，志愿受試并保證配合者。本次試驗(yàn)初始共有120位復(fù)合納入條件者志愿參加試驗(yàn)。受試者排除標(biāo)準(zhǔn)：妊娠或哺乳期婦女及對(duì)本品過(guò)敏者；合并有心、腦血管、肝、腎和造血系統(tǒng)等嚴(yán)重疾病及精神病患者；短期內(nèi)服用與受試功能有關(guān)的物品，影響到對(duì)結(jié)果的判斷者；不符合納入標(biāo)準(zhǔn)，未按規(guī)定使用受試樣品，無(wú)法判定功效或資料不全影響功效或安全性判斷者。

1.3.2 服用劑量

人口服推薦用量為每人（成人）每日1次，每次1袋，成人體重按60 kg計(jì)算，折合劑量為166.7 mg/kg BW。

1.3.3 試驗(yàn)分組設(shè)計(jì)

1.3.3.1 動(dòng)物實(shí)驗(yàn)劑量選擇與受試物給予方式

根據(jù)樣品的人體推薦量設(shè)3 334、1 667、834 mg/kg BW（分別相當(dāng)于人體推薦用量的20、10、5倍）3個(gè)劑量組，同時(shí)設(shè)一個(gè)陰性對(duì)照組，每組10只動(dòng)物。稱取雪蓮培養(yǎng)物抗氧化保健食品66.68、33.34、16.68 g，各加純水至 200 mL，混勻，配成 333.4、166.7、83.4 mg/mL 濃度混懸液，采用經(jīng)口方式，分別給予相應(yīng)劑量組動(dòng)物灌胃，灌胃體積為1.0 mL/100 g BW，陰性對(duì)照組給予等體積的純水，每天灌胃1次，連續(xù)灌胃30 d。

1.3.3.2 人體試食試驗(yàn)設(shè)計(jì)與分組

采用自身和組間兩種對(duì)照設(shè)計(jì)。以受試者血液丙二醛含量為主，兼顧超氧化物歧化酶和谷胱甘肽過(guò)氧化物酶活性進(jìn)行分層，然后隨機(jī)分為試食組和對(duì)照組，每組各60人；盡可能考慮影響結(jié)果的主要因素如年齡、性別、生活飲食習(xí)慣等，進(jìn)行均衡性檢驗(yàn)，以保證組間的可比性。試食組試食樣品每人每日服食1次，每次1袋，連續(xù)服用3個(gè)月，對(duì)照組采用空白對(duì)照。試驗(yàn)期間兩組人群原生活、飲食習(xí)慣不變。

1.4 功效指標(biāo)測(cè)定

1.4.1 動(dòng)物實(shí)驗(yàn)指標(biāo)測(cè)定

受試?yán)淆g大鼠在SPF級(jí)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室內(nèi)喂養(yǎng)觀察7 d，未見(jiàn)異常后眼內(nèi)眥取血測(cè)定血清丙二醛含量。根據(jù)MDA含量將大鼠隨機(jī)分成4個(gè)組，每組10只，并適當(dāng)調(diào)整，使各組的平均體重也盡可能的均衡。按1.0 mL/100 g BW的體積，分別給予各劑量組動(dòng)物灌胃相應(yīng)濃度的樣品溶液，陰性對(duì)照組給予等體積的純水，每天灌胃1次，連續(xù)灌胃30 d，然后處死動(dòng)物，取血、肝、腦組織進(jìn)行觀察指標(biāo)測(cè)定。

1）大鼠血清及肝、腦組織勻漿液中LPO含量測(cè)定（以MDA含量計(jì)）。

2）大鼠血清及肝、腦組織勻漿液中蛋白質(zhì)氧化產(chǎn)物（蛋白質(zhì)羰基）含量測(cè)定。

3）大鼠血清及肝、腦組織勻漿中抗氧化酶（SOD）活力測(cè)定。

4）大鼠血清及肝、腦組織勻漿中抗氧化物質(zhì)（GSH）含量測(cè)定。

1.4.2 人體試食試驗(yàn)功效性指標(biāo)

1.4.2.1 過(guò)氧化脂質(zhì)含量

觀察試驗(yàn)前后MDA的變化及MDA下降百分率。

1.4.2.2 超氧化物歧化酶活性

觀察試驗(yàn)前后SOD的變化及SOD升高百分率。

1.4.2.3 谷胱甘肽過(guò)氧化物酶活性

觀察試驗(yàn)前后GSH-Px的變化及GSH-Px升高百分率。

1.5 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)

實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用方差分析進(jìn)行統(tǒng)計(jì)處理。自身對(duì)照資料采用配對(duì)t檢驗(yàn)，兩組均數(shù)比較采用成組t檢驗(yàn)。百分率用χ2檢驗(yàn)進(jìn)行檢驗(yàn)。在實(shí)驗(yàn)前兩組間比較差異無(wú)顯著性的前提下，可進(jìn)行試驗(yàn)后兩組間比較。

2 結(jié)果與分析

2.1 動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.1.1 樣品對(duì)大鼠體重的影響

各組大鼠的體重變化見(jiàn)表1。

表1 各組大鼠的體重變化（±s）Table 1 Change of rat weight in each group（±s）

表1 各組大鼠的體重變化（±s）Table 1 Change of rat weight in each group（±s）

注：表中各組大鼠的體重及增重量比較，差異均無(wú)顯著性（P>0.05）。

劑量組/（mg/kg BW）動(dòng)物只數(shù)初始體重/g第7天/g第14天/g第21天/g第30天/g增重量/g 3 334 10 557.3±45.4 568.4±46.6 579.8±47.3 586.0±47.5 591.1±48.3 33.8±3.3 1 667 10 564.4±33.1 576.4±33.7 587.8±34.2 592.8±33.9 597.8±34.3 33.4±2.7 834 10 562.7±49.4 573.8±50.4 584.1±51.7 589.8±51.6 594.5±52.4 31.8±3.7陰性對(duì)照 10 560.8±33.9 571.6±34.5 582.5±35.4 587.9±36.4 593.1±37.2 32.3±4.2

由表1可知，實(shí)驗(yàn)前各組大鼠的體重?zé)o明顯差異，實(shí)驗(yàn)結(jié)束樣品各劑量組的大鼠體重及增重量與陰性對(duì)照組比較，差異均無(wú)顯著性（P>0.05），表明該樣品對(duì)老齡大鼠體重?zé)o明顯影響。

2.1.2 樣品對(duì)大鼠血清及組織過(guò)氧化脂質(zhì)（LPO）含量的影響

各組大鼠的血清和腦、肝組織過(guò)氧化脂質(zhì)含量見(jiàn)表2。

表2 各組大鼠的血清和腦、肝組織過(guò)氧化脂質(zhì)（LPO以MDA計(jì)）含量（±s）Table 2 Lipid peroxide（LPO，calculated as MDA）content in serum，brain and liver tissues of rats in each group（±s）

表2 各組大鼠的血清和腦、肝組織過(guò)氧化脂質(zhì)（LPO以MDA計(jì)）含量（±s）Table 2 Lipid peroxide（LPO，calculated as MDA）content in serum，brain and liver tissues of rats in each group（±s）

注：*表示具有顯著性差異（P<0.05）。

劑量組/（mg/kg BW）動(dòng)物只數(shù)試驗(yàn)前血清LPO/（nmol/mL）試驗(yàn)終肝組織LPO/（nmol/g組織）3 334 10 4.96±0.64 5.41±0.57* 158.2±31.9 479.8±67.8*1 667 10 4.50±0.43 5.92±0.49 155.7±40.5 504.1±92.4 834 10 5.09±0.65 6.23±0.77 172.3±49.6 540.4±107.1陰性對(duì)照 10 5.05±0.56 6.33±0.77 186.3±46.1 598.3±77.7試驗(yàn)終血清LPO/（nmol/mL）試驗(yàn)終腦組織LPO/（nmol/g組織）

由表2可知，實(shí)驗(yàn)前各組動(dòng)物的血清LPO含量均衡，各組之間差異無(wú)顯著性（P>0.05）。試驗(yàn)終末，樣品各劑量組大鼠的血清、腦及肝組織的過(guò)氧化脂質(zhì)（LPO）含量均低于陰性對(duì)照組，其中高劑量組的血清及肝組織的LPO含量與陰性對(duì)照組的差異具有顯著性（P<0.05），表明該樣品具有降低老齡大鼠血清和肝組織中的過(guò)氧化脂質(zhì)含量的作用。

2.1.3 樣品對(duì)大鼠血清及組織蛋白質(zhì)羰基含量的影響

各組大鼠的血清和腦、肝組織蛋白質(zhì)羰基含量見(jiàn)表3。

表3 各組大鼠的血清和腦、肝組織蛋白質(zhì)羰基含量（±s）Table 3 Protein carbonyl content in serum，brain and liver tissues of rats in each group（±s）

表3 各組大鼠的血清和腦、肝組織蛋白質(zhì)羰基含量（±s）Table 3 Protein carbonyl content in serum，brain and liver tissues of rats in each group（±s）

劑量組/（mg/kg BW）動(dòng)物只數(shù)血清蛋白質(zhì)羰基/（nmol/mgprot）腦組織蛋白質(zhì)羰基/（nmol/mgprot）肝組織蛋白質(zhì)羰基/（nmol/mgprot）3 334 10 2.64±0.84 8.99±1.30 10.89±2.07 1 667 10 2.96±0.65 9.34±1.75 11.39±3.50 834 10 3.13±0.73 10.07±1.30 12.15±2.89陰性對(duì)照 10 3.20±0.57 10.36±1.59 13.11±2.16

由表3可知，樣品各劑量組大鼠的血清、腦及肝組織的蛋白質(zhì)羰基含量均低于陰性對(duì)照組，但各劑量組的血清、腦及肝組織的蛋白質(zhì)羰基含量與陰性對(duì)照組的比較差異均無(wú)顯著性（P>0.05），表明該樣品對(duì)老齡大鼠血清及組織中的蛋白質(zhì)羰基含量無(wú)明顯的影響。

2.1.4 樣品對(duì)大鼠血清及組織中超氧化物歧化酶（SOD）活力的影響

各組大鼠的血清及肝、腦組織SOD活性見(jiàn)表4。

表4 各組大鼠的血清及肝、腦組織SOD活性（±s）Table 4 SOD activity in serum，liver and brain tissues of rats in each group（±s）

表4 各組大鼠的血清及肝、腦組織SOD活性（±s）Table 4 SOD activity in serum，liver and brain tissues of rats in each group（±s）

注：*表示具有顯著性差異（P<0.05）。

劑量組/（mg/kg BW）動(dòng)物只數(shù)血清SOD/（U/mL）腦組織SOD/（U/g組織）肝組織SOD/（U/g組織）3 334 10 235.6±30.8* 950.5±53.2 1 321.6±105.9*1 667 10 214.6±25.3 934.2±71.7 1 200.8±171.8 834 10 197.8±41.7 925.4±50.2 1 159.8±221.5陰性對(duì)照 10 184.9±49.3 884.4±132.8 1 097.0±116.6

由表4可知，試驗(yàn)終末，樣品各劑量組大鼠的血清、肝及腦組織中的SOD活力均高于陰性對(duì)照組，其中的高劑量組血清和肝組織的SOD活力與陰性對(duì)照組的差異具有顯著性（P<0.05），表明該樣品可以提高老齡大鼠的血清和肝組織中的超氧化物歧化酶（SOD）的活性。

2.1.5 樣品對(duì)大鼠血清及組織中谷胱甘肽（GSH）含量的影響

各組大鼠的血清及腦、肝組織GSH含量見(jiàn)表5。

由表5可知，試驗(yàn)終末，樣品各劑量組大鼠的血清、肝及腦組織中GSH含量均高于陰性對(duì)照組，且高劑量組血清和腦組織的GSH含量與陰性對(duì)照組的差異具有極顯著性（P<0.01），表明該樣品具有提高老齡大鼠血清和腦組織中的谷胱甘肽（GSH）含量的作用。

表5 各組大鼠的血清及腦、肝組織GSH含量（±s）Table 5 GSH content in serum，brain and liver tissues of rats in each group（±s）

表5 各組大鼠的血清及腦、肝組織GSH含量（±s）Table 5 GSH content in serum，brain and liver tissues of rats in each group（±s）

注：**表示具有極顯著差異（P<0.01）。

劑量組/（mg/kg BW）動(dòng)物只數(shù)血清GSH/（μmol/L）腦組織GSH/（μmol/g組織）肝組織GSH/（μmol/g組織）3 334 10 60.14±13.85** 1.55±0.19** 5.58±0.71 1 667 10 49.44±14.68 1.45±0.13 5.45±0.75 834 10 42.68±14.16 1.38±0.16 5.08±0.81陰性對(duì)照 10 10.99±9.10 1.31±0.10 4.88±0.87

2.1.6 動(dòng)物實(shí)驗(yàn)小結(jié)

分別以3 334、1 667、834 mg/kg BW劑量（分別相當(dāng)于人體推薦用量的20、10、5倍）的雪蓮培養(yǎng)物抗氧化保健食品給予老齡大鼠連續(xù)灌胃30 d，能降低大鼠血清和肝組織中過(guò)氧化脂質(zhì)（LPO）含量，提高大鼠血清和肝組織中的超氧化物歧化酶（SOD）的活性，提高大鼠血清和腦組織中的谷胱甘肽（GSH）的含量，對(duì)大鼠的體重?zé)o明顯影響。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果判定：過(guò)氧化脂質(zhì)含量、蛋白質(zhì)羰基、抗氧化酶活性、抗氧化物質(zhì)4項(xiàng)指標(biāo)中3項(xiàng)指標(biāo)陽(yáng)性，可判定該受試樣品抗氧化實(shí)驗(yàn)結(jié)果陽(yáng)性。據(jù)此判定，該樣品具有抗氧化功能。

2.2 人體試食試驗(yàn)結(jié)果

2.2.1 一般情況

試食前兩組人群基本情況見(jiàn)表6。

表6 試食前兩組人群基本情況（±s）Table 6 General information of the two groups before the test（±s）

表6 試食前兩組人群基本情況（±s）Table 6 General information of the two groups before the test（±s）

組別人數(shù)性別年齡/歲血液MDA/（nmol/mL）血液SOD/（U/mL）血液GSH-Px（U/mL）男 女對(duì)照組 58 30 28 54.5±6.8 4.59±0.76 46.8±8.0 118.9±16.3試食組 56 28 28 54.1±7.6 4.58±0.80 47.1±9.2 117.5±18.9

由表6可知，實(shí)驗(yàn)中失訪6例，失訪率為5.0%，最終對(duì)照組和試食組分別58例和56例進(jìn)入有效統(tǒng)計(jì)。試食前，試食組與對(duì)照組人群的年齡、精神狀況、睡眠狀況、飲食情況等基本一致；兩組人群的胸部透視、心電圖及腹部B超檢查結(jié)果均未見(jiàn)明顯異常。試食前兩組人群的血液過(guò)氧化脂質(zhì)含量、超氧化物歧化酶活性和谷胱甘肽過(guò)氧化物酶活性比較，均沒(méi)有明顯差異（P>0.05）。

2.2.2 樣品對(duì)血液過(guò)氧化脂質(zhì)含量的影響

試食前后兩組人群的血液過(guò)氧化脂質(zhì)含量變化見(jiàn)表7。

由表7可知，試食前兩組人群的血液過(guò)氧化脂質(zhì)（MDA）含量無(wú)明顯差異（P>0.05）。試食后，試食組MDA含量平均下降13.93%，極顯著大于對(duì)照組的-0.65%（P<0.01）；試食組自身前后比較及試食后與對(duì)照組的組間比較差異均有極顯著性（P<0.01）；對(duì)照組自身比較差異則無(wú)顯著性（P>0.05），表明該樣品具有降低試食者的血液過(guò)氧化脂質(zhì)含量的作用。

表7 試食前后兩組人群的血液過(guò)氧化脂質(zhì)含量變化（±s）Table 7 Change in blood lipid peroxide content in the two groups before and after the test（±s）

表7 試食前后兩組人群的血液過(guò)氧化脂質(zhì)含量變化（±s）Table 7 Change in blood lipid peroxide content in the two groups before and after the test（±s）

注：**表示試食組與對(duì)照組組間比較，具有極顯著差異（P<0.01）；##表示試食組自身前后比較，具有極顯著差異（P<0.01）。

組別人數(shù)試食前MDA/（nmol/mL）試食后MDA/（nmol/mL）MDA下降值/（nmol/mL）下降率/%對(duì)照組 58 4.59±0.76 4.61±0.77 -0.03±0.18 -0.65±4.12試食組 56 4.58±0.80 3.94±0.69**## 0.64±0.28** 13.93±5.23**

2.2.3 樣品對(duì)血液超氧化物歧化酶（SOD）活性的影響

試食前后兩組人群的血液超氧化物歧化酶活性變化見(jiàn)表8。

由表8可知，試食前兩組人群的血液超氧化物歧化酶（SOD）活性無(wú)明顯差異（P>0.05）。試食后，試食組SOD活性平均升高10.39%，極顯著大于對(duì)照組的0.03%（P<0.01）；試食組自身前后比較及試食后與對(duì)照組的組間比較差異均具有極顯著性（P<0.01）；對(duì)照組自身比較差異則無(wú)顯著性（P>0.05），表明該樣品具有升高試食者血液SOD活性的作用。

表8 試食前后兩組人群的血液超氧化物歧化酶活性變化（±s）Table 8 Change in blood superoxide dismutase activity in the two groups before and after the test（±s）

表8 試食前后兩組人群的血液超氧化物歧化酶活性變化（±s）Table 8 Change in blood superoxide dismutase activity in the two groups before and after the test（±s）

注：**表示試食組與對(duì)照組組間比較，具有極顯著差異（P<0.01）；##表示試食組自身前后比較，具有極顯著差異（P<0.01）。

組別人數(shù)試食前SOD/（U/mL）試食后SOD/（U/mL）SOD升高值/（U/mL）升高率/%對(duì)照組 58 46.8±8.0 46.9±7.9 0.09±0.92 0.30±2.12試食組 56 47.1±9.2 52.0±10.1**## 4.85±1.90** 10.39±3.71**

2.2.4 樣品對(duì)血液谷胱甘肽過(guò)氧化物酶（GSH-Px）活性的影響

試食前后兩組人群的血液谷胱甘肽過(guò)氧化酶活性變化見(jiàn)表9。

由表9可知，試食前兩組人群的血液谷胱甘肽過(guò)氧化物酶（GSH-Px）含量無(wú)明顯差異（P>0.05）。試食后，試食組GSH-Px活性平均升高9.92%，極顯著大于對(duì)照組的-0.14%（P＜0.01）；試食組自身前后比較及試食后與對(duì)照組的組間比較差異均有極顯著性（P＜0.01），對(duì)照組自身比較差異則無(wú)顯著性（P>0.05），表明該樣品具有升高試食者血液GSH-Px活性的作用。

表9 試食前后兩組人群的血液谷胱甘肽過(guò)氧化酶活性變化（±s）Table 9 Change in blood glutathione peroxidase activity in the two groups before and after the test（±s）

表9 試食前后兩組人群的血液谷胱甘肽過(guò)氧化酶活性變化（±s）Table 9 Change in blood glutathione peroxidase activity in the two groups before and after the test（±s）

注：**表示試食組與對(duì)照組組間比較，具有極顯著差異（P＜0.01）；##表示試食組自身前后比較，具有極顯著差異（P＜0.01）。

組別人數(shù)試食前GSH-Px/（U/mL）試食后GSH-Px/（U/mL）GSH-Px升高值/（NU/mL）升高率/%對(duì)照組 58 118.9±16.3 118.8±16.5 -0.15±1.34 -0.14±1.16試食組 56 117.5±18.9 129.1±20.8**## 11.59±4.52** 9.92±3.50**

2.2.5 樣品對(duì)人體各項(xiàng)指標(biāo)的影響

試驗(yàn)前后，試食樣品組人群的血紅細(xì)胞數(shù)、白細(xì)胞數(shù)、血紅蛋白、大小便常規(guī)、血清總蛋白、白蛋白、谷草轉(zhuǎn)氨酶、谷丙轉(zhuǎn)氨酶、尿素氮、肌酐、血糖等各項(xiàng)檢查結(jié)果均在正常值范圍內(nèi)，且試驗(yàn)前后無(wú)明顯變化，表明該樣品對(duì)受試者健康無(wú)不良影響。試驗(yàn)過(guò)程中試食樣品者均未出現(xiàn)惡心、脹氣、腹瀉及過(guò)敏等不良反應(yīng)。

2.2.6 人體試食試驗(yàn)小結(jié)

試食組人群連續(xù)服用雪蓮培養(yǎng)物抗氧化保健食品3個(gè)月后，血液MDA含量平均下降13.93%，極顯著大于對(duì)照組的-0.65%（P＜0.01），試食組自身前后比較及試食后與對(duì)照組的組間比較差異均有極顯著性（P＜0.01）；試食組人群血液中SOD活性平均升高10.39%，極顯著大于對(duì)照組的 0.30%（P＜0.01），試食組自身前后比較及試食后與對(duì)照組的組間比較差異均有極顯著性（P＜0.01）；試食組人群血液GSH-Px活性平均升高9.92%，極顯著高于對(duì)照組的-0.14%（P＜0.01），試食組自身前后比較及試食后與對(duì)照組的組間比較差異均有極顯著性（P＜0.01）；而對(duì)照組人群的MDA、SOD及GSH-Px，試驗(yàn)前后自身比較差異均無(wú)顯著性（P>0.05）。人體試食試驗(yàn)結(jié)果判定：各功效觀察指標(biāo)試驗(yàn)前后自身比較和試食后組間比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，方可判定該指標(biāo)陽(yáng)性。過(guò)氧化脂質(zhì)含量、超氧化物歧化酶活性、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶活性3項(xiàng)指標(biāo)中任兩項(xiàng)實(shí)驗(yàn)結(jié)果陽(yáng)性，可判定該受試樣品具有抗氧化功能。據(jù)此判定，該樣品具有抗氧化功能。

3 結(jié)論

本文針對(duì)雪蓮培養(yǎng)物與海洋魚膠原蛋白、針葉櫻桃、透明質(zhì)酸鈉復(fù)配制成的保健食品的抗氧化功能進(jìn)行研究。其中，海洋魚膠原蛋白具有很好的羥基自由基清除能力、超氧陰離子自由基清除能力及還原能力[8]；針葉櫻桃果粉含有的大量維生素C具有清除自由基、保護(hù)細(xì)胞膜完整性、維持酶活性的功能，可促進(jìn)機(jī)體有氧代謝的進(jìn)行[11]；雪蓮培養(yǎng)物能升高細(xì)胞中谷胱甘肽過(guò)氧化物酶（GSH-Px）活性和超氧化物歧化酶（SOD）活性，能顯著降低細(xì)胞中的脂質(zhì)氧化終產(chǎn)物丙二醛（MDA）和自由基[5]；透明質(zhì)酸鈉在體內(nèi)通過(guò)自身的降解，清除過(guò)量的自由基[6]。并且這幾種原料都為食品級(jí)原料，在食品、保健品等領(lǐng)域已被廣泛使用，安全性和有效性都已被證實(shí)。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)證明：分別以3 334、1 667、834 mg/kg BW劑量的雪蓮培養(yǎng)物抗氧化保健食品給予老齡大鼠連續(xù)灌胃30 d，能降低大鼠血清和肝組織中過(guò)氧化脂質(zhì)（LPO）含量，提高超氧化物歧化酶（SOD）的活性，提高大鼠血清和腦組織中的谷胱甘肽（GSH）的含量。人體試驗(yàn)證明：口服用量每日1次，每次1袋（10 g/袋），連續(xù)服用3個(gè)月后，試食組人群血液MDA含量平均下降13.93%，血液中SOD活性平均升高10.39%，血液GSH-Px活性平均升高9.92%，試食組自身前后比較及試食后與對(duì)照組的組間比較差異均有極顯著性（P＜0.01）。綜上所述，本研究驗(yàn)證了雪蓮培養(yǎng)物保健食品的抗氧化功能，并為雪蓮培養(yǎng)物保健食品的開(kāi)發(fā)提供了參考依據(jù)。