29株蟲生真菌的鑒定及對煙粉虱的毒力

陳中琴，梁文龍，黃麗萍，沈斌斌

(廣東省生物農(nóng)藥創(chuàng)制與應(yīng)用重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室/生物防治教育部工程研究中心/華南農(nóng)業(yè)大學(xué) 農(nóng)學(xué)院，廣東 廣州 510642)

蟲生真菌是一類重要的生物資源，也是生態(tài)系統(tǒng)的重要組成部分，其寄主廣泛，包括半翅目的蚜科、飛虱科、葉蟬科、沫蟬科、粉虱科和盲蝽科，鱗翅目、鞘翅目、雙翅目和纓翅目等昆蟲[1]。蟲生真菌以種類多、安全有效、應(yīng)用期長、不傷害天敵、不易產(chǎn)生抗性及能快速大量生產(chǎn)等優(yōu)點(diǎn)著稱，在生物防治中有著無可比擬的反復(fù)侵染性和生產(chǎn)便利性[2]。白僵菌Beauveria寄主范圍廣泛，包括重要的農(nóng)業(yè)和森林害蟲[3-5]、病媒介昆蟲[6-7]和蜱螨類[8]，易培養(yǎng)，且對溫血動物和植物無害，另外，不僅對成蟲治病力強(qiáng)，還能侵染幼蟲、蛹、成蟲等蟲態(tài)，對下一代有持續(xù)作用[9-10]。

煙粉虱Bemisia tabaci屬于半翅目Homoptera粉虱科Aleyrodidae小粉虱屬Bemisia，是重要的農(nóng)業(yè)害蟲之一，可通過直接刺吸及有效傳播病毒而對作物造成損傷[11-13]。成蟲高度雜食性，侵染1 000多種植物，并可傳播菜豆金色黃花葉病毒屬Begomovirus、毛形病毒屬Crinivirus、香石竹潛隱病毒屬Carlavirus、番茄托拉多病毒屬Torradovirus和甘薯病毒屬Ipomovirus等300多種病毒，造成的經(jīng)濟(jì)損失每年達(dá)數(shù)10億美元[14-15]。煙粉虱若蟲擁有蠟質(zhì)外殼，常固定吸附在作物表面，僅以刺吸式口器危害作物，化學(xué)殺蟲劑很難滲入其體內(nèi)，為了達(dá)到防治效果往往加大藥量，這樣不但增加經(jīng)濟(jì)成本而且污染環(huán)境，還會提高害蟲的抗藥性[16]。目前煙粉虱對除蟲菊酯類、有機(jī)磷類等殺蟲劑均已產(chǎn)生了較為強(qiáng)烈的抗藥性[17]，因此，研究有效的煙粉虱生物防治技術(shù)尤為重要。

本研究以華南農(nóng)業(yè)大學(xué)生物防治教育部工程研究中心保存的29株菌株為研究對象，對菌株進(jìn)行形態(tài)學(xué)及分子生物學(xué)分類鑒定，測定不同菌株對煙粉虱的室內(nèi)致病力，最終篩選出致病力較強(qiáng)的優(yōu)良菌株，以期為煙粉虱防治提供后備的生產(chǎn)菌株。

1 材料與方法

1.1 供試材料

蟲生真菌共計(jì)29株，均為華南農(nóng)業(yè)大學(xué)生物防治教育部工程研究中心繼代保存的菌株。具體信息詳見表1。

棉花“魯棉研32號”購自山東省濰坊市種子管理站。自然條件下，用經(jīng)高壓滅菌的營養(yǎng)土缽栽培棉花種子，生長期間棉花苗置于干凈的養(yǎng)蟲籠(60 cm×60 cm×60 cm)內(nèi)，待苗長至 6～8 葉期時(shí)用于試驗(yàn)。

B型煙粉虱種群2005年采自華南農(nóng)業(yè)大學(xué)教學(xué)實(shí)習(xí)農(nóng)場，寄主植物為番茄。采回后煙粉虱被隔離飼養(yǎng)在生物防治教育部工程研究中心的棉花寄主上繼代繁殖。飼養(yǎng)條件為溫度(27±1)℃，光周期為14 h 光∶10 h 暗，相對濕度 (75±5)%。

Ezup柱試真菌基因組DNA抽提試劑盒[生工生物工程(上海)股份有限公司]、吐溫?80(φ為0.05% )、95%(φ)乙醇溶液、75%(φ)乙醇溶液、葡萄糖、瓊脂糖、戊二醛、丙酮、磷酸緩沖液、DL2000 DNA Marker。

1.2 方法

1.2.1 蟲生真菌的形態(tài)學(xué)鑒定 將菌株轉(zhuǎn)接到新的 PDA 培養(yǎng)皿 25 ℃ 條件下培養(yǎng) 3～5 d，取菌絲分布均勻的供試菌一皿，用直徑1.5 cm的打孔器打菌餅，將菌餅置于PDA平板中央進(jìn)行接種，25 ℃光照培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)。用十字交叉法，分別于第 3、5、7、9 和 10 天測定各菌株的縱橫菌落直徑，每株重復(fù)測定5～6個皿，以加入無菌水的PDA培養(yǎng)基作為對照。同時(shí)，10 d后用相機(jī)拍攝菌落正反面。

將上一步驟培養(yǎng)10 d形成的菌落全部置于50 mL 0.05%(φ)的吐溫?80 溶液中，充分振蕩，取200 μL孢子懸浮液，在血球計(jì)數(shù)板上鏡檢各菌株的孢子萌發(fā)情況。每處理重復(fù)3次，以加入無菌水的液體培養(yǎng)基作為空白對照。菌株產(chǎn)孢量計(jì)算公式為：

1 cm2菌株產(chǎn)孢量=(平均每小格孢子數(shù)×4×106×稀釋倍數(shù))/(3.14×0.09)。

進(jìn)行孢子的掃描電鏡觀察。

1.2.2 蟲生真菌的分子生物學(xué)鑒定 用Ezup柱試真菌基因組DNA抽提試劑盒提取總DNA。

ITS序列、Bloc序列、TEF序列的PCR擴(kuò)增均采用通用引物，詳細(xì)引物信息見表2。PCR反應(yīng)體系為 25 μL 體系，其中 ddH2O 10 μL，2×TaqPCR StarMix 12 μL，上下游引物各 1 μL，DNA 模板 1 μL。ITS 擴(kuò)增條件：94 ℃ 5 min；94 ℃ 1 min，55 ℃ 1 min，72 ℃ 1 min，35 個循環(huán)；72 ℃ 延伸 10 min。Bloc擴(kuò)增條件：95 ℃ 5 min；95 ℃ 30 s，54 ℃ 30 s，72 ℃ 80 s，40 個循環(huán)；72 ℃ 延伸 15 min。TEF 擴(kuò)增條件：TEF 采用降落 PCR 的擴(kuò)增方式，95 ℃ 5 min；95 ℃30 s，66 ℃ 30 s，72 ℃ 1 min，每個循環(huán)退火溫度降低 1 ℃，11 個循環(huán)；95 ℃ 30 s，56 ℃ 30 s，72 ℃1 min，35 個循環(huán)；72 ℃ 延伸 10 min。將目的條帶大小合適樣品的純化回收產(chǎn)物送上海美吉生物醫(yī)藥科技有限公司進(jìn)行序列測定。利用軟件Geneious進(jìn)行序列拼接，進(jìn)行Blast序列相似性搜索，采用軟件MEGA 7.0構(gòu)建系統(tǒng)進(jìn)化樹。

表2 蟲生真菌DNA的PCR擴(kuò)增引物Table 2 PCR amplification primers for entomogenous fungal DNA

1.2.3 蟲生真菌對煙粉虱的毒力測定 在PDA平板上培養(yǎng)7 d后，充分產(chǎn)孢的蟲生真菌分生孢子用0.05%(φ)吐溫?80無菌水洗脫，攪拌，充分振蕩，過濾，用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)，測量母液的濃度，配制成1×108mL?1的孢子懸浮液，再稀釋成 1×107mL?1的孢子懸浮液備用。

將帶有煙粉虱2齡若蟲的棉花葉片背面浸于配好的孢子懸浮液中，30 s后取出，待葉片自然晾干后，將葉片背面朝上置于瓊脂培養(yǎng)基中，用保鮮膜封口并扎孔通氣，將培養(yǎng)皿傾斜放置，置于人工氣候箱中，飼養(yǎng)條件為溫度(27±1)℃，光周期14 h光∶10 h 暗，相對濕度 (75±5)%。以 0.05%(φ)吐溫?80無菌水為空白對照。每個處理重復(fù)4次，每個重復(fù)100頭若蟲。于7 d后檢查煙粉虱的死亡情況并記錄死亡數(shù)，計(jì)算死亡率。

1.3 數(shù)據(jù)處理

采用SPSS17.0與Excel軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理及統(tǒng)計(jì)分析，Duncan’s進(jìn)行差異顯著性檢驗(yàn)。

2 結(jié)果與分析

2.1 蟲生真菌的形態(tài)學(xué)觀察

2.1.1 蟲生真菌的菌落形態(tài) 培養(yǎng)第10天分別觀察及拍攝PDA培養(yǎng)基上各菌株菌落的正面及背面形態(tài)圖(圖1)。

菌株SB003菌落呈白色，中央氣生菌絲突起，向外氣生菌絲減少，變薄，背面橘黃色，培養(yǎng)基平板不變色(圖1-1、1-2)；菌株SB004菌落呈放射狀有褶皺，中間絨毛狀，背面橘黃色(圖1-3、1-4)；菌株SB006菌落由絨毛狀變粉末狀，中間為凸起粉末狀(圖 1-5、1-6)。

菌株SB009菌落呈絨毛狀，表面白色，背面橘黃色(圖1-7、1-8)；菌株SB010菌落由絨毛狀變粉末狀，背面邊緣呈絨毛狀，表面白色，背面橘黃色(圖1-9、1-10)；菌株SB015菌落由絨毛狀變粉末狀，邊緣無絨毛，背面白色或淡黃色，后期中間凸起厚粉末 (圖 1-11、1-12)。

菌株SB026(圖1-13、1-14)菌落形態(tài)特征同菌株 SB015；菌株 SB032(圖 1-15、1-16)、SB036(圖 1-19、1-20)、SB037(圖 1-21、1-22)、SB038(圖 1-23、1-24)菌落初期為絨毛狀，中央氣生菌絲突起、疏松，后期中間有凸起厚粉末，邊緣呈絨毛狀，有褶皺，表面白色或乳白色，培養(yǎng)基平板不變色，此外，菌株SB037、SB038菌落有液滴；菌株SB035(圖1-17、1-18)菌落由絨毛狀變粉末狀，表面白色，背面呈橘黃色。

菌株 SB039(圖 1-25、1-26)、SB041(圖 1-27、1-28)菌落絮狀，表面白色，背面淡黃色；菌株SB043培養(yǎng)10 d的菌落由絨毛變粉末狀，邊緣呈絨毛狀，背面呈淡黃色 (圖 1-29、1-30)。

菌株SB050菌落由絨毛狀變?yōu)榉勰?，表面白色，培養(yǎng)基背面白色或淡黃色(圖1-31、1-32)；菌株SB051菌落前期絨毛狀，后期粉末狀，中間凸起厚粉末，邊緣呈絨毛狀，菌落放射狀，背面淡黃色(圖1-33、1-34)；菌株SB057菌落由絨毛狀變粉末狀，邊緣無絨毛，背面白色或淡黃色(圖1-35、1-36)。

菌株 SB062(圖 1-37、1-38)、SB673(圖 1-45、1-46)菌落形態(tài)同 SB032；菌株SB063(圖 1-39、1-40)、SB671(圖 1-41、1-42)、SB672(圖 1-43、1-44)和 SB674(圖 1-47、1-48)菌落形態(tài)同 SB050。

菌株SP016(圖1-49、1-50)菌落形態(tài)同SB043；菌株SP031菌落中間絨毛狀，表面白色，背面淡黃色，邊緣絨毛狀 (圖 1-51、1-52)；菌株 SP433(圖 1-53、1-54)菌落形態(tài)同SB032。

菌株 SP665(圖 1-55、1-56)、SP670(圖 1-57、1-58)菌落絨毛狀，中央氣生菌絲突起、疏松，向外氣生菌絲減少、變薄，中部淡黃色，邊緣白色，背面橘黃色或淡黃色，培養(yǎng)基平板不變色。

圖1 菌株的菌落形態(tài)(奇數(shù)為正面，偶數(shù)為反面)Fig. 1 Colony morphology of strain(the odd number showed the front and the even number showed the back )

2.1.2 孢子的掃描電鏡觀察 菌株 SB009 的孢子呈卵形和近球形，孢子直徑 1.8～2.2 μm (圖 2a)。菌株 SB026 的孢子呈卵形，孢子直徑 1.8～2.4 μm (圖 2b)。菌株SB038產(chǎn)孢細(xì)胞的基部膨大，產(chǎn)孢軸“Z”型彎曲，分生孢子有球形和卵形，孢子直徑1.7～2.6 μm(圖2c)。SB041 孢子形狀和大小與SB009比較類似，孢子卵形，部分為近球形，直徑 1.6～2.5 μm (圖2d)。SP031孢子有球形，也有橢圓形，孢子大小1.3～1.5 μm (圖 2e)。SP665 分生孢子梗不規(guī)則分枝，長短不一，基部擬橢圓形膨大，變細(xì)成明顯的頸部。分生孢子球形或橢圓，孢子直徑 1.4～2.2 μm (圖 2f)。2.1.3 菌落生長速率 蟲生真菌的各菌落生長速率見圖3，菌株培養(yǎng)前期(3 d)，菌株的菌落直徑差異不明顯，菌株SB010和SP031的直徑大于25.0 mm，菌株 SB038、SB035、SB039 的直徑小于 20.0 mm，其他菌株的菌落直徑為20.8～24.3 mm，菌株間無明顯差異；隨著培養(yǎng)時(shí)間的延長，菌株的菌落直徑差異增加，菌株培養(yǎng)5d時(shí)，菌株SB010、SB032、SP031、SB006的菌落直徑大于 35.0 mm，菌株SB010的菌落直徑最大，為37.9 mm，菌株SB039與SB035的菌落直徑偏小，不到25.0 mm；培養(yǎng)7 d時(shí)，菌落直徑達(dá)40.0 mm以上的菌株占供試菌株的一半，而菌株SB035與SB039的菌落直徑卻不到30.0 mm；培養(yǎng) 9 d 時(shí)，菌株 SP031、SB010、SB006、SB032、SB671、SB062、SB037、SB672 的菌落直徑達(dá)50.0 mm及以上，而菌株SB035的菌落直徑仍不到 30.0 mm；培養(yǎng) 10 d 時(shí)，菌株 SB010 與 SP031 已達(dá) 60.0 mm 以上，分別為 62.7 和 61.3 mm，生長速率最快；菌株SB041、SB039和SB035的菌落直徑不到40.0 mm，菌株SB035的菌落直徑仍為各菌株中菌落直徑最小的，僅有30.3 mm。

圖2 菌株的孢子結(jié)構(gòu)圖Fig. 2 Spore structure of strain

圖3 蟲生真菌的菌落生長速率Fig. 3 The growth rates of entomogenous fungal colonies

2.1.4 菌株產(chǎn)孢量 菌株產(chǎn)孢量見表 3，29 株蟲生真菌的產(chǎn)孢量存在明顯差異。其中，菌株SB032產(chǎn)孢量最大，其次依次分別為SB039、SB038、SB004、SB006、SB050、SP433、SB036 和 SB043，產(chǎn)孢量均大于 108mL?1。產(chǎn)孢量最少的為 SB003和SB041，產(chǎn)孢量不到 3.50×107mL?1。

2.2 蟲生真菌的分子生物學(xué)鑒定

將ITS區(qū)、TEF區(qū)、Bloc區(qū)的序列拼接后去除ITS4、ITS5、2218R、983F、B5.1F 和 B3.1R 的引物序列，ITS 區(qū)的片段為 550～600 bp，TEF 區(qū)為 1 000 bp左右，Bloc 區(qū)的片段為 1 500 bp 左右，在 GenBank上進(jìn)行BLAST比對，比對出的相似性最高的菌株結(jié)果見表4，最終比對得出分別屬于球孢白僵菌、假球孢白僵菌和環(huán)鏈棒束孢。

將供試的29株菌株的ITS序列、TEF序列和Bloc序列采用最大似然法建樹建立系統(tǒng)發(fā)育樹(圖4)。ITS序列構(gòu)建的系統(tǒng)發(fā)育樹(圖4a)分為2大分支，第1分支為假環(huán)鏈棒束孢ARSEF 6242與供試菌株SB003、SP665和SP670，因此可把它們歸為環(huán)鏈棒束孢；第2大分支為白僵菌屬，24株供試菌株與白僵菌屬的不同球孢白僵菌類聚，為球孢白僵菌，但其中菌株SB039、SB041與Strain E51類聚1分支，為假球孢白僵菌。

TEF序列構(gòu)建的系統(tǒng)發(fā)育樹(圖4b)分為3大分支，第1分支為棒束孢所在的分支，菌株SB003、SP665和SP670與菌株ARSEF 6240類聚，為環(huán)鏈棒束孢；第 2分支由菌株 F884、ARSEF 1855、SB039和SB041組成，為假球孢白僵菌；第3分支由供試的24株菌株和菌株RCEF 0006、RCEF 1276、RCEF 0301、RCEF1491、RCEF0333、ARSEF 1104和CHE-CNRCB 168組成，為球孢白僵菌。

表3 蟲生真菌的產(chǎn)孢量1)Table 3 Spore productions of entomogenous fungi

表4 供試菌株ITS區(qū)、TEF區(qū)和Bloc區(qū)的序列比對結(jié)果Table 4 Results of comparing the ITS regions, TEF regions and Bloc regions of test strains

圖4 基于不同序列以最大似然法構(gòu)建的真菌系統(tǒng)發(fā)育樹Fig. 4 Phylogenetic tree of fungi constructed using the maximum likelihood method and based on different sequences

SP665、SP670和SB003的Bloc區(qū)未能擴(kuò)增成功。Bloc序列構(gòu)建的系統(tǒng)發(fā)育樹(圖4c)分為2大分支，第1分支為假球孢白僵菌ARSEF 1855、F884所在分支，與該種類聚的也是菌株SB039和SB041；第2分支分由3個小分支構(gòu)成，為球孢白僵菌。各種間的自展支持率基本大于50%。

TEF-Bloc序列構(gòu)建的系統(tǒng)發(fā)育樹(圖4d)與單基因Bloc序列構(gòu)建的發(fā)育樹很相似，自展支持率不一樣，但供試菌株與各菌種的類聚位置一致。

2.3 蟲生真菌對煙粉虱的毒力測定

不同濃度的各菌株孢子懸浮液對煙粉虱2齡若蟲的7 d毒力測定結(jié)果見表5，各菌株在同一處理時(shí)間下，致死率存在差異。當(dāng)孢子懸浮液為1×107mL?1時(shí)，菌株SB039的致死率最高(72.77%)，其次是SP433 菌株 (69.03%)；當(dāng)孢子懸浮液為 1×108mL?1時(shí)，菌株 SP433、SB009、SB050、SB036、SB043 的致死率達(dá)80%以上，菌株SP433的致死率最高(87.37%)，致死率最小的是菌株SP031(52.85%)。同一菌株不同濃度，致死率隨著孢子懸浮液濃度的增加而升高，而菌株 SB039、SB063、SP031、SP670、SB671、SB035 在孢子懸浮液為 1×107和 1×108mL?1下處理煙粉虱若蟲7 d后得到相似的致死率。

表5 不同濃度的孢子懸浮液處理煙粉虱2齡若蟲7 d的死亡率1）Table 5 Mortality of the 2nd instar nymphs of Bemisia tabaci infected with spore suspensions of different concentrations for 7 days %

3 討論與結(jié)論

對本實(shí)驗(yàn)室長期保存的29株蟲生真菌進(jìn)行了形態(tài)學(xué)與分子生物學(xué)鑒定。供試的29株真菌菌株間的菌落直徑、產(chǎn)孢量、孢子結(jié)構(gòu)存在一定差異，菌株形態(tài)與以前描述相符，但菌株的形態(tài)特征存在交叉現(xiàn)象，不易區(qū)分。同一種分生孢子的大小或菌株形態(tài)在培養(yǎng)中會發(fā)生一定的變化[18]。在分子鑒定中，用ITS區(qū)序列鑒定白僵菌屬內(nèi)各種的效果不理想，ITS區(qū)序列的一致性程度很高，用ITS區(qū)序列單獨(dú)建系統(tǒng)發(fā)育樹時(shí)，我們發(fā)現(xiàn)供試菌株在系統(tǒng)發(fā)育樹中不能以種為分支各個分開而是呈現(xiàn)交叉狀態(tài)，對于需嚴(yán)格區(qū)分不同種或不常見的白僵菌的效果不理想，因此需要引入其他輔助基因序列[19]進(jìn)行研究，而有報(bào)道稱白僵菌屬內(nèi)有些種的TEF序列對比差異太小會導(dǎo)致難以區(qū)分、分類結(jié)果錯誤等問題[20-22]，因此多基因位點(diǎn)分析在近年來有成為研究物種差異主要方法的趨勢。張?jiān)圃碌萚23]鑒定白僵菌時(shí)，用ITS序列建構(gòu)系統(tǒng)樹時(shí)也出現(xiàn)了菌屬內(nèi)各種與球孢白僵菌系統(tǒng)交叉的現(xiàn)象，另外，他們還引入了β-tubulin序列，但也沒能很好地區(qū)分白僵菌內(nèi)種，驗(yàn)證了ITS序列用于白僵菌屬內(nèi)種分類的效果不理想。蘆俊佳等[24]鑒定楚雄腮扁葉蜂寄生真菌時(shí)，用ITS序列比對時(shí)，發(fā)現(xiàn)相似性太高，也不能對菌株的分類做出正確的界定，又對其18 S序列進(jìn)行了擴(kuò)增，最終確定了菌株的分類位置。白僵菌屬內(nèi)種的菌株鑒定是否也可以采用ITS和18S序列來解決需要進(jìn)一步的試驗(yàn)驗(yàn)證。

我們將TEF區(qū)、Bloc區(qū)的序列及TEF-Bloc聯(lián)合序列構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹，運(yùn)用了最大似然法構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹，結(jié)果顯示29株菌株共包括24株球孢白僵菌、2株假性球孢白僵菌和3株環(huán)鏈棒束孢。另外，菌株SB003、SP670和SP655在Bloc區(qū)沒能擴(kuò)增出來，出現(xiàn)這種情況的原因還有待進(jìn)一步的試驗(yàn)驗(yàn)證。分子生物學(xué)逐漸成為真菌鑒定的輔助手段，但分子生物學(xué)方法也會受基因庫的完善程度、基因庫中高度同源性系列的多少以及具體物種ITS區(qū)的可變程度等因素的影響[25-28]。球孢白僵菌在自然環(huán)境中的遺傳變異較為廣泛，且影響因素很多。從系統(tǒng)發(fā)育樹來看，與地域環(huán)境的影響也有關(guān)，如在TEF-Bloc聯(lián)合構(gòu)建的系統(tǒng)發(fā)育樹中，SB036、SB038和SB037聚在同一小支，而它們的采集地都是在內(nèi)蒙古自治區(qū)內(nèi)；3株從甘肅省采集的菌株SB006、SB004和 SP031在 ITS、TEF-Bloc的系統(tǒng)發(fā)育樹都聚在同一支。但來自同一省份采集地卻并不都聚在同一小分支，如SB010、SB035、SB671、SB673都采集于云南省，但在TEF-Bloc聯(lián)合構(gòu)建的系統(tǒng)發(fā)育樹上，上述4株菌株各自屬于不同的4個小分支。這與方志剛等[29]對不同球孢白僵菌菌株進(jìn)行地區(qū)來源與遺傳多樣性分析得到的結(jié)果類似。

本試驗(yàn)結(jié)果顯示，菌株SP433和SB009在煙粉虱防治中具有很高的應(yīng)用潛力。在本研究中，在孢子懸浮液 108mL?1處理 7 d，煙粉虱的死亡率為52.85%～87.37%，王慧[30]研究白僵菌對煙粉虱若蟲的侵染效果，在孢子懸浮液 108mL?1處理 10 d 后，煙粉虱的死亡率為52.85%～87.37%；吳乾興等[31]研究球孢白僵菌對煙粉虱若蟲的侵染效果，在孢子懸浮液 108mL?1處理 6 d 的煙粉虱死亡率為 61.2%～87.9%；以上結(jié)果表明，同種的不同菌株可能有不同的致病效果。已有研究通過白僵菌侵染生長動力學(xué)試驗(yàn)證實(shí)影響毒力差異的一大重要因素是菌體增殖能力不同[32]，另外還可能與采集地點(diǎn)、菌株保存時(shí)間、菌株分離對象等有關(guān)。

研究白僵菌聯(lián)合其他殺蟲劑或寄生昆蟲進(jìn)行聯(lián)合防治是研究的熱點(diǎn)，銀航等[33]使用球孢白僵菌與保幼激素聯(lián)用，可顯著提高對花椒蚜蟲的致死率；張爽等[34]使用蘇云金桿菌和球孢白僵菌復(fù)配來提高對小菜蛾幼蟲的殺傷力；楊芷等[35]利用赤眼蜂搭載球孢白僵菌對亞洲玉米螟進(jìn)行協(xié)同防控。未來白僵菌的應(yīng)用范圍將更加廣泛、方法將更加多樣，如何有效利用我們篩選出的高致病力的菌株還有待進(jìn)一步的研究。