不伴MBTPS2與SAT1基因突變的棘狀禿發(fā)性毛囊角化病1例

湯莊力，王亞琦，肖 彤，王 添，耿松梅，牛新武，肖生祥，王曉鵬

棘狀禿發(fā)性毛囊角化病（keratosis follicularis spinulosa decalvans，KFSD）是一種罕見的遺傳性皮膚病，又稱為Siemens 綜合征。一般認為該病的遺傳模式是X-連鎖顯性（XLD）與X-連鎖隱性（XLR）遺傳。該病由Siemens 等[1]在1925 年首次報道，典型臨床表現(xiàn)為頭發(fā)、睫毛及眉毛進行性脫發(fā)，部分患者可出現(xiàn)畏光、角膜營養(yǎng)不良等眼部癥狀[2]。截至目前，世界范圍內(nèi)關(guān)于該病的報道很少，PubMed 數(shù)據(jù)庫中僅能搜索到50 篇。KFSD 被認為具有臨床及遺傳異質(zhì)性。Gimelli 等[3]在2002 年提出SAT1基因參與KFSD的發(fā)病機制，而Aten 等[4]在2010 年通過基因連鎖分析將該病的致病基因定位于MBTPS2基因。此外，Bellet 等[5]以及Castori 等[6]學(xué)者曾分別報道符合孟德爾常染色體遺傳模式的KFSD 患者，但該遺傳模式下的致病基因尚未被定位。本文的研究對象為KFSD 的散發(fā)患者，筆者通過檢測患兒及其父母的MBTPS2基因及SAT1基因，意欲確定該患者的遺傳模式，拓展該病的基因突變譜，為進一步闡明該病的發(fā)病機制，解釋其臨床及基因異質(zhì)性奠定基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 臨床資料

患兒，男，8 歲?；純撼錾蟛痪茫p上肢逐漸出現(xiàn)毛囊性丘疹；1 年余前，開始出現(xiàn)彌漫性脫發(fā)，逐漸加重，殘余毛發(fā)性狀基本如常，未見卷曲、斷發(fā)等改變。頭皮、額部及雙上肢可見彌漫分布的毛囊性丘疹，丘疹處未見毳毛。頭皮彌漫性脫發(fā)，間有少量正常毛發(fā)生長，眉毛、睫毛以及其他部位皮膚基本正常（圖1）?；純鹤云鸩∫詠頍o畏光、視力異常等眼部不適；無皮膚瘙癢、疼痛等?；純焊改阜裾J非近親結(jié)婚，家族中無類似患者。

1.2 方法

1.2.1 皮膚活檢術(shù)與外周血采集 向患兒及其父母充分告知病情特點以及相關(guān)檢查的意義并簽署知情同意后，局麻下于頭皮枕部皮損處行皮膚活檢術(shù)，所得標(biāo)本用10%甲醛溶液固定，常規(guī)制片并蘇木精-伊紅（HE）染色。術(shù)后3 d 換藥，7 d 拆線。拆線后手術(shù)切口處皮膚愈合良好，未見局部感染或血腫。

經(jīng)肘正中靜脈分別采集患兒及其父母外周血各2 ml，乙二胺四乙酸（EDTA）抗凝，-20℃深低溫凍存。募集100 名健康志愿者（入組條件：男女不限，年齡18 ～40 歲，無系統(tǒng)性疾病或感染性疾病，凝血功能基本正常）作為健康對照，獲取知情同意書后分別采集靜脈血2 ml，編號后凍存?zhèn)溆谩?/p>

圖1 棘狀禿發(fā)性毛囊角化病患兒上肢和頭面部皮損

1.2.2 外周血采集與基因組DNA 提取 室溫緩慢熔化凍存的患者家系及健康對照外周血樣本，使用全血基因組DNA 提取試劑盒[天根生化科技(北京)有限公司]提取基因組DNA 備用。

1.2.3 聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）擴增MBTPS2與SAT1基因全部外顯子及相鄰內(nèi)含子 采用Primer3.0 軟件分別設(shè)計MBTPS2與SAT1基因全部外顯子的上下游引物。每一個外顯子的擴增體系為20 μl，體系內(nèi)依次加入5 μl 焦碳酸二乙酯（DEPC）水，10 μl PCR 混合緩沖液，上下游引物各1 μl 以及DNA 模板3 μl。PCR反應(yīng)條件為95℃預(yù)變性5 min；35 個擴增循環(huán)依次為變性（94℃，30 s），復(fù)性（56℃，30 s），延伸（72℃，1 min）；72℃終末延伸5 min，4℃保存。

PCR 擴增產(chǎn)物在0.9%瓊脂糖凝膠中電泳，全自動凝膠成像分析儀（JS-680B，上海培清科技有限公司）觀察產(chǎn)物濃度以及特異性擴增情況。

1.2.4 DNA 序列分析 PCR 產(chǎn)物純化后使用ABI3730XL 型全自動熒光DNA 測序儀（Applied Biosystems，CA，USA）測序，使用4peaks 軟件觀察測序圖是否存在雙峰，并將所測得序列與PubMed、HGMD Pro 以及dbSNP 數(shù)據(jù)庫進行比對，分析是否有未報道的基因突變。

2 結(jié)果

2.1 皮損組織病理改變

HE 染色后光鏡下觀察，毛囊（枕部頭皮）呈退行性變，毛干扭曲不完整，毛囊周圍膠原增生，未見明顯淋巴細胞浸潤（圖2）。結(jié)合臨床考慮萎縮性毛周角化病。

2.2 基因測序

該例患者及其父母基因組DNA 在MBTPS2與SAT1基因均未見任何突變。

圖2 棘狀禿發(fā)性毛囊角化病患兒皮損組織病理

3 討論

KFSD 與面部萎縮性毛發(fā)角化?。╧eratosis pilaris atrophicans faciei）、蟲蝕狀皮膚萎縮（atrophoderma vermiculatum）等疾病同屬于萎縮性毛發(fā)角化病（keratosis pilaris atrophicans，KPA）[7]，但皮損特點、累及部位與致病基因各不相同。KFSD 病因不明，主要表現(xiàn)為軀干及四肢的彌漫性毛發(fā)角化過度與頭皮的瘢痕性脫發(fā)。該病患者雖然在出生后不久就可能出現(xiàn)眼部癥狀，但四肢與軀干的毛發(fā)角化與頭皮的瘢痕性脫發(fā)常常始于青春期前后[9]。該病的組織病理學(xué)改變無特異性，可表現(xiàn)為明顯的毛囊角化過度與毛囊口擴張，皮脂腺萎縮，毛囊和血管周圍可見稀疏淋巴組織細胞浸潤；毛囊周圍纖維化可擴展至真皮網(wǎng)狀層。

KFSD較難與毛囊性魚鱗病- 脫發(fā)- 畏光 （ichthyosis follicularis，atrichia and photophobia syndrome，IFAP）綜合征相鑒別。IFAP 綜合征表現(xiàn)為毛囊性魚鱗病、非瘢痕性非進展性脫發(fā)以及畏光，部分患者可以出現(xiàn)角膜炎、瞼緣炎與牙釉質(zhì)發(fā)育不良等臨床表現(xiàn)，與KFSD 的部分臨床表現(xiàn)相似。此外，MBTPS2基因突變亦可引起IFAP 綜合征，因而有部分學(xué)者認為KFSD 是輕型的IFAP 綜合征[2]。

KFSD 具有遺傳異質(zhì)性，MBTPS2與SAT1基因被認為是X-連鎖KFSD 的致病基因。MBTPS2基因共包含11 個外顯子，編碼膜結(jié)合轉(zhuǎn)錄因子位點2 蛋白酶，對維持脂代謝穩(wěn)態(tài)以及參與內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激反應(yīng)具有重要意義。該蛋白酶失活會影響角質(zhì)形成細胞的分化，進而造成皮膚組織病理改變[8,9]。SAT1基因編碼亞精胺/精胺N 乙酰轉(zhuǎn)移酶[10]，Pietila 等[11]發(fā)現(xiàn)過表達該酶的小鼠模型會出現(xiàn)類似于人類KFSD 的臨床表現(xiàn)，但具體機制尚不明確。而KFSD 在常染色體顯性遺傳模式下的致病基因尚未定位。

KFSD 準(zhǔn)確的發(fā)病率尚不明確，未見有大規(guī)模流行病學(xué)報道。但國內(nèi)外關(guān)于該病的報道均極少，截至目前，PubMed 數(shù)據(jù)庫中關(guān)于該病的報道僅50 篇，涉及54 例散發(fā)或家系患者，累計發(fā)現(xiàn)MBTPS2基因突變23 個，其中錯義突變21 個；國內(nèi)僅報道了3 例KFSD 患者，并發(fā)現(xiàn)MBTPS2基因2 個新的突變[2,12,13]。

本例患者為散發(fā)病例，存在彌漫性毛發(fā)角化過度、頭皮進行性瘢痕性脫發(fā)等體征，臨床表現(xiàn)結(jié)合皮損組織病理改變符合KFSD 的診斷。但該例患者行基因?qū)W檢測未發(fā)現(xiàn)MBTPS2基因與SAT1基因存在任何突變。

綜上，筆者考慮該例患者可能存在其他未知的基因突變或基因部分片段缺失，具體的遺傳模式有待于突變基因及位點的確定。家系全外顯子掃描或全基因組掃描有助于發(fā)現(xiàn)潛在的基因?qū)W異常，對進一步闡明KFSD 的發(fā)病機制以及基因異質(zhì)性有重要意義，相關(guān)研究仍在進行中。