不同方法檢測(cè)抗體在新型冠狀病毒性肺炎中的應(yīng)用

薛雄燕 朱嫦琳 潘練華 徐建華

摘要：目的 探討免疫層析法（金標(biāo)法）及化學(xué)發(fā)光免疫分析法（化學(xué)發(fā)光法）檢測(cè)2019新型冠狀病毒（2019-nCOV）抗體在新型冠狀病毒性肺炎（COVID-19）中的應(yīng)用價(jià)值。方法 回顧性分析。病例組樣本來(lái)自2020年1月23日至2月18日在本院住院并確診為COVID-19的患者，對(duì)照組樣本來(lái)自同期我院非COVID-19的住院患者。收集所有研究對(duì)象的血清、血漿及全血樣本，分別采用金標(biāo)法檢測(cè)樣本中2019-nCOV總抗體，采用化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)血清及血漿樣本2019-nCOV IgM及2019-nCOV IgG抗體。結(jié)果? 金標(biāo)法采用全血樣本檢測(cè)時(shí)，與血清血漿的檢測(cè)結(jié)果有1例不一致（1/37，2.7%），未發(fā)現(xiàn)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（χ²=0.083，P=0.959;χ²=0.078，P=0.962）。兩種方法采用血清與血漿樣本檢測(cè)的結(jié)果完全一致。COVID-19患者發(fā)熱超過(guò)5天后血清IgG水平明顯升高，其中有10例患者超過(guò)30AU/mL（76.9%），僅5例為IgM陽(yáng)性（38.5%）。結(jié)論 金標(biāo)法和化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)血清2019-nCOV抗體均可作為COVID-19的輔助診斷手段，其中化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)IgM和IgG可為恢復(fù)期血漿治療COVID-19提供重要實(shí)驗(yàn)室依據(jù)。

關(guān)鍵詞：2019新型冠狀病毒性肺炎;抗體;免疫層析法;化學(xué)發(fā)光免疫分析法

【中圖分類(lèi)號(hào)】R563.1?? 【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】A??? 【文章編號(hào)】2107-2306（2020）02-085-02

自2019年12月以來(lái)，我國(guó)湖北省武漢市陸續(xù)發(fā)現(xiàn)多例新型冠狀病毒性肺炎（coronavirus disease 2019，COVID-19）患者，并在短時(shí)間內(nèi)向全國(guó)乃至境外蔓延^[1]。該病主要經(jīng)過(guò)呼吸道飛沫和密切接觸傳播。目前COVID-19已被我國(guó)納入《中華人民共和國(guó)傳染病防治法》規(guī)定的乙類(lèi)傳染病，按照甲類(lèi)傳染病管理^[2]。早發(fā)現(xiàn)早治療，是防治新冠肺炎的重要手段。尋找快速有效的COVID-19篩查及診斷方法，是目前亟待解決的問(wèn)題。本研究對(duì)三種檢測(cè)2019-nCOV抗體的方法進(jìn)行比較分析，探討其在COVID-19篩查及診斷中的應(yīng)用價(jià)值。

對(duì)象與方法

一、對(duì)象

血液樣本來(lái)源于2020年1月23日至2月18日在我院感染科及重癥醫(yī)學(xué)科的住院患者，其中病例組13例為確診COVID-19的患者，確診標(biāo)準(zhǔn)為《新型冠狀病毒感染的肺炎診療方案（試行第七版）》^[1]，其中男8例，女5例，年齡20～76歲，平均年齡51.3±17.4歲。患者發(fā)熱時(shí)間為3～19天，平均11.2±5.5天。對(duì)照組24例為非COVID-19的住院患者，并排除免疫功能障礙、惡性腫瘤等患者，男17例，女7例，年齡21～70歲，平均年齡49.2±16.8歲。于2020年2月17～18日收集所有研究對(duì)象的血清、血漿及全血樣本，所有樣本同一批檢測(cè)。其中血清樣本為黃色促凝管采集靜脈血3mL;血漿樣本為紫色EDTA-K₂抗凝管采集靜脈血2mL，分別3000r/min離心15min，全血樣本為紫色EDTA-K₂抗凝管采集靜脈血2mL。同時(shí)收集患者臨床資料。

二、檢測(cè)原理及判讀標(biāo)準(zhǔn)

金標(biāo)法試劑盒為廣州萬(wàn)孚生物技術(shù)公司贈(zèng)送。檢測(cè)原理：采用免疫層析技術(shù)，用捕獲法檢測(cè)樣本中的2019-nCOV總抗體。判讀標(biāo)準(zhǔn)：檢測(cè)區(qū)及質(zhì)控區(qū)各出現(xiàn)一條紅色反應(yīng)線為陽(yáng)性，僅質(zhì)控區(qū)出現(xiàn)紅色反應(yīng)線為陰性。

化學(xué)發(fā)光法試劑盒為深圳市新產(chǎn)業(yè)生物技術(shù)公司贈(zèng)送。檢測(cè)原理：化學(xué)發(fā)光免疫間接法，采用重組抗原包被磁性微球，小分子發(fā)光標(biāo)記物標(biāo)記單克隆抗體，利用底物液?jiǎn)?dòng)化學(xué)發(fā)光反應(yīng)，產(chǎn)生光信號(hào)，通過(guò)相對(duì)光強(qiáng)度計(jì)算待測(cè)抗體濃度。判讀標(biāo)準(zhǔn)：<0.900AU/mL為陰性，≥1.10AU/mL為陽(yáng)性，（0.900～1.10）AU/mL判斷為疑似，其中IgM檢測(cè)范圍為（0.050～30.0）AU/mL，IgG檢測(cè)范圍為（0.020～30.0）AU/mL。

三、檢測(cè)方案

分別采用金標(biāo)法檢測(cè)血清、血漿及全血樣本中2019-nCOV總抗體，采用化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)血清及血漿樣本2019-nCOV IgM及2019-nCOV IgG?！耙伤啤苯Y(jié)果視為陽(yáng)性。

四、統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

金標(biāo)法為定性試驗(yàn)，檢測(cè)結(jié)果為分類(lèi)變量，采用“陰性”或“陽(yáng)性”表示?；瘜W(xué)發(fā)光法為半定量實(shí)驗(yàn)，根據(jù)檢測(cè)數(shù)值判定為“陰性”或“陽(yáng)性”。計(jì)數(shù)資料比較采用卡方（χ²）檢驗(yàn)，統(tǒng)計(jì)學(xué)分析采用SPSS19.0軟件，繪圖軟件采用GraphPad Prism 5.0軟件，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié)??? 果

一、病例組13例COVID-19患者的基本臨床資料，男8例，女5例。其中重癥患者10例，占76.9%。12例患者就診時(shí)有發(fā)熱癥狀（92.3%），咳嗽多見(jiàn)（84.6%）。實(shí)驗(yàn)室檢查常見(jiàn)C反應(yīng)蛋白（69.2%）、D-二聚體升高（61.5%）及淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)減少（53.8%），沒(méi)有一例出現(xiàn)白細(xì)胞總數(shù)降低。所有患者至少一次在咽拭子或痰標(biāo)本中檢出2019-nCOV核酸陽(yáng)性。

二、不同樣本類(lèi)型對(duì)2019-nCOV抗體結(jié)果的影響

采用金標(biāo)法及化學(xué)發(fā)光法對(duì)同一例患者的血清、血漿及全血樣本進(jìn)行2019-nCOV抗體檢測(cè)，2019-nCOV IgM及IgG抗體檢測(cè)，并比較不同類(lèi)型樣本對(duì)檢測(cè)結(jié)果的影響。結(jié)果顯示，金標(biāo)法采用全血樣本檢測(cè)時(shí)，與血清血漿的檢測(cè)結(jié)果有1例不一致（1/37，2.7%），未發(fā)現(xiàn)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（χ²=0.083，P=0.959;χ²=0.078，P=0.962）。兩種方法采用血清與血漿樣本檢測(cè)的結(jié)果完全一致。

三、不同采血時(shí)間COVID-19患者血清中2019-nCOV IgM及IgG含量

以患者發(fā)熱時(shí)間開(kāi)始計(jì)算，觀察不同采血時(shí)間患者血清中2019-nCOV IgM及IgG含量差異。結(jié)果顯示，COVID-19患者發(fā)熱超過(guò)5天后采血，體內(nèi)IgG水平升高明顯，其中有10例患者超過(guò)30AU/mL（76.9%）。13例患者中僅5例為IgM陽(yáng)性（38.5%），其中2例IgM含量超過(guò)15AU/mL均為重癥患者。

目前，《新型冠狀病毒感染的肺炎診療方案（試行第七版）》對(duì)COVID-19的診斷要求增加血清學(xué)診斷：新型冠狀病毒特異性IgM和IgG抗體陽(yáng)性;血清新型冠狀病毒特異性IgG抗體由陰性轉(zhuǎn)為陽(yáng)性或恢復(fù)期較急性期4倍及以上升高。本研究選取較常見(jiàn)的三種抗體檢測(cè)方法，分別為金標(biāo)法、熒光免疫法及化學(xué)發(fā)光法，對(duì)COVID-19患者及對(duì)照組患者的血液樣本進(jìn)行檢測(cè)和比較。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，樣本類(lèi)型幾乎不影響檢驗(yàn)結(jié)果，但由于全血樣本在判讀結(jié)果時(shí)紅細(xì)胞可能造成輕微的干擾，因此金標(biāo)法及熒光法的檢測(cè)建議采用血清或血漿標(biāo)本?；瘜W(xué)發(fā)光法檢測(cè)IgM和IgG只可以采用血清及血漿標(biāo)本，經(jīng)比較二者結(jié)果完全一致，可根據(jù)臨床需求采用其中一種。

本研究中，由于采血時(shí)間較滯后，大部分患者采血時(shí)IgM抗體滴度較低，僅1例重癥患者在病程第17天仍保持較高滴度的IgM（15.08AU/mL），另一例重癥患者處于發(fā)熱第6天采血，IgM含量大于30AU/mL。

綜上，金標(biāo)法、熒光法和化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)血清2019-nCOV抗體均可作為COVID-19的輔助診斷手段，其中化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)IgM和IgG可為恢復(fù)期血漿治療COVID-19提供重要實(shí)驗(yàn)室依據(jù)。然而，由于條件限制，本研究存在一定的不足。本研究?jī)H納入13例病例，應(yīng)在后續(xù)研究中加大樣本量，多個(gè)時(shí)間點(diǎn)采血，進(jìn)一步明確抗體檢測(cè)在COVID-19中的應(yīng)用價(jià)值。

參 考 文 獻(xiàn)

[1]國(guó)家衛(wèi)生健康委.新型冠狀病毒感染的肺炎診療方案（試行第七版）[EB/OL].http：//www.cntcm.com.cn/2020-03/05/content_72030.htm，2020-03-05.

[2]高亭，徐仰玲，何小鵬，等.40例新型冠狀病毒肺炎的流行病學(xué)及臨床特征分析[J].中國(guó)呼吸與危重監(jiān)護(hù)雜志，2020，19（02）：148-153.

[3]王旭東，施健，丁偉峰，等.2019新型冠狀病毒核酸檢測(cè)的研究狀況與應(yīng)用探討[J].臨床檢驗(yàn)雜志，2020，38（02）：81-84.

基金項(xiàng)目：佛山新型冠狀病毒感染的肺炎應(yīng)急攻關(guān)專(zhuān)項(xiàng)（2020001000431）