酶聯(lián)免疫吸附法在食品檢驗(yàn)中的應(yīng)用進(jìn)展

摘 要：在食品安全管理方面，需要采用有效手段進(jìn)行食品檢驗(yàn)?；诖?，本文對(duì)靈敏度高、特異性強(qiáng)和自動(dòng)化程度高的酶聯(lián)免疫吸附法展開了分析，并對(duì)該方法在食品農(nóng)獸藥殘留、微生物和毒素檢驗(yàn)中的應(yīng)用進(jìn)展進(jìn)行了探討，可為關(guān)注這一話題的人們提供參考。

關(guān)鍵詞：酶聯(lián)免疫吸附法;食品檢驗(yàn);微生物;農(nóng)獸藥殘留

伴隨著生活水平的不斷提高，食品安全問題引起了人們的廣泛重視。而在食品檢驗(yàn)方面，采用現(xiàn)代免疫學(xué)理論技術(shù)能夠使食品的檢驗(yàn)水平得到提高，繼而使食品安全得到進(jìn)一步保障。酶聯(lián)免疫吸附法作為具有高效催化作用的免疫分析技術(shù)，具有快速、有效、靈敏度高等特點(diǎn)，在食品檢驗(yàn)方面得到了廣泛應(yīng)用。

1 酶聯(lián)免疫吸附法概述

酶聯(lián)免疫吸附法簡稱ELISA技術(shù)，屬于固相酶免疫分析法，能夠利用抗體分子和抗原分子間的特異性結(jié)合特征實(shí)現(xiàn)物質(zhì)的分離檢測(cè)。在實(shí)施分離時(shí)，在各種游離雜質(zhì)蛋白中只有目的蛋白可以與固相載體結(jié)合在一起，得到特殊標(biāo)記物的標(biāo)記，能夠滿足物質(zhì)定性和定量分析檢測(cè)需求。采取該方法，利用酶對(duì)抗原或抗體進(jìn)行標(biāo)記，酶起到主導(dǎo)作用，酶活性和抗原抗體的特異性不會(huì)受到影響，能夠滿足高精度檢測(cè)要求。在酶結(jié)合物與抗體或抗原結(jié)合后，利用顏色反應(yīng)能夠判斷是否存在免疫反應(yīng)。而顏色深淺與標(biāo)本量成正比，因此能夠?qū)?duì)抗體或抗原的濃度進(jìn)行測(cè)量。

2 酶聯(lián)免疫吸附法在食品檢驗(yàn)中的應(yīng)用

2.1 在農(nóng)獸藥殘留檢測(cè)中的應(yīng)用

應(yīng)用ELISA進(jìn)行農(nóng)藥殘留檢測(cè)時(shí)，可以利用有機(jī)磷、氨基甲酸酯類農(nóng)藥對(duì)乙酰膽堿酶的差異性抑制反應(yīng)完成殘留量檢測(cè)，可以得到準(zhǔn)確的檢測(cè)結(jié)果，并且檢測(cè)方法快速、靈敏，成本較低，目前已經(jīng)完成了標(biāo)準(zhǔn)化試劑盒的制備，可以用于大規(guī)模食品農(nóng)藥殘留檢測(cè)篩選，如有機(jī)氯類、有機(jī)磷、菊酯類等等。在對(duì)蘋果等水果中的膦殘留量進(jìn)行檢測(cè)時(shí)，利用合成的對(duì)硫磷人工抗原實(shí)施檢測(cè)，可以得到準(zhǔn)確的檢測(cè)結(jié)果，并且該方法具有良好的重現(xiàn)性。在食品中獸藥殘留檢測(cè)方面，利用競(jìng)爭性酶免疫分析方法，能夠?qū)?dòng)物源性食品中的氯霉素殘留進(jìn)行檢測(cè)，并且可以達(dá)到國際上的測(cè)定低限100 ng/kg的要求。伴隨著自動(dòng)化ELISA分析儀的發(fā)展，采用ELISA試劑盒可以用于慶大霉素、氯霉素、鏈霉素等多種藥物殘留的檢測(cè)。如采用r-biopharm試劑盒，能夠?qū)εＤ?、肉類等食品中的四環(huán)素、土霉素濃度進(jìn)行檢測(cè)，4 h左右就可以獲得結(jié)果。

2.2 在微生物檢測(cè)中的應(yīng)用

在食品微生物檢測(cè)方面，ELISA已經(jīng)在乳制品檢驗(yàn)方面得到了應(yīng)用，能夠憑借抗原抗體檢測(cè)原理，充分發(fā)揮酶的作用對(duì)食品中的微生物數(shù)量進(jìn)行準(zhǔn)確測(cè)定。作為食品中最常見的致病菌，沙門氏菌目前已經(jīng)可以通過ELISA進(jìn)行快速檢測(cè)，通過制備單克隆抗體，并向微孔板內(nèi)添加待測(cè)樣品，如果存在沙門氏菌，其將與單抗結(jié)合成免疫復(fù)合物。從檢測(cè)效果來看，不僅具有較高的特異性，靈敏性也可以達(dá)到ng、pg水平，因此準(zhǔn)確度較高，重現(xiàn)性好。除了用于沙門氏菌、金黃色葡萄球菌的快速檢驗(yàn)，采用ELISA也能對(duì)大腸桿菌等微生物進(jìn)行快速檢測(cè)。利用該方法對(duì)蛋白胨增菌液中的單核白細(xì)胞增多癥李氏桿菌進(jìn)行檢測(cè)，檢出限可以達(dá)到104 CFU/mL，在不與沙門氏菌等細(xì)菌發(fā)生交叉感染的情況下，可以在18 h內(nèi)得到檢測(cè)結(jié)果。但相較于高相液相色譜法、微生物法等多種檢測(cè)方法， ELISA難以同時(shí)對(duì)食品中的多種微生物進(jìn)行檢測(cè)，并且難以對(duì)特別敏感的菌株進(jìn)行篩選。此外，ELISA對(duì)擁有類似結(jié)構(gòu)的化合物將產(chǎn)生交叉反應(yīng)。

2.3 在食品毒素檢測(cè)中的應(yīng)用

在水產(chǎn)品等食品中，食物自帶毒性，給食品安全帶來了較大威脅。應(yīng)用ELISA進(jìn)行食品毒素檢測(cè)，可以采用間接競(jìng)爭法使待檢測(cè)物與載體蛋白交聯(lián)，得到的包被抗原和免疫原能夠用于檢測(cè)。如采用R-Biopharm試劑盒，能夠利用ELISA技術(shù)實(shí)現(xiàn)貝類毒素的快速檢測(cè)，檢測(cè)限為50 μg/kg，靈敏度可以達(dá)到2.5 μg/kg[1]。食品被污染后，也可能帶有毒性。研究最多的是利用ELISA進(jìn)行黃曲霉毒素檢測(cè)，目前已經(jīng)完成了試劑盒的生產(chǎn)，如利用AFLA酶聯(lián)免疫篩查試劑盒可以對(duì)糧油等食品中的黃曲霉毒素B1進(jìn)行檢測(cè)，并且檢測(cè)結(jié)果與高效液相色譜法相差甚微。此外，ELISA也可以用于各種食品添加劑等物質(zhì)的檢測(cè)，如利用單抗對(duì)蘇丹紅1號(hào)進(jìn)行直接競(jìng)爭檢測(cè)，檢出限在0.05～0.17 ng/mL。而食品中雙酚類物質(zhì)對(duì)免疫系統(tǒng)、遺傳物質(zhì)等有明顯毒性，采用ELISA進(jìn)行檢測(cè)可以利用包被抗原模式，使雙酚類物質(zhì)與蛋白質(zhì)結(jié)合成完整抗原，促使檢測(cè)靈敏度得到有效提高，檢出限達(dá)到0.27 ng/mL，回收率為70%～142%[2]。

3 結(jié)論

綜上所述，在食品農(nóng)獸藥殘留、微生物和毒素檢驗(yàn)等方面，ELISA都可以得到高效運(yùn)用，在擴(kuò)大物質(zhì)檢測(cè)范圍的同時(shí)，使檢測(cè)的準(zhǔn)確性和穩(wěn)定性得到提高。但ELISA依然存在對(duì)試劑選擇性高、難以同時(shí)分析多種成分等缺陷，相信未來通過與色譜技術(shù)、質(zhì)譜技術(shù)等先進(jìn)技術(shù)的結(jié)合，ELISA能夠成為重要的食品檢驗(yàn)技術(shù)手段，繼而使食品安全問題得到有效解決。

參考文獻(xiàn)

[1]張晟.食品微生物檢驗(yàn)技術(shù)現(xiàn)狀及發(fā)展趨勢(shì)[J].食品安全導(dǎo)刊，2019（33）：34.

[2]張雨佳，凌云，張?jiān)?，?食品及環(huán)境樣品中雙酚類物質(zhì)的前處理及檢測(cè)方法研究進(jìn)展[J].色譜，2019，37（12）：1268-1274.

作者簡介：張?。?984—），女，漢族，內(nèi)蒙古呼倫貝爾人，碩士，獸醫(yī)師。研究方向：食品的微生物學(xué)檢驗(yàn)。