高效液相色譜法測(cè)定食品中的非食用色素

劉文靖 宋華靜

摘 要：目的：本文采用高效液相色譜法對(duì)豆制品中的酸性橙Ⅱ、堿性橙2及堿性嫩黃0殘留同時(shí)展開(kāi)測(cè)定。方法：經(jīng)預(yù)處理、凈化及萃取后的樣品，采用高效液相色譜法進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果：經(jīng)檢測(cè)之后，得到酸性橙Ⅱ、堿性橙2和堿性嫩黃O的檢出限分別為0.01、0.02、0.01 mg/kg，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差平均3.53%。結(jié)論：該方法檢測(cè)速度快、準(zhǔn)確率高，可用于食品中非食用色素的快速檢測(cè)。

關(guān)鍵詞：高效液相色譜法;食品;非食用色素;檢測(cè)

目前，個(gè)別生產(chǎn)商為降低成本、保障食品外觀誘人、色澤穩(wěn)定，在生產(chǎn)食品時(shí)會(huì)違法添加非食用色素，此類(lèi)非食用色素對(duì)人體存在潛在危害。因此，有必要建立一種可同時(shí)檢測(cè)食品中多種非食用色素的方法。而高效液相色譜法在食品中非食用色素的測(cè)定中應(yīng)用最廣泛。采用該方法時(shí)，樣品通過(guò)預(yù)處理、凈化及萃取后，可直接快速檢測(cè)，操作簡(jiǎn)便且準(zhǔn)確度高，應(yīng)用價(jià)值豐厚。

1 實(shí)驗(yàn)方法

1.1 儀器與試劑

1260TG-16WS色譜儀，DAD檢測(cè)器;固相萃取裝置;KQ-500DE型數(shù)控超聲波清洗器。去離子水;甲醇、乙酸銨（均為色譜純）;酸性橙Ⅱ、堿性橙2和堿性嫩黃O標(biāo)準(zhǔn)品。Symmetry RC色譜柱，色譜柱溫度40 ℃，檢測(cè)波長(zhǎng)500 nm。流動(dòng)相A乙酸銨和四乙基溴化銨溶液，流動(dòng)相B為甲醇采用梯度洗脫的方法。樣品為市售豆制品。

1.2 樣品預(yù)處理

燒杯內(nèi)放置精密稱(chēng)取一定量粉碎均勻的豆制品樣品，加入提取液20 mL，至于超聲波下提取20 min后過(guò)濾，濾渣中加入提取液20 mL，反復(fù)多次后合并濾液，濃縮至10 mL，將pH調(diào)整為6，完成樣品溶液的制備[1]。固相萃取柱依次采用甲醇、酸化甲醇溶液預(yù)淋洗，控制流速在5 mL/min，柱內(nèi)液體高度控制在0.5 cm以上，待樣品溶液加入之后流速控制在6 mL/min。以1∶1的比例加入丙酮和正己烷混合溶液5 mL，依次采用丙酮溶液、甲醇溶液各5 mL、3 mL洗滌萃取柱，隨后用5 mL洗脫液（50 mL，1 mol/L的NaOH與500 mL甲醇配制）洗脫萃取柱，收集淋洗液，加水濃縮定容至2 mL，過(guò)濾，待測(cè)。

2 結(jié)果

2.1 色譜柱的選擇

對(duì)比50 mm和100 mm的色譜柱對(duì)分離非食品色素的影響，得知兩款色譜柱皆可分離分析物，但100 mm色譜柱分析時(shí)間較長(zhǎng)，因此本試驗(yàn)選用的色譜分析柱為50 mm的色譜柱。

2.2 流速選擇

該試驗(yàn)中，流速分別設(shè)置為0.2、0.3、0.5 mL/min與0.6 mL/min，對(duì)色素分離中不同流速的影響進(jìn)行觀察，得知0.2 mL/min時(shí)，分析時(shí)間較長(zhǎng)，且分析效果不佳;超出0.5 mL/min時(shí)，分離不完全，故而本試驗(yàn)將流速設(shè)置為0.3 mL/min。

2.3 洗脫溶劑和洗脫體積優(yōu)化

本試驗(yàn)中選擇的洗脫溶劑有2種，通過(guò)對(duì)其洗脫效果的對(duì)比分析，得知?dú)溲趸c-甲醇、氨水-甲醇兩種洗脫溶劑中，前者回收率較高，洗脫時(shí)控制在5 mL的用量，能夠完全洗脫色素，故而本次試驗(yàn)中使用的洗脫溶劑及體積為氫氧化鈉-甲醇溶液5 mL。

2.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)和檢出限

配制0.1～20 g/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液，進(jìn)樣測(cè)定，對(duì)峰面積（y）與質(zhì)量濃度（x，g/mL）作圖，即可獲取酸性橙Ⅱ、堿性橙2和堿性嫩黃O的線(xiàn)性方程，3者的線(xiàn)性方程分別為y=26 576x+653.19，R2=0.999 7;y=42 361x+538.92，R2=0.999 7;y=51 301x-2 851，R2=0.999 7。確定信噪比S/N為3，并以其對(duì)應(yīng)的目標(biāo)物濃度進(jìn)行檢出限的測(cè)定，酸性橙Ⅱ、堿性橙2和堿性嫩黃O的檢出限分別為0.01、0.02、0.01 mg/kg[2]。

2.5 回收率和精密度試驗(yàn)

取樣品作標(biāo)準(zhǔn)添加試驗(yàn)，平行6次，表1顯示了試驗(yàn)結(jié)果。

2.6 實(shí)際樣品分析

采用該方法檢測(cè)豆制品中非食用色素，未檢出非食用色素。本方法簡(jiǎn)便快捷，檢測(cè)效率高，實(shí)用性強(qiáng)。

3 討論

采用高效液相色譜法對(duì)食品中酸性橙Ⅱ、堿性橙2和堿性嫩黃O 3種非食用色素進(jìn)行檢測(cè)，操作簡(jiǎn)便、靈敏度高，且獲取結(jié)果具備可靠性、準(zhǔn)確性，可在短時(shí)間內(nèi)定性、定量分析食品中的非食用色素含量，在檢測(cè)食品樣品中色素時(shí)值得推廣應(yīng)用。

參考文獻(xiàn)

[1]韓晶.高效液相色譜法檢測(cè)食品中常見(jiàn)非食用色素[J].食品安全導(dǎo)刊，2018（27）：100.

[2]鄒孝，鄒春艷，馬麗，等.食品中違禁添加的非食用色素檢測(cè)技術(shù)進(jìn)展[J].科技與創(chuàng)新，2016（9）：101-102.