承德地區(qū)蜂蜜檢測及前處理方法研究

牛春鈴?龐婕

摘 要：本文對承德地區(qū)市售不同品種蜂蜜是否含有農(nóng)藥殘留進行了分析，檢測對象包括有機磷類有機氯類擬除蟲菊酯類等48種農(nóng)藥殘留，建立了蜂蜜的前處理技術(shù)，以及氣相色譜ECD檢測器和FPD檢測器檢測方法。分析結(jié)果表明，在蜂蜜試樣中加入一定體積的甲醇可有效降低蜂蜜粘稠度，用醋酸乙腈作為提取劑，用QuEChERS前處理試劑盒的鹽包和凈化管可以有效降低蜂蜜中糖類和有機酸類，用所建蜂蜜農(nóng)藥殘留的前處理和氣相色譜檢測方法，對承德地區(qū)市售蜂蜜中農(nóng)藥殘留進行分析檢測，發(fā)現(xiàn)農(nóng)藥殘留檢出率為6%，分別為α-六六六、七氯、氯氰菊酯和百菌清，但濃度遠低于其他食品所規(guī)定的農(nóng)藥最大殘留限量值。

關(guān)鍵詞：蜂蜜;農(nóng)藥殘留;QuEChERS法

承德地處燕山腳下，山場廣闊，養(yǎng)蜂業(yè)繁榮，蜂蜜產(chǎn)量豐厚，有荊條蜜、洋槐蜜、棗花蜜、椴樹蜜與桂花蜜等種類。蜂蜜作為藥食同源的健康食品之一，千百年來被人們所鐘愛，但是近年來農(nóng)藥殘留問題日益突出，蜂蜜是否含有眾口不一，網(wǎng)上有關(guān)蜂蜜的信息比比皆是，人們心有惶恐，因此蜂蜜中是否含有是人們一大關(guān)注點。有蜂農(nóng)指出，蜜蜂不會選擇有農(nóng)藥殘留的花朵采蜜，這會造成蜜蜂大量死亡;但有大量研究表明，在隨機抽取的蜂蜜中，75%～80%都有檢測出[1]，主要為有機磷類、有機氯類和菊酯類。因此，明確蜂蜜中農(nóng)藥殘留成分及含量，還原蜂蜜真實面貌是又必要的。

1 實驗部分

1.1 樣品、試劑、儀器

樣品：承德地區(qū)超市和蜂農(nóng)自采散蜂蜜，有荊條蜜、洋槐蜜、棗花蜜、椴樹蜜、桂花蜜。

試劑：乙腈、正己烷、丙酮、乙酸乙酯，為色譜純。有機氯和菊酯類標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)：六六六滴滴涕8種，七氯，艾氏劑，異菌脲，氟氯氰菊，氟胺氰菊，五氯硝基苯，胺菊酯，氰戊菊酯，氯菊酯，溴氰菊酯，乙烯菌核利，百菌清，狄氏劑，異狄氏劑，腐霉利，丁草胺，甲氰菊酯，氰戊菊酯以及氯氰菊酯;有機磷類標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)：敵敵畏，百治磷，乙拌磷，甲基對硫磷，樂果，三唑磷，亞胺硫磷，敵百蟲，滅線磷，甲拌磷，吡菌磷，對硫磷，殺蟲畏，蠅毒磷，馬拉硫磷，速滅磷，硫環(huán)磷與保棉磷;均購自北京壇墨質(zhì)檢科技有限公司質(zhì)量濃度為100 μg/mL。

儀器：島津氣相色譜儀配有ECD檢測器、安捷倫氣相色譜儀配有FPD檢測器、QuEChERS前處理試劑盒。

1.2 提取和凈化

稱取2.00 g蜂蜜試樣于50 mL離心管中，加入2.0 mL甲醇，加入10.0 mL

1%醋酸乙腈，超聲提取20 min，渦旋勻漿1 min，加入QuEChERS前處理試劑盒中萃取鹽包，渦旋3 min，6 000 r/min離心5 min，將上清液轉(zhuǎn)移至QuEChERS前處理試劑盒凈化管，吸取上清液過0.22 μm膜，放入進樣瓶中。

2 結(jié)果與分析

2.1 前處理方法的優(yōu)化

因蜂蜜中含有豐富的糖類和有機酸，很粘稠，不利于分析物的提取和分離，在蜂蜜中加入一定量的甲醇，可有效降低蜂蜜的粘稠度，后續(xù)實驗在QuEChERS法的基礎(chǔ)上進行了調(diào)整，使其更適用于蜂蜜的前處理。

提取：本實驗分別對比了正己烷、乙腈、丙酮、乙酸乙酯四種有機溶劑，結(jié)果表明，正己烷、乙酸乙酯、乙腈均可有效提取蜂蜜中農(nóng)藥殘留，回收率達到50%-120%，丙酮極性比較強，與水互溶，但容易存留雜質(zhì)，純度不夠，基線不穩(wěn)。正己烷/乙酸乙酯可實現(xiàn)有機相和水相分離，但操作相對繁瑣;乙腈酸化后可有效分離水相與有機相。與正己烷/乙酸乙酯比較，乙腈提取的脂肪和脂溶性色素相對較少;與正己烷相比，乙腈與極性較小的溶劑不互溶，這樣比較容易去除非極性雜質(zhì)，農(nóng)藥殘留回收率在70%～110%。因此在本實驗中，采用酸化后的乙腈溶劑進行農(nóng)藥提取[2]。

凈化：選用QuEChERS前處理試劑盒進行操作，QuEChERS中起凈化功能的是PSA，PSA為弱離子交換的固相萃取材料，用來去除色素、有機酸及一些糖類和脂肪酸，因蜂蜜中含有豐富的糖類和有機酸，所以本實驗選用QuEChERS法進行樣品凈化，能有效降低樣品中雜質(zhì)的干擾。

2.2 儀器條件的優(yōu)化

優(yōu)化后的色譜分離條件：安捷倫氣相色譜儀，色譜柱HP-1，30 mm×0.32 mm×0.25μm;柱流量1.0 mL·min-1恒流;進樣口溫度240 ℃;檢測器ECD，溫度250 ℃;尾吹30 mL·min-1;進樣量1 μL，分流比10∶1;程序升溫155 ℃保持2 min，4 ℃/min升至260 ℃保持15 min。島津氣相色譜儀，色譜柱DB-17，30 mm×0.32 mm×0.25 μm;柱流量1.0 mL·min-1恒流;進樣口溫度250 ℃;檢測器FPD，溫度280 ℃;尾吹30 mL·min-1;進樣量1 μL不分流;程序升溫150 ℃保持2 min，8 ℃/min升至190℃保持5 min，5 ℃/min升至250 ℃保持8 min。

本實驗分別對載氣流速、進樣口溫度、升溫程序、檢測器溫度進行優(yōu)化。分析結(jié)果表明，優(yōu)化升溫程序后所測農(nóng)藥組分能夠有效分離，將48種農(nóng)殘分為3組進行檢測，結(jié)果如圖1～3所示，分離效果良好，菊酯類農(nóng)藥殘留容易降解，在譜圖上農(nóng)藥殘留有2個或3個峰，但相關(guān)系數(shù)都高于0.990。溫度過高會使農(nóng)藥組分分解，溫度過低氣化不完全。有機氯類和菊酯類農(nóng)藥殘留[3-4]選用ECD檢測器，溫度為250℃，進樣口溫度為240℃（該檢測分為兩組，第一組農(nóng)藥殘留有α-六六六，β-六六六，δ-六六六，七氯，艾氏劑，O，P-DDE，P，P-DDE，P，P-DDT，異菌脲，氟氯氰菊，氟胺氰菊，五氯硝基苯，胺菊酯，氰戊菊酯，氯菊酯，溴氰菊酯;第二組農(nóng)藥殘留有氯硝胺，γ-六六六，乙烯菌核利，百菌清，P，P-DDD，狄氏劑，異狄氏劑，腐霉利，丁草胺，甲氰菊酯，氰戊菊酯，氯氰菊酯）;有機磷類[5-6]農(nóng)藥殘留選用FPD檢測器，溫度為280℃，進樣口溫度為250℃，柱流速以1mL·min-1為宜，模式為恒流模式（所檢農(nóng)藥殘留有敵敵畏，百治磷，乙拌磷，甲基對硫磷，樂果，三唑磷，亞胺硫磷，敵百蟲，滅線磷，甲拌磷，吡菌磷，對硫磷，殺蟲畏，蠅毒磷，馬拉硫磷，速滅磷，硫環(huán)磷，保棉磷）。用優(yōu)化后的色譜條件對蜂蜜中48農(nóng)藥殘留進行檢測試驗，回收率在78%-110%。

2.3 方法的準(zhǔn)確度和精密度

在空白蜂蜜樣品中分別添加3組農(nóng)藥混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，添加水平為0.010、0.050、0.150 mg/kg，每個添加水平重復(fù)測定6次，按1.2的前處理步驟和檢測方法進行回收率試驗。結(jié)果表明：48種農(nóng)藥的平均回收率為78%-110%，RSD≤12%，準(zhǔn)確度和精密度均達到農(nóng)藥殘留分析的要求。

2.4 方法的線性范圍和檢出限

在本方法的基礎(chǔ)上，樣品濃度在10～500 ng/mL時，線性良好，回歸曲線的相關(guān)系數(shù)（R2）均優(yōu)于0.990。以信噪比（S/N）約為3時的空白樣品添加濃度為方法檢出限（LOD），LOD范圍為0.000 1～0.010 mg/kg，符合國內(nèi)相關(guān)殘留量要求。

2.5 實際樣品檢測

用所建方法對承德地區(qū)市售5種蜂蜜：洋槐蜜、荊條蜜、棗花蜜、椴樹蜜、桂花蜜，每種蜂蜜10例共50例進行檢測，檢出率為6%，有3種蜂蜜檢出農(nóng)藥殘留，其中洋槐蜜檢出α-六六六濃度為0.000 5 mg/kg和七氯濃度為0.000 8 mg/kg、棗花蜜檢出α-六六六濃度為0.000 4 mg/kg和氯氰菊酯濃度為0.006 mg/kg、桂花蜜檢出百菌清濃度為0.000 5 mg/kg，結(jié)合國家標(biāo)準(zhǔn)GB 2763-2016食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品中農(nóng)藥最大殘留限量，濃度接近檢出限，遠低于其他食品所規(guī)定的農(nóng)藥最大殘留限量值。

3 結(jié)論

本文對QuEChERS方法進行了改進，使其更適用于粘稠度較大的蜂蜜樣品，結(jié)合氣相色譜ECD檢測器和FPD檢測器對承德地區(qū)不同種類蜂蜜中有機磷類、有機氯類和菊酯類48種農(nóng)藥殘留進行定性定量分析。試驗結(jié)果表明，試樣中添加甲醇可有效降低蜂蜜粘稠度，QuEChERS凈化包可有效去除蜂蜜中糖類和有機酸，降低雜質(zhì)干擾，通過回收率和重復(fù)性驗證，準(zhǔn)確度和精密度均達到了分析要求。承德地區(qū)所產(chǎn)蜂蜜中農(nóng)藥殘留檢出率為6%，分別檢出α-六六六、七氯、氯氰菊酯和百菌清，結(jié)合國家標(biāo)準(zhǔn)發(fā)現(xiàn)濃度殘留量遠低于其他食品所規(guī)定的農(nóng)藥最大殘留限量值。

參考文獻

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