氧化性漂白劑對(duì)大鼠氟斑牙的脫色研究

林丹樂(lè) 任麗娜 邱震 瞿亞寧 李陸義 劉斌

氟斑牙是牙體發(fā)育過(guò)程中由于氟的攝入過(guò)多而導(dǎo)致的牙釉質(zhì)發(fā)育不全[1-2]。我國(guó)多個(gè)地區(qū)是氟牙癥高發(fā)地區(qū)，氟斑牙患者數(shù)量龐大[3-4]。氟斑牙牙體顏色有明顯的變化，牙齒美白是氟斑牙患者的選擇之一。目前臨床常用的藍(lán)光催化漂白方法具有一定的局限性，漂白劑刺激性大可造成氧化損傷[5]，嚴(yán)重者可影響進(jìn)食，對(duì)人眼有可能造成不可逆的傷害[6-7]；本研究通過(guò)大鼠氟斑牙，研究采用不同漂白劑(過(guò)氧化氫、二氧化氯、過(guò)氧化氫+過(guò)氧化物酶、過(guò)氧化氫+氯化鈣)進(jìn)行氟斑牙脫色漂白時(shí)，對(duì)牙釉質(zhì)顏色、硬度、表面結(jié)構(gòu)等的影響，為進(jìn)一步探索更加安全和低刺激的牙齒脫色美白方法提供更多的理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

清潔級(jí)SD大鼠4 只(蘭州獸醫(yī)研究所實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心)。 3 只為孕期大鼠， 1 只為3 周齡大鼠。

1.2 主要儀器與材料

SEM(Zeiss,GeminiSEM 300, 德國(guó))； 數(shù)顯顯微維氏硬度計(jì)(HVS-1000ZY, 上海弘測(cè)儀器科技有限公司)； 智能磁力攪拌器(ZNCL-GS, 愛(ài)博特科技發(fā)展有限公司， 鄭州)； Vita 比色板(Vitapan, classical, 德國(guó))； 150 mg/L NaF(天津大茂化學(xué)試劑廠(chǎng)); ClO2(鄭州華興化工有限公司); 辣根過(guò)氧化物酶(上海Sigma-Aldrich)； CaCl2、 30% H2O2溶液(上海阿拉丁生化科技股份有限公司)。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 大鼠氟斑牙模型建立 4 只大鼠分籠飼養(yǎng)。配制150 mg/L NaF水作為3 只孕期大鼠飲用水， 3 周齡大鼠飲用純凈水， 4 組均自由飲水?dāng)z食。飼養(yǎng)期間，孕期大鼠產(chǎn)下乳鼠24 只，按照上述方法繼續(xù)飼養(yǎng)大鼠42 d后經(jīng)腹腔注射處死，拔取下頜中切牙，并挑選出其中的完整的氟斑牙共41 顆，正常牙共2 顆。

1.3.2 漂白前比色 將氟斑牙置于生理鹽水中，超聲清洗20 min，自然干燥，用Vita比色板，在相同自然光條件下，肉眼比較每顆牙齒與Vita比色板中的顏色飽和度，根據(jù)顏色分為D2(16 顆)、D3(20 顆)、D4(5 顆)3 組，正常大鼠牙為A1色，每組再分為牙齒數(shù)量盡量相等的4 個(gè)漂白組(30% H2O2組、 1% ClO2組、1% H2O2+1% CaCl2組、1% H2O2+50 U/ml辣根過(guò)氧化物酶組)，每組10～11 顆。

1.3.3 氟斑牙漂白 將上述各組分別置入離心管并標(biāo)記，共12 只離心管。將30% H2O2、1% ClO2、1% H2O2+1% CaCl2、1% H2O2+50 U/ml辣根過(guò)氧化物酶4 組溶液按牙齒數(shù)量比例分別分為3組，按標(biāo)記加入上述12 只離心管中。離心管37 ℃油浴，每24 h更新漂白液，共漂白7 d。因臨床中常用的漂白劑為30% H2O2，故本實(shí)驗(yàn)以30% H2O2組為臨床對(duì)照組。

1.4 檢測(cè)方法

1.4.1 顏色 在氟斑牙漂白前后，在相同自然光條件下，由同一位實(shí)驗(yàn)者按照牙齒比色要求快速比較牙齒唇面釉質(zhì)在VITA比色板中最接近的數(shù)值，并記錄飽和度，計(jì)算漂白前后的Δ飽和度差值。

1.4.2 SEM觀(guān)察 自凝塑料包埋D2組氟斑牙，每個(gè)漂白組各1 顆，顯露唇面，依次用800 目、1 000 目、1 500 目、2 000 目碳化硅砂紙打磨至牙面呈鏡面，流水清潔，用0.3% HNO3溶液酸蝕30 s。待自然干燥后用導(dǎo)電膠固定于標(biāo)本臺(tái)上，抽真空并鍍金，SEM(EHT=15.00 kV)觀(guān)察，選取有代表性的釉質(zhì)區(qū)域拍照。

1.4.3 顯微硬度測(cè)定 自凝塑料包埋D3組氟斑牙，每個(gè)漂白組各5 顆，顯露唇面，依次用800 目、1 000 目、1 500 目、2 000 目碳化硅砂紙打磨至牙面呈鏡面，流水清潔，待自然干燥后，設(shè)置硬度計(jì)載荷50 N，載時(shí)5 s，測(cè)量菱形壓痕2 條對(duì)角線(xiàn)長(zhǎng)度，儀器自動(dòng)換算得出硬度數(shù)值； 每顆牙表面測(cè)試3 個(gè)點(diǎn)。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

使用SPSS 24軟件，對(duì)漂白前后氟斑牙顏色飽和度的變化、空白對(duì)照組漂白后的氟斑牙顏色飽和度分別與各實(shí)驗(yàn)組漂白后的氟斑牙顏色飽和度、各組漂白后顯微硬度進(jìn)行獨(dú)立樣本統(tǒng)計(jì)分析檢驗(yàn)。

2 結(jié) 果

2.1 不同漂白劑對(duì)大鼠氟斑牙的氧化脫色效應(yīng)

采用不同漂白劑對(duì)大鼠氟斑牙脫色美白過(guò)程中發(fā)現(xiàn)(表 1)， 30% H2O2和1% H2O2+1% CaCl2組處理在漂白前后具有P<0.05的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，1% ClO2組和1% H2O2+50 U/ml辣根過(guò)氧化物酶組的漂白前后具有P<0.01的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。 1% ClO2組處理的漂白效果更為明顯，其次為1% H2O2+50 U/ml辣根過(guò)氧化物酶組和30% H2O2組，漂白效果較不明顯的是1% H2O2+1% CaCl2處理組。

漂白過(guò)程中的硬度變化如表 2。 以30% H2O2處理組為臨床對(duì)照，1% ClO2組漂白后與臨床對(duì)照組具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.01)， 而1% H2O2+1% CaCl2組處理漂白和臨床對(duì)照組也具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.01)，但1% H2O2+50 U/ml辣根過(guò)氧化物酶組無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。

表 1 不同漂白劑對(duì)大鼠氟斑牙漂白前后顏色飽和度變化

表 2 不同漂白劑對(duì)大鼠氟斑牙漂白前后釉質(zhì)硬度值變化

2.2 不同漂白劑對(duì)大鼠氟斑牙表面結(jié)構(gòu)的影響

掃描電子顯微鏡圖顯示漂白時(shí)氟斑牙代表性區(qū)域的表面結(jié)構(gòu)如圖 1。可見(jiàn)1% H2O2+50 U/ml辣根過(guò)氧化物酶(圖1A)、 30% H2O2(圖 1B)、 1% H2O2+1% CaCl2(圖 1D)處理漂白后，牙的釉質(zhì)表面結(jié)構(gòu)仍比較規(guī)則，形態(tài)良好，可見(jiàn)規(guī)律性排列的釉柱截面；而1% ClO2組(圖 1C)釉柱結(jié)構(gòu)則有明顯的破壞，在圖上已不顯示典型的魚(yú)鱗狀表面結(jié)構(gòu)。

3 討 論

通過(guò)比較不同漂白劑(30% H2O2、 1% ClO2、 1%

圖1 不同漂白劑對(duì)大鼠氟斑牙漂白后牙表面結(jié)構(gòu)代表性區(qū)域的掃描電子顯微鏡圖 (A、 B： ×1 000； C： ×700； D： ×500)

Fig 1 Electron micrograph of typical regions of surface structure of fluorotic teeth in rats after of whitening with different bleaching agents (A、 B： ×1 000； C： ×700； D： ×500)

H2O2+1% CaCl2、 1% H2O2+50 U/ml辣根過(guò)氧化物酶)對(duì)大鼠氟斑牙漂白的結(jié)果顯示，二氧化氯漂白有更為明顯的漂白效果，通過(guò)SEM觀(guān)察發(fā)現(xiàn)，其對(duì)大鼠牙釉質(zhì)表面結(jié)構(gòu)有較明顯的損傷。二氧化氯是目前認(rèn)可的安全漂白劑[8-10]，本研究結(jié)果表明四種不同漂白劑中漂白效果最明顯，因此，進(jìn)一步優(yōu)化二氧化氯對(duì)氟斑牙的最佳漂白濃度及其過(guò)程控制仍將是有意義的，二氧化氯的漂白濃度有可能可以適當(dāng)降低(<1%)。

過(guò)氧化氫對(duì)牙齒漂白有較好的效果[11]，目前在臨床上常用藍(lán)光催化過(guò)氧化氫對(duì)氟斑牙進(jìn)行漂白反應(yīng)，但藍(lán)光的缺點(diǎn)是會(huì)對(duì)人眼造成不可逆的損傷，且成本較高[6-7]。實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)通過(guò)添加少量鈣離子于過(guò)氧化氫漂白處理中，可減少對(duì)牙體硬度的損傷，這樣可以?xún)?yōu)化漂白效果。此外，添加50 U/ml辣根過(guò)氧化物酶于過(guò)氧化氫溶液的漂白處理中也取得了較好的效果。由于辣根過(guò)氧化物酶被廣泛應(yīng)用于醫(yī)學(xué)診斷研究，可催化氧化還原反應(yīng)，反應(yīng)條件溫和，在人體溫37 ℃下即可發(fā)揮良好的催化性能，而本研究中，采用低濃度的過(guò)氧化氫在添加了過(guò)氧化物酶后達(dá)到的漂白效果優(yōu)于高濃度的過(guò)氧化氫，其對(duì)釉質(zhì)表面結(jié)構(gòu)與牙體硬度的改變也與高濃度過(guò)氧化氫相當(dāng)，因此，將來(lái)在臨床上有可能進(jìn)一步以過(guò)氧化物酶替代藍(lán)光，用于氟斑牙的美白，以進(jìn)一步保護(hù)患者和醫(yī)生健康。

本研究采用1% H2O2+1% CaCl2的實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，添加氯化鈣的漂白劑對(duì)牙齒硬度的影響較小，可能是由于氟斑牙在形成過(guò)程中釉質(zhì)鈣離子明顯減少，在低濃度過(guò)氧化氫中添加氯化鈣時(shí)，鈣離子可能對(duì)氟斑牙漂白時(shí)有一定的置換作用，減少氟斑牙漂白時(shí)鈣的流失。本實(shí)驗(yàn)中其漂白效果還不是非常明顯，還需進(jìn)一步探索其漂白的合適濃度及其控制過(guò)程。