亞洲人群干擾素調(diào)節(jié)因子6基因多態(tài)性與非綜合征型唇腭裂相關(guān)性研究的Meta分析

侯亞麗 馬利

山東大學(xué)附屬省立醫(yī)院口腔頜面外科 濟(jì)南 250021

非綜合征型唇腭裂（non-syndromic cleft lip with or without cleft palate）是最常見的先天性畸形之一，發(fā)病率因地理來源和種族的不同而不同，發(fā)病率為1/1000～1/500[1]。非綜合征型唇腭裂的病因復(fù)雜，既涉及遺傳影響，又涉及不同的環(huán)境相互作用。

近年來的研究[2-3]表明，在多個群體中非綜合征型唇腭裂與基因位點(diǎn)有關(guān)，其中最有效的基因是編碼干擾素調(diào)節(jié)因子（interferon regulatory factor，IRF）6的基因。IRF6位于1q32.3-q41，在顱面發(fā)育過程中起重要作用。2個單核苷酸多態(tài)性（single nucleotide polymorphism，SNP）位點(diǎn)（rs2235371和rs642961）與非綜合征型唇腭裂顯著相關(guān)[4]。在亞洲和南美人群中的唇腭裂病例-親本三系中，有明顯的G等位基因在IRF6 820G→A標(biāo)記（rs2235371）上過度傳遞的證據(jù)[5-6]。該變異體在IRF6的蛋白質(zhì)結(jié)合結(jié)構(gòu)域（Smad-IRF結(jié)合結(jié)構(gòu)域，Smir）的第274位氨基酸上由纈氨酸（valine，Val，V）改變?yōu)楫惲涟彼幔╥soleucine，Ile，I），即V274I[7-8]。先前的研究發(fā)現(xiàn)，rs642961破壞了AP-2α結(jié)合位點(diǎn)，該位點(diǎn)通常作為IRF6的增強(qiáng)劑，并且能夠在所調(diào)查的不同樣本中證明rs642961與裂隙類型之間存在高度顯著的關(guān)聯(lián)。A等位基因僅與唇裂有關(guān)，而與非綜合征型腭裂無關(guān)[4,9]。雖然已經(jīng)有很多學(xué)者試圖尋找該基因與非綜合征型唇腭裂的相關(guān)性，但這種單核苷酸多態(tài)性的生物學(xué)機(jī)制尚不清楚。因此，為了探討rs2235371和rs642961多態(tài)性與非綜合征型唇腭裂在亞洲人群中的相關(guān)性，筆者對相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行了Meta分析。

1 材料和方法

1.1 檢索策略

檢索了Embase、PubMed、Cochrane、知網(wǎng)和萬方數(shù)據(jù)庫。檢索式為：（irf6、irf-6、interferon regulatory factor 6或者interferon regulation factor-6）+（polymorphism、gene、allele或者SNP）+（NSCL/P、cleft lip、CL、cleft palate、CP、CPO或者“non-syndromic cleft”）。只包括以英文或中文發(fā)表的研究。最后一次搜索于2019年4月20日更新。

1.2 納入和排除標(biāo)準(zhǔn)

2位評審者通過查閱所有研究的標(biāo)題和摘要，獨(dú)立地選擇研究。

納入標(biāo)準(zhǔn)：1）亞洲人群中非綜合征型唇腭裂病例對照研究；2）IRF6基因多態(tài)性；3）已有足夠資料；4）已發(fā)表英文和中文研究；5）對照組基因型分布應(yīng)符合Hardy-Weinberg平衡；6）基因型分布符合Hardy-Weinberg平衡。

排除標(biāo)準(zhǔn)：1）基因型頻率無詳細(xì)資料；2）以家庭為基礎(chǔ)的研究。

1.3 數(shù)據(jù)提取

2位評審者根據(jù)納入和排除標(biāo)準(zhǔn)提取了已確定研究的數(shù)據(jù)。提取過程中的分歧通過討論解決。提取的數(shù)據(jù)包括第一作者、參與者的種族、地區(qū)、出版年份、病例和對照的數(shù)量以及病例和對照的基因型數(shù)量。

1.4 統(tǒng)計分析

計算比值比（odds ratio，OR）及其95%置信區(qū)間（confidence interval，CI），以評估IRF6基因多態(tài)性與非綜合征型唇腭裂風(fēng)險的關(guān)系。采用按基因型的方法評估非綜合征型唇腭裂的變異效應(yīng)。用Z檢驗估計合并OR的統(tǒng)計學(xué)意義。異質(zhì)性評價采用Cochrane's q檢驗和I2統(tǒng)計量。當(dāng)存在異質(zhì)性（P＜0.10或I2＞50%）時，采用Der Simonia &Laird隨機(jī)效應(yīng)模型對OR進(jìn)行合并，否則采用固定效應(yīng)模型。敏感性分析也被用來評估單項研究對總體估計的影響。出版偏差評估采用Egger試驗和漏斗圖。使用Stata12.0（Stata公司，美國）進(jìn)行分析。P＜0.05被認(rèn)為有統(tǒng)計學(xué)意義，但異質(zhì)性測試除外，使用P＜0.10的水平。

2 結(jié)果

2.1 納入研究

根據(jù)檢索式，篩選出了符合研究條件的23項研究。在回顧全文之后，排除了5項研究，其中1項研究是基于家庭的研究，2項研究集中在其他多態(tài)性上，2項研究沒有足夠的基因型數(shù)據(jù)。因此，本研究共選取18項研究進(jìn)行Meta分析。在這些研究中，對13項研究[6-18]進(jìn)行了rs2235371的Meta分析，對7項研究[4,9,14,19-22]進(jìn)行了rs642961的Meta分析。所有研究均為病例對照設(shè)計。表1列出了符合條件的研究的特點(diǎn)。

表2匯總了IRF6 rs2235371與非綜合征型唇腭裂風(fēng)險之間關(guān)聯(lián)性的Meta分析的結(jié)果。IRF6 rs2235371與唇腭裂風(fēng)險在雜合子比較中有顯著性差異（GA與GG：OR1=0.77，95% CI=0.73～0.81，P=0.859，I2=0；AA與GG：OR2=0.53，95%CI=0.41～0.70，P=0.012，I2=53.0%；GA+AA與GG：OR3=0.77，95% CI=0.72～0.81，P=0.858，I2=0）。在雜合子比較模型（GA與GG、AA與GG、GA+AA與GG）下，IRF6 rs2235371與唇腭裂風(fēng)險關(guān)聯(lián)的Meta分析結(jié)果也分別顯示在圖1和表2中。

表1 納入研究的相關(guān)信息Tab 1 Characteristics of included studies

圖1 IRF6 rs2235371森林圖Fig 1 Forest plots for rs2235371of IRF6

表2 rs2235371位點(diǎn)IRF6基因型頻率及基因型效應(yīng)分析Tab 2 Genotype frequencies and genotype effects for IRF6 at SNP rs2235371

圖2和表3分別顯示了在雜合子比較模型下IRF6 rs642961與唇腭裂風(fēng)險（GA與GG、AA與GG、GA+AA與GG）之間關(guān)聯(lián)的Meta分析結(jié)果。

圖2 IRF6 rs642961森林圖Fig 2 Forest plots for rs642961of IRF6

表3 rs642961位點(diǎn)IRF6基因型頻率及基因型效應(yīng)分析Tab 3 Genotype frequencies and genotype effects for IRF6 at SNP rs642961

表3匯總了非綜合征型唇腭裂組與對照組間的基因型頻率以及所有研究的OR。IRF6 rs642961與唇腭裂風(fēng)險在雜合子比較中有顯著性差異（GA與GG：OR1=1.34，95% CI=1.09～1.65，P=0.002，I2=70.5%；AA與GG：OR2=3.56，95%CI=2.14～5.92，P=0.057，I2=51.0%；GA+AA與GG：OR3=1.45，95% CI=1.19～1.77，P=0.001，I2=74.6%）。

2.2 統(tǒng)計分析

用敏感性分析檢驗總體OR的穩(wěn)定性。省略每一項合格的研究并不會顯著改變結(jié)果，這表明沒有任何一項研究可以影響合并的OR（圖3、4）。

圖3 IRF6 rs2235371的敏感性分析Fig 3 Sensitivity analysis for rs2235371of IRF6

2.3 發(fā)表偏倚

漏斗圖和Egger試驗均未檢測到發(fā)表偏倚。漏斗圖的形狀近似對稱。Egger檢驗結(jié)果無統(tǒng)計學(xué)意義（均P＞0.05）。圖5、6顯示了基因型比較下的漏斗圖（GA與GG、AA與GG、GA+AA與GG）。

圖4 IRF6 rs642961的敏感性分析Fig 4 Sensitivity analysis for rs642961of IRF6

3 討論

雖然一些獨(dú)立的研究通過等位基因效應(yīng)和基因型效應(yīng)探討了IRF6基因（單核苷酸多態(tài)性位點(diǎn)rs2235371和rs642961）對非綜合征型唇腭裂的影響，但在亞洲人群中，IRF6多態(tài)性與非綜合征型唇腭裂之間的關(guān)系尚未闡明。因此，在本Meta分析中，筆者研究了IRF6多態(tài)性與非綜合征型唇腭裂的關(guān)系，包括18項病例對照研究，并選擇了2個單核苷酸多態(tài)性位點(diǎn)（rs2235371和rs642961）。結(jié)果表明，亞洲人rs2235371、rs642961與非綜合征型唇腭裂風(fēng)險在GA與GG、AA與GG、GA+AA與GG之間存在明顯的關(guān)聯(lián)。IRF6 G/A單倍型（rs2235371/rs642961）增加了巴西人口患口面裂的風(fēng)險[23]。除了這些研究外，還有2項研究[5-6]分析了亞洲和南美人群，結(jié)果表明非綜合征型唇腭裂與IRF6中rs2235371（V274I）多態(tài)性之間存在顯著關(guān)聯(lián)。在Zucchero等[5]的研究中，在南美人群中未發(fā)現(xiàn)單純性腭裂與V等位基因的關(guān)聯(lián)性；但在南美和亞洲人群中，非綜合征型唇腭裂與V等位基因的關(guān)聯(lián)以及單純性唇裂與V等位基因的關(guān)聯(lián)具有高度顯著性意義[5-6]，提示IRF6基因多態(tài)性與非綜合征型唇腭裂具有明顯的相關(guān)性。

在中國人群中，研究[24-25]表明IRF6變異體rs2235371和rs642961是非綜合征型唇腭裂的病因，但rs2235371可能比rs642961有更重要的作用。Larrabee等[26]研究指出，IRF6的共同變異是IRF6與非綜合征型唇腭裂之間關(guān)聯(lián)的原因，rs2235371在洪都拉斯人群中與非綜合征型唇腭裂相關(guān)。此外，有研究[27]表明，在伊朗人群中IRF6 rs2235371是非綜合征型唇腭裂的危險因素。因此，這些研究表明，不同的IRF6多態(tài)性在唇腭裂的發(fā)生中起著不同的作用。結(jié)果表明，rs642961是亞洲人群非綜合征型唇腭裂的危險因素，這一研究結(jié)果與以前的研究結(jié)果不一致。

圖5 IRF6 rs2235371的漏斗圖Fig 5 Funnel plots for rs2235371of IRF6

圖6 IRF6 rs642961的漏斗圖Fig 6 Funnel plots for rs642961of IRF6

通過本Meta分析，筆者調(diào)查了亞洲人群中IRF6多態(tài)性與非綜合征型唇腭裂的關(guān)系，但本Meta分析仍存在一些局限性。首先，樣本量小，可能會降低統(tǒng)計效能，并得出有偏差的結(jié)果。對于rs642961，由于納入的研究少于10項研究，沒有評估出版偏倚。其次，2位作者分別檢索了符合條件的研究，但一些可能的研究被稱為“灰色文獻(xiàn)”和其他語言文獻(xiàn)未被納入研究。第三，非綜合征型唇腭裂是一種復(fù)雜的畸形，環(huán)境因素也與非綜合征型唇腭裂有關(guān)。然而，筆者的初步研究只探討了基因多態(tài)性與非綜合征型唇腭裂的關(guān)系，而沒有進(jìn)行基因與環(huán)境的交互作用研究。

4 結(jié)論

總之，筆者的分析表明，IRF6 rs642961多態(tài)性可能會增加非綜合征型唇腭裂在亞洲人群中的風(fēng)險，而rs2235371可能沒有顯著的關(guān)聯(lián)。為了獲得更確切的結(jié)果，需要進(jìn)行更多相關(guān)的病例對照研究，以獲得更精確的結(jié)果。