大棗花清蒸后主要活性成分含量變化的初步研究

劉世軍，張 陽，唐志書，張 娛，宋忠興，崔春利，許洪波，劉紅波，張軍武，王少程

(陜西中醫(yī)藥大學(xué)/陜西省中藥資源產(chǎn)業(yè)化協(xié)同創(chuàng)新中心/秦藥特色資源研究開發(fā)國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室(培育)/陜西省創(chuàng)新藥物研究中心，陜西 咸陽 712083)

大棗花為鼠李科植物棗ZiziphusjujubaMill的干燥花朵。一般5-7月左右開花，掉落到地上的花朵被人們當(dāng)做垃圾處理，非?？上?，而沒有被充分利用。目前，對(duì)于大棗果實(shí)和大棗葉的研究比較多，而對(duì)于大棗花的研究很少，幾乎沒有。根據(jù)研究者對(duì)大棗和大棗葉的研究和我們前期對(duì)大棗花定性預(yù)試驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)大棗花含有酚類、黃酮、三萜、生物堿、皂苷、多糖等成分，課題組對(duì)大棗花酒蒸前后其活性成分總酚、總黃酮、總?cè)?、總生物堿、總皂苷、總多糖含量的變化進(jìn)行研究，為大棗花進(jìn)一步研究和產(chǎn)品的開發(fā)利用提供一定的參考。

1 材料

1.1 樣品與試劑

大棗花：產(chǎn)地陜西；蘆丁(16122801，陜西樂博生化科技有限公司)、沒食子酸(B20851，上海源葉生物科技有限公司)、齊墩果酸(16051205，陜西樂博生化科技有限公司)、蓮心堿(B20730，上海源葉生物科技有限公司)、甲醇(天津市天力化學(xué)科技有限公司)、甲酸(天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司)、NaOH(天津市天力化學(xué)試劑有限公司)、香草醛(天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司)、冰醋酸(天津市天力化學(xué)科技有限公司)、乙酸乙酯(天津市天力化學(xué)科技有限公司)、高氯酸(天津市天力化學(xué)科技有限公司)、Folin酚試劑(天津市天力化學(xué)科技有限公司)、濃鹽酸(西安三浦化學(xué)試劑有限公司)、無水乙醇(安徽安特食品股份有限公司)，所用化學(xué)試劑均為分析純。

1.2 主要儀器

電熱鼓風(fēng)干燥箱(北京科偉永興儀器有限公司)；高速萬能粉碎機(jī)(天津鑫博得儀器有限公司)；KQ-300DE型數(shù)控超生波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)；島津UV-2600紫外可見分光光度計(jì)；電子分析天平(賽多利斯科儀器有限公司)；DZKW-4電子恒溫水浴鍋(北京中興偉業(yè)儀器有限公司)；KSW型電爐溫度控制器(北京科偉永興儀器有限公司)；箱式電阻爐(北京科偉永興儀器有限公司)；WFH-201B紫外透射反射儀(上海精科實(shí)業(yè)有限公司)；MH-500調(diào)溫型電熱套(北京科偉永興儀器有限公司)；C21-HT2109多功能電磁爐；離心機(jī)等。

2 方法與結(jié)果

2.1 大棗花的蒸制處理

取新鮮干燥的棗花進(jìn)行挑揀，一部分棗花直接蒸制30 min得到清蒸品，一部分棗花干燥直接用于實(shí)驗(yàn)。樣品的水分控制在5%以內(nèi)。

2.2 活性成分測(cè)定[1～2]

2.2.1 棗花甲醇提取液的制備 準(zhǔn)確稱取各樣品0.5 g，轉(zhuǎn)入50 mL離心管中，然后分別加5 mL 80%甲醇溶液，100 W超聲提取30 min，4 000 r·min-1離心10 min后收集上清液，殘?jiān)酝瑯臃椒ㄌ崛?次，合并提取液，用甲醇定容至10 mL，4℃冷藏備用。

2.2.2 總酚含量的測(cè)定[3]主要有:

(1)標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制。稱量1 mg沒食子酸標(biāo)準(zhǔn)樣品，用蒸餾水定容至10 mL，得濃度為0.1 mg·mL-1標(biāo)準(zhǔn)液，分別準(zhǔn)確量取上述標(biāo)準(zhǔn)液0.0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 mL于10 mL容量瓶中，加6 mL蒸餾水，搖勻后加Folin酚試劑0.5 mL，搖勻，1 min后加入1.5 mL的20% Na2CO3溶液，混勻定容，在75℃恒溫水浴反應(yīng)10 min，取出后冷卻后于760 nm波長(zhǎng)處測(cè)定其吸光度。

圖1 總酚標(biāo)準(zhǔn)曲線

(2)樣品測(cè)定。準(zhǔn)確移取樣品80% 甲醇提取液0.1 mL，分別加入稀釋一倍的Folin酚試劑0.5 mL，混勻后加入1.5 mL，質(zhì)量分?jǐn)?shù)10%的Na2CO3溶液，然后用蒸餾水定容至10 mL，混合均勻，75℃恒溫水浴反應(yīng)10 min，取出冷卻后于760 nm波長(zhǎng)處測(cè)定其吸光值。

表1 樣品總酚含量測(cè)定

由表1可知生品總酚含量為12.085 mg·g-1，經(jīng)過清蒸后其含量增加為12.694 mg·g-1，大棗花清蒸后總酚含量增加。

2.2.3 總黃酮含量測(cè)定[4]主要有:

(1)標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制稱量蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品2 mg，80%甲醇溶解定容至10 mL的容量瓶中，即為0.2 mg·mL-1的蘆丁標(biāo)準(zhǔn)液，吸取蘆丁標(biāo)準(zhǔn)液0.0、0.5、1.0、1.5、2.0、2.5 mL分別置于10 mL的容量瓶中，用80%甲醇溶液補(bǔ)充至5 mL，加入5% NaNO2溶液0.3 mL，搖勻，放置6 min后加入0.3 mL 10% Al(NO3)3溶液搖勻，6 min后加入4 mL，1 mol·L-1的NaOH溶液，混勻，用80%甲醇溶液定容至10 mL，搖勻，10 min后在510 nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度。

圖2 總黃酮標(biāo)準(zhǔn)曲線

(2)樣品測(cè)定。用移液槍準(zhǔn)確移取生品80%甲醇提取液1 mL，清蒸品0.7 mL于10 mL的容量瓶中，用80%甲醇溶液補(bǔ)充至5 mL，加入5%NaNO2溶液0.3 mL，搖勻，放置6 min后加入10% Al(NO3)3溶液0.3 mL，搖勻，6 min后加入1 mol·L-1的NaOH溶液4 mL，混勻，用80% 甲醇溶液定容至10 mL，搖勻，10 min后在510 nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度。

表2 樣品總黃酮含量測(cè)定

由表2可知大棗花生品總黃酮含量為9.567 mg·g-1，經(jīng)過清蒸后其含量增加為12.497 mg·g-1，大棗花清蒸后總黃酮含量增加。

2.2.4 總?cè)坪康臏y(cè)定[5]主要有:

(1)標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制。稱量齊墩果酸對(duì)照品1 mg，用80%甲醇溶解并定容至10 mL的容量瓶中搖勻，即得對(duì)照品溶液。準(zhǔn)確吸取對(duì)照品溶液0.0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 mL，分別置于10 mL的容量瓶中，水浴揮去溶劑后，加入0.4 mL的5%的香草醛冰醋酸溶液，高氯酸試劑1.6 mL，混勻后于90℃水浴加熱反應(yīng)15 min，冷卻至室溫，加乙酸乙酯定容至刻度線，搖勻后在560 nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度，制作標(biāo)準(zhǔn)曲線。

(2)樣品測(cè)定。準(zhǔn)確移取樣品80%甲醇提取液0.1 mL于10 mL容量瓶中，水浴揮去溶劑后，加入0.4 mL的5%的香草醛冰醋酸溶液，高氯酸試劑1.6 mL，混勻后于70℃水浴加熱反應(yīng)15 min，冷卻至室溫，加乙酸乙酯定容至刻度線，搖勻后在560 nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度。

圖3 總?cè)茦?biāo)準(zhǔn)曲線

表3 樣品總?cè)坪繙y(cè)定

由表3可知大棗花生品總?cè)坪繛?.107 mg·g-1，經(jīng)過清蒸后其含量增加為9.654 mg·g-1，大棗花清蒸后總?cè)坪吭黾印?/p>

2.2.5 總生物堿含量測(cè)定[6～7]主要有:

(1)標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制。稱取2 mg蓮心堿對(duì)照品至10 mL容量瓶中，用無水乙醇溶解定容，配置成0.2 mg·ml-1的溶液。分別量取0、1.2、1.5、1.8、2.1、2.4 mL于10 mL容量瓶中，用無水乙醇稀釋至刻度于282 nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度。

圖4 總生物堿標(biāo)準(zhǔn)曲線

(2)樣品制備。①配制1%鹽酸250 mL，1% 氫氧化鈉300 mL備用。②分別稱取各棗花樣品0.5 g置于離心管中，并貼好標(biāo)簽。③向每個(gè)離心管中分別加入10 mL的1%鹽酸，調(diào)節(jié)pH=2，浸泡2 h，使生物堿都形成生物堿鹽溶于酸水中。④堿化。每個(gè)離心管中分別加入1%氫氧化鈉，調(diào)節(jié)pH為9～10，使生物堿游離出來。⑤有機(jī)溶劑萃取。分別加入無水乙醇15 mL，封住蓋，超聲處理40 min，取出離心管，準(zhǔn)備下一步處理。⑥過濾樣品溶液。⑦然后將經(jīng)過過濾后的濾液用無水乙醇溶液定容到50 mL的容量瓶中并貼上標(biāo)簽備用。⑧用移液槍移取生品和清蒸品試液1 mL于10 mL容量瓶中，用無水乙醇溶液稀釋至刻度。

(3)樣品測(cè)定。將上述溶液于282 nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度。

表4 樣品總生物堿含量測(cè)定

由表4可知大棗花生品總生物堿含量為59.137 mg·g-1，經(jīng)過清蒸后其含量增加為67.343 mg·g1-，大棗花清蒸后總生物堿含量增加。

3 結(jié)論和討論

大棗花作為大棗植物的一部分，在花季常常散落在地，被人們當(dāng)做垃圾處理而不被重視。課題組對(duì)大棗花清蒸前后化學(xué)成分進(jìn)行了初探。根據(jù)試驗(yàn)結(jié)果，大棗花經(jīng)過清蒸后其主要活性成分總酚、總黃酮、總?cè)?、總生物堿含量均增加。這其中的炮制原理是什么,這些主要成分的藥理作用是什么,有待進(jìn)一步的深入研究。筆者研究的實(shí)施可以變廢為寶，為大棗花的深入研究奠定一定的基礎(chǔ)，同時(shí)為大棗花產(chǎn)品的開發(fā)和利用提供一定的參考。