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    陜西某規(guī)?;i場流行性腹瀉診斷與防治

    2020-07-06 09:06:26李光芒
    陜西農(nóng)業(yè)科學(xué) 2020年5期
    關(guān)鍵詞:乳豬離心管產(chǎn)房

    李光芒

    (陜西省藍田縣普化鎮(zhèn)畜牧獸醫(yī)站, 陜西 藍田 710505)

    流行性腹瀉是(porcine Epidemic Diarrhea,PED)是由流行性腹瀉病毒(porcine Epidemic Diarrhea Virus,PEDV)引起的以嚴(yán)重腹瀉、嘔吐、脫水為主要臨床癥狀的高度接觸性傳染病[1]。各年齡段的豬都可感染,斷奶仔豬和成年豬常發(fā)生一過性腹瀉,而7日齡以內(nèi)的哺乳仔豬發(fā)生腹瀉并死亡,發(fā)病率高達100%,病死率平均為50%,且多數(shù)疫情發(fā)生在中小規(guī)模養(yǎng)豬場[2]。此外,該病具有季節(jié)性發(fā)病特點,我國流行性腹瀉多發(fā)于寒冷季節(jié),以12月至次年2月為該病的高發(fā)期[3]。引起仔豬腹瀉的病因有很多,其中豬流行性腹瀉病毒(PEDV),除細菌性腹瀉之外,豬流行性腹瀉病毒(PEDV)、豬傳染性胃腸炎病毒(TGEV)和豬輪狀病(PRoV)是較為常見的,可以引起仔豬腹瀉,而豬德爾塔冠狀病毒也是近期發(fā)現(xiàn)可以導(dǎo)致仔豬腹瀉的新型冠狀病毒[4]。在我國豬病毒性腹瀉中,PEDV 的感染最為嚴(yán)重[5]。 PEDV 感染仔豬后可導(dǎo)致病豬出現(xiàn)嘔吐、水樣腹瀉、消瘦等臨床癥狀,且伴發(fā)高死亡率[6~7]。但由于其臨床癥狀與其它病毒性腹瀉類似,臨床和病理變化診斷無法確診,需要借助實驗室診斷技術(shù)對病因進行確診,以進行針對性地治療和防控。

    仔豬一旦爆發(fā)腹瀉,引起仔豬成活率大大下降,生長緩慢,飼料報酬降低外,醫(yī)藥費用的投入也不斷增加。對此,細化規(guī)?;i場的飼養(yǎng)管理,有效及時預(yù)防產(chǎn)房仔豬腹瀉疾病是規(guī)?;i場節(jié)約成本,提高效益的方法。筆者就陜西某規(guī)?;i場2019年11月14日產(chǎn)房仔豬發(fā)生腹瀉的問題,將該場流行病調(diào)查、病理變化及實驗室的分子診斷結(jié)果相結(jié)合,最終確診為變異株感染的流行性腹瀉。經(jīng)過緊急處理措施后,疫情得到了控制,現(xiàn)將疾病的治療方案和臨床措施做一報道,以期為豬場流行性腹瀉的防控提供參考。

    1 材料與方法

    1.1 材料

    分別于2019年11月15日陜西省某規(guī)?;i場采集發(fā)生腹瀉、瀕臨死亡仔豬的小腸組織及內(nèi)容物,豬場采集分別采集小腸組織8份,糞便4份。

    1.2 試劑與儀器

    (1)試劑:核酸提取或淳化試劑盒(湖南圣湘生物科技有限公司);流行性腹瀉病毒經(jīng)典株和變異株雙重實時熒光RT-PCR檢測試劑盒、豬輪狀病毒實時熒光PCR檢測試劑盒、豬傳染性胃腸炎病毒實時熒光RT-PCR檢測試劑盒均購自湖南圣湘生物科技有限公司。

    (2)儀器:旋渦震蕩儀(Vorter-5);高速冷凍離心機(Dlab-D3024R);干式金屬浴鍋(上海凈信實業(yè)發(fā)展有限公司,型號:JX-10);旋渦儀(北京金泰宏達,型號:Mx-F);超凈臺(北京亞泰科隆儀器技術(shù)有限公司,型號:CZA1812239);小型離心機(北京金泰宏達,型號:Spin Plus);熒光定量PCR儀(MYGo-PRO);磁力架(24孔)。

    1.3 病料處理

    取500 mg的樣品進行反復(fù)凍融3次,且加入1 mL的滅菌生理鹽水于組織研磨器中充分研磨后置已高壓滅菌的1.5 mL的無酶EP管中,2 500 rpm·min-1離心5 min,將上清轉(zhuǎn)移至一個新的離心管中;糞便取1 g,加入1 mL生理鹽水,旋渦震蕩15 s,2 500 rpm·min-1離心5 min,將上清(靠近沉淀的上清)轉(zhuǎn)移至新的無酶離心管,-20℃儲存?zhèn)溆谩?/p>

    1.4 熒光定量PCR檢測

    (1)病毒RNA提取。取200 μL樣品上清于一個新RNA-free EP管,加入600 μL提取液1,旋渦震蕩10 s,在干式金屬浴鍋上95℃加熱10 min,瞬時離心。在每個樣品管添加100 μL提取液2和50 μL磁珠溶液,旋渦震蕩10 s,室溫靜置20 min。將樣品管瞬時離心后置于磁力架上,3 min后用移液器將溶液吸出(注意槍頭不能碰磁力側(cè)的磁珠)。每個樣品管加入600 μL提取溶液3和200 μL提取溶液4,震蕩混勻5 s,瞬離后將離心管再次置于磁力架上。約3 min后,用移液器將溶液緩慢吸出丟棄,靜置1 min后將管底殘余液體完全吸出丟棄。用30 μL洗脫液將離心管壁上的磁珠洗脫到管底,吸打混勻3~4次,室溫靜置10 min后將離心管再次置于磁性分離器上3 min,最后將洗脫下來的核酸放于新的1.5 mL離心管中。

    (2)qPCR擴增。擴增體系體系為50 μL。反應(yīng)條件為:反轉(zhuǎn)錄50℃30 min,預(yù)變性95℃ 1 min;95℃變性15 s,退火延伸60℃30 s,共40個循環(huán);

    反應(yīng)體系組分體系

    RNA模板 5μL

    PEDV酶混合液2μL

    PEDV-反應(yīng)液 43μL

    2 結(jié)果

    2.1 流行病學(xué)調(diào)查

    2019年11月14日,陜西省某基礎(chǔ)母豬存欄數(shù)約為1 200頭的規(guī)?;i場發(fā)生仔豬腹瀉,11月14日,產(chǎn)房2日齡個別仔豬出現(xiàn)腹瀉癥狀:嘔吐、扎堆、脫水并有嚴(yán)重漿糊樣腹瀉,11月15日產(chǎn)房7頭3日齡仔豬脫水、消瘦嚴(yán)重并死亡,且發(fā)病圈舍有個別母豬也出現(xiàn)拉稀現(xiàn)象。11月17日疫情蔓延至妊娠舍、空懷舍及公豬舍。該豬場技術(shù)人員發(fā)現(xiàn)病情后立即采取隔離、消毒、治療措施,直到該疫情解除,本次疫情一個月內(nèi)共死亡仔豬369頭仔豬。其中3日齡以內(nèi)出現(xiàn)腹瀉的有26窩,小計286頭乳豬,全部死亡淘汰;4~7日齡出現(xiàn)腹瀉有12窩,死亡75頭乳豬,死亡率63%;8~15日齡出現(xiàn)腹瀉癥狀的有57頭仔豬,其中8頭死亡,死亡率為14%;出現(xiàn)腹瀉癥狀的母豬及公豬經(jīng)過治療一周后恢復(fù)正常。

    2.2 臨床癥狀及病理變化

    (1)臨床癥狀。產(chǎn)房發(fā)病的乳豬表現(xiàn)癥狀為皮膚蒼白、被毛逆立、精神委頓、嘔吐、腹瀉、全身發(fā)抖、消瘦,發(fā)病初期糞便呈黃色水樣或糊狀,最后脫水、衰竭死亡(如圖1所示)。發(fā)病仔豬中個別表現(xiàn)神經(jīng)癥狀,口吐白沫,角弓反張,四肢劃動呈游泳狀。死亡仔豬主要集中在5日齡以內(nèi),而且初產(chǎn)母豬所產(chǎn)乳豬發(fā)病率較高。

    (2)病理變化。發(fā)病乳豬表現(xiàn)精神沉郁,消瘦,皮膚黏膜蒼白,被毛粗亂,皮膚脫水;吮乳量減少,嘔吐、口吐白沫,排出水樣糞便,糞便呈黃色水樣或糊狀;部分乳豬四肢劃動呈游泳狀。病死豬尸體消瘦,皮膚干燥,呈典型脫水癥狀(圖1);病理剖檢可見脾臟肉眼可見的病理變化,肺臟形成典型間質(zhì)性肺炎,腎臟表面有較明顯的淤血斑;胃容積增大、充滿內(nèi)容物,腸壁變薄,腸內(nèi)充滿黃色液體,胃腸道有豆花樣內(nèi)容物(圖2));腸系膜充血。哺乳仔豬胃內(nèi)可見黃白色凝乳塊,小腸膨脹,腸壁變薄,腸腔內(nèi)充滿黃色稀薄的內(nèi)容物,腸系膜充血,腸系膜淋巴結(jié)腫脹,切面濕潤多汁。

    2.3 熒光定量PCR檢測

    豬場熒光定量PCR檢測結(jié)果:對2019年11月14日從某規(guī)模化豬場采集的發(fā)病仔豬小腸組織8份及糞便4份,全部用于熒光定量PCR檢測,試驗結(jié)果如圖3、4、5顯示。被檢的12份樣品中一份為PEDV疫苗株陽性,其余11份均為PEDV變異株陽性。

    結(jié)果判斷標(biāo)準(zhǔn):Fam通道Ct值≦40且擴增曲線為典型S型,Hex通道無Ct值或典型的S型擴增曲線,報告為PEDV變異株陽性;Fam通道Ct值≦40,且均有S型擴增曲線,報告為PEDV經(jīng)典株陽性;Fam通道和Hex通道均無Ct值和S型標(biāo)準(zhǔn)曲線,報告為PEDV經(jīng)典株和疫苗株陰性。

    根據(jù)上述實驗室熒光定量PCR檢測結(jié)果并結(jié)合流行病學(xué)調(diào)查,臨床癥狀,病理變化分析,該豬場在2019年11月仔豬發(fā)生腹瀉性疾病的發(fā)生原因,確診為豬流行性腹瀉。

    3 討論

    1978 年,比利時首次分離鑒定出該病毒,命名為 CV777[8]。隨后,匈牙利、德國、泰國、韓國、日本、中國、美國等國家都陸續(xù)報道了本病。PEDV 造成的危害非常嚴(yán)重,2010-2011 年,我國有 100 多萬頭豬死于 PEDV[9],2013 年美國暴發(fā)PEDV疫情,當(dāng)年美國損失了700 萬頭仔豬[10]。給養(yǎng)豬業(yè)帶來了巨大的經(jīng)濟損失。

    筆者研究通過對某規(guī)模化豬場腹瀉仔豬進行流行病學(xué)調(diào)查,臨床癥狀、病理變化觀察以及實驗室熒光定量qPCR檢測的結(jié)果,將該豬場在2019年11月仔豬發(fā)生腹瀉性疾病的原因,確診為豬流行性腹瀉。

    該豬場在發(fā)生仔豬腹瀉性疾病時,存在以下問題:①環(huán)境因素:產(chǎn)房衛(wèi)生條件差,保溫措施不理想,晝夜溫差大,加之入冬的突然降溫導(dǎo)致長期應(yīng)激仔豬的發(fā)病。②管理因素:該豬場仔豬發(fā)病前期有產(chǎn)房飼養(yǎng)員竄舍借用后備舍電源的情況,后備舍母豬之前存在拉稀現(xiàn)象,該行為應(yīng)該是仔豬腹瀉發(fā)生的直接誘因。③出生仔豬未能及時補充鐵硒等微量元素,導(dǎo)致仔豬抵抗力差,免疫系統(tǒng)脆弱。④生物防治因素:沒有做到全群免疫,所用疫苗質(zhì)量不好。

    根據(jù)該規(guī)?;i場存在的問題,提出以下幾點緊急處理措施。發(fā)病產(chǎn)房所有人員進行隔離,并且嚴(yán)禁其他產(chǎn)房人員靠近發(fā)病產(chǎn)房;母豬普免2頭份腹瀉疫苗(后海穴注射);腹瀉仔豬灌服5 mL硫酸慶大,并肌肉注射恩諾沙星2 mL;對產(chǎn)床下面及下水道拋灑火堿進行消毒,產(chǎn)床及保溫箱內(nèi)鋪灑密斯陀粉,并封閉下水道出口防止擴散;對脫水仔豬進行補液;對死亡仔豬進行采樣檢測;對傷亡嚴(yán)重的圈舍生火爐提高圈舍內(nèi)溫度。

    母豬全群普免腹瀉苗,2周后執(zhí)行跟胎免疫方案,產(chǎn)前30 d活疫苗1頭份(后海穴注射),產(chǎn)前10 d滅活苗4 mL(后海穴注射);仔豬7日齡1頭份(活苗)后海穴注射,通過對比試驗進行效果評價;初生仔豬:吃初乳前,仔豬灌服1頭份活疫苗+2 mL腹瀉專用稀釋液+3 mL純牛奶,灌服2 min后吃初乳。通過對比試驗進行效果評價。此規(guī)?;i場在實施以上幾點防控措施20 d之后,仔豬腹瀉性疾病的發(fā)病率顯著下降,而且發(fā)生腹瀉的仔豬治愈率有所升高。

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