淺析羅漢果皂苷的提取方法及藥用功能

關(guān)紅艷 付晶晶* 孫健 唐昭

（1. 廣西衛(wèi)生職業(yè)技術(shù)學(xué)院，南寧 530021；2. 廣西醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院，南寧 530021）

羅漢果（Siraitia grosvenorii）屬于葫蘆科，是一種多年生草本藤蔓植物，原產(chǎn)于我國南方和泰國北部。在我國，羅漢果主要產(chǎn)地為廣西，此外，廣東、江西、貴州、湖南等地區(qū)也有分布[1]。羅漢果作為我國一種傳統(tǒng)的“藥食兩用”藥物，人們對羅漢果的利用已有300 年歷史，其有效活性成分的研究也已被廣泛關(guān)注。在我國傳統(tǒng)中藥中羅漢果被用作肺部緩和劑，用于治療肺結(jié)核、哮喘、及急性支氣管炎等[2]。羅漢果皂苷又名羅漢果甜苷，是羅漢果甜味的主要成分，其作為羅漢果提取物中的主要成分之一，具有很多重要的生理功能，目前針對羅漢果提取物的研究也多集中在羅漢果皂苷。據(jù)相關(guān)研究報道[3-5]羅漢果皂苷具有抗氧化、降血糖和抗糖尿病、護(hù)肝、抗疲勞、抗癌抗腫瘤、抗炎抑菌、止咳祛痰等生理活性及功能，又因其熱量低甜度高的特點，被作為無糖甜味劑用于健康食品及飲料中。此外，英、美、日、韓等國也將羅漢果皂苷作為添加劑用于制作開發(fā)降糖、降壓食品及保健品，增強免疫力食品及抗過敏顆粒等。現(xiàn)代研究對于羅漢果提取物在降低血糖抗糖尿病、抗癌、抗氧化等方面的作用效果及機理的研究也逐漸展開。

近年來隨著羅漢果皂苷在各個領(lǐng)域應(yīng)用的廣泛性提高，對羅漢果皂苷的提取和利用已經(jīng)越來越受到人們的重視，因此，對羅漢果皂苷提取方法及生理功能進(jìn)行綜述可以為今后羅漢果的深入研究及開發(fā)提供理論依據(jù)。

1 不同羅漢果皂苷提取方法對提取成分含量的影響

1.1 傳統(tǒng)提取方法

羅漢果皂苷最初的提取方法多為直接水提或者乙醇提取，此方法簡單且容易實現(xiàn)，不需要專用設(shè)備，但一般較為耗時。曾有學(xué)者將水、25%乙醇水溶液和50%乙醇水溶液作為提取溶劑對羅漢果皂苷的提取率進(jìn)行了研究，結(jié)果發(fā)現(xiàn)水和50%乙醇水溶液的提取率相差很小[6]。陳敏[7]等研究發(fā)現(xiàn)水作為提取溶劑時，在提取之前先將羅漢果浸泡30 min 可以明顯提高羅漢果皂苷的得率。但因為羅漢果中含有蛋白質(zhì)、葡萄糖、果糖等物質(zhì)，這些物質(zhì)不溶于乙醇，所以50%乙醇水溶液為溶劑的浸出液相對較為純凈，得率也較高。

1.2 超聲和微波法輔助提取羅漢果皂苷

利用超聲波輔助處理可以促進(jìn)原料中羅漢果甜苷更快更多地釋放出來，并且超聲波的頻率大小、超聲溫度及超聲時間長短也會對羅漢果甜苷的提取率有影響[8]。楊祖金[9]等通過超聲波輔助強化乙醇提取羅漢果皂苷，發(fā)現(xiàn)經(jīng)過超聲波強化50min 后提取率比常規(guī)提取高出31.6%。韋文俊[10]等采用水煎煮法超聲輔助提取羅漢果甜苷V，發(fā)現(xiàn)超聲輔助20min平均提取率比單純水煎法提高18%。

關(guān)于微波法對羅漢果皂苷提取方面，黎海彬等人以水作為提取溶劑，通過微波輔助提取，發(fā)現(xiàn)羅漢果皂苷的一次提取率比傳統(tǒng)水提法提高45%，而且提取時間大為縮短[11]。梁立娟[12]等人的試驗結(jié)果表明微波輔助提取5min 的提取率與普通加熱回流法6h的提取率相當(dāng)。因此，通過超聲和微波技術(shù)用于羅漢果皂苷的提取，可改變傳統(tǒng)提取方法耗時的缺點，可達(dá)到快速提取的目的。

1.3 閃提法提取羅漢果皂苷

優(yōu)于超聲和微波輔助提取使羅漢果皂苷提取耗時方面的提升，閃提技術(shù)則是為了尋求羅漢果皂苷更高的提取率及產(chǎn)品純度。一般一次提取在數(shù)秒至數(shù)分鐘之內(nèi)即可完成，相較與傳統(tǒng)方法更為高效、快速，并且不需加熱、不破壞成分、適合各種溶劑[13]。楊曄[14]等實驗表明閃提法對羅漢果皂苷的提取率分別比超聲和微波提高了50.4%和19.3%，并且提取時間縮短至7min，對羅漢果皂苷的提取率為8.774%，其中羅漢果皂苷V的含量為34.43%，精制后的羅漢果皂苷V純度可達(dá)92%以上。劉兆等[15]發(fā)現(xiàn)閃提的轉(zhuǎn)速和料液比對羅漢果皂苷的提取率影響比較明顯，經(jīng)過優(yōu)化得到閃式提取法對羅漢果皂苷的提取率為10.057%。綜上所知，閃提法對羅漢果皂苷具有較好的提取效果及提取物的純度更高。

1.4 羅漢果皂苷的新型提取方法

目前羅漢果皂苷比較新的提取方法主要有酶法及高壓提取法。吳奔[16]等在羅漢果皂苷提取液中加入α-環(huán)糊精葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶，希望通過外來酶系的加入利用生物化學(xué)方法將羅漢果各苷類物質(zhì)進(jìn)行轉(zhuǎn)化，以提高羅漢果皂苷V 的濃度。通過正交試驗得到最優(yōu)條件下羅漢果皂苷V的質(zhì)量濃度比原來提高了約2.25倍。為此類研究提供了一種新思路。李國平[17]利用超聲波輔助水提羅漢果皂苷，同時加入纖維素酶和果膠酶，羅漢果皂苷提取率有明顯提高。以羅漢果皂苷V 的得率為指標(biāo)，羅丹[18]利用常溫超高壓技術(shù)對羅漢果皂苷提取進(jìn)行研究，并與加熱回流法進(jìn)行比較，結(jié)果表明超高壓提取2.5min 的羅漢果皂苷得率與熱回流法提取60min 的得率相當(dāng)，而比熱回流提取30min的羅漢果皂苷得率提高39.7%。說明常溫超高壓提取對羅漢果皂苷的提取具有高效、環(huán)保的特點。

表1 不同提取方法對比分析表

2 羅漢果皂苷在不同醫(yī)用領(lǐng)域的功能

2.1 抗糖尿病作用

羅漢果皂苷α-葡萄糖苷酶抑制是降低餐后血糖的主要藥物，對二型糖尿病的預(yù)防及治療有積極作用。黃四新[19]等從漢果中分離出羅漢果甜苷ⅡA，研究發(fā)現(xiàn)其具有較強的α-葡萄糖苷酶抑制活性，即羅漢果皂苷ⅡA具有明顯的降血糖作用。此外，其他學(xué)者[20-21]也對羅漢果提取物進(jìn)行研究，結(jié)果都表明羅漢果提取物具有降低血糖的作用，說明羅漢果在降血糖產(chǎn)品開發(fā)方面有很好的前景。研究表明羅漢果皂苷V具有抑制由糖尿病引起的高血糖癥的能力，使用含有羅漢果皂苷V 的羅漢果提取物有助于預(yù)防與氧化應(yīng)激和高脂血癥相關(guān)的糖尿病并發(fā)癥[22]。

2.2 抗癌抗腫瘤作用

羅漢果皂苷在抗腫瘤初步篩選試驗中表現(xiàn)出很強的抑制作用，羅漢果苷V 可以通過誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡，而抑制腫瘤細(xì)胞的增置，從而實現(xiàn)抗腫瘤作用[23]。Liu等[24]研究發(fā)現(xiàn)羅漢果苷V能夠通過促進(jìn)胰腺癌細(xì)胞的凋亡和細(xì)胞周期停滯而表現(xiàn)出腫瘤生長抑制活性。同時還發(fā)現(xiàn)羅漢果甜苷V可能通過抑制血管生成和降低血管密度來限制胰腺腫瘤的生長。Liu[25]等首次提出了羅漢果皂苷ⅣE作為具有抗結(jié)直腸癌和抗喉癌活性的植物化學(xué)物質(zhì)的作用和機制。說明羅漢果苷具有很好的抗癌作用，可以作為膳食補充劑應(yīng)用在癌癥預(yù)防和治療中。

2.3 抗炎抑菌作用

羅漢果具有一定的抑菌抗炎能力，李美鋒[26]等研究結(jié)果表明羅漢果甜苷V能夠減少肝臟的脂質(zhì)沉淀及脂質(zhì)過氧化，減少肝細(xì)胞的損傷，減輕肝臟的脂肪堆積，改善炎癥反應(yīng)，能夠有效治療非酒精性脂肪性肝炎。時東方[27]對羅漢果皂苷Ⅴ關(guān)于小鼠的急性肺損傷作用進(jìn)行了研究，發(fā)現(xiàn)羅漢果皂苷Ⅴ對小鼠急性肺損傷炎癥有抑制作用。另外，有人對羅漢果提取物的抑菌作用進(jìn)行了研究，結(jié)果表明羅漢果提取物對大腸桿菌、枯草芽孢桿菌、金黃色葡萄球菌及根霉和曲霉等都有抑制作用，并且熱穩(wěn)定性好，為羅漢果的抑菌防腐應(yīng)用提供依據(jù)[28]。

2.4 止咳祛痰作用

羅漢果作為廣西特色中藥材，其止咳祛痰作用一直被人們所關(guān)注和應(yīng)用。為了研究羅漢果的祛痰作用，王勤[29]等研究結(jié)果表明羅漢果甜苷Ⅴ是羅漢果祛痰作用的主要因素。吳旖[30]等將羅漢果皂苷Ⅴ與百部新堿聯(lián)用，考察其對小鼠的祛痰鎮(zhèn)咳作用。實驗結(jié)果表明，羅漢果皂苷Ⅴ是通過刺激呼吸道上皮細(xì)胞，降低痰液粘性而發(fā)揮祛痰作用，二者聯(lián)用后使得小鼠的咳嗽潛伏期縮短，并且次數(shù)減少明顯，說明羅漢果皂苷Ⅴ和百部新堿聯(lián)用對小鼠的祛痰鎮(zhèn)咳具有協(xié)同增效作用。呂金燕[31]通過實驗篩選出羅漢果中13 種具有止咳化痰作用的成分，其中有11-去羥基氧化羅漢果皂苷Ⅲ、11-去氧羅漢果皂苷Ⅲ、11-氧化羅漢果皂苷ⅡA1、11-氧化羅漢果皂苷ⅡE均為羅漢果皂苷類。并構(gòu)建了羅漢果止咳化痰的網(wǎng)絡(luò)模型，最終證實羅漢果具有“多成分-多靶點-多通路”為特點的止咳化痰作用機制，為羅漢果的止咳祛痰作用的進(jìn)一步探討提供依據(jù)。

2.5 其他醫(yī)用領(lǐng)域

近年來不少人開始探索羅漢果皂苷在醫(yī)學(xué)及藥用方面的作用，石亞男[32]等研究發(fā)現(xiàn)羅漢果苷ⅢE可以抑制心肌纖維化的進(jìn)展，其機制是通過調(diào)節(jié)TLR4 相關(guān)信號通路來實現(xiàn)抑制炎癥介質(zhì)及致纖維化因子的激活與釋放。結(jié)果證明羅漢果苷ⅢE對心肌纖維具有保護(hù)作用，可能對預(yù)防和治療心肌纖維化有重要影響。鞠培俊[33]等研究羅漢果苷Ⅴ對地卓西平馬來酸鹽建立的精神分裂癥小鼠模型行為能力的影響，發(fā)現(xiàn)羅漢果苷Ⅴ可以顯著恢復(fù)由地卓西平馬來酸鹽引起的PPI 受損，說明羅漢果苷Ⅴ可以有效的改善谷氨酸功能低下的小鼠精神分裂行為。姚順晗[34]等研究了羅漢果皂苷V 對成骨細(xì)胞分化的影響，發(fā)現(xiàn)羅漢果皂苷V可以顯著提高成骨細(xì)胞的活力，促進(jìn)成骨細(xì)胞的增殖。首次提出羅漢果皂苷V能夠刺激成骨細(xì)胞的增殖和分化，為羅漢果皂苷的臨床應(yīng)用提供了新的參考依據(jù)。

3 小結(jié)

目前對羅漢果皂苷成分的研究主要集中在總皂苷的提取及功能研究。在提取方法方面（見表1），羅漢果的不同提取方法因提取時間、提取溫度及提取溶劑等的不同而使羅漢果皂苷的提取得率不同，超聲輔助提取可以增加溶劑的穿透力。微波輔助提取具有較好的選擇性，不需要特殊分離，對易揮發(fā)成分提取效果好。超聲和微波輔助提取都可以有效縮短提取時間，一般為幾分鐘至幾十分鐘。閃提法相較前面兩種方法更為高效、快速，一般在數(shù)秒至數(shù)分鐘內(nèi)即可完成，并且不需要加熱，不破壞成分，可以得到純度更好的羅漢果皂苷產(chǎn)品。而對于酶法及常溫超高壓技術(shù)都可以大大提高提取率，高效環(huán)保但成本稍高。

在藥用領(lǐng)域方面集中對抗糖尿病[35]、抗氧化[36]、抑菌[28]等生理功能進(jìn)行研究，而對于羅漢果皂苷中每一種具體成分的分離提取及生理功能研究較少，目前多見的是對羅漢果皂苷Ⅴ的分離提取及生理功能的研究[18,30,33,34]，而對于具體皂苷成分如賽門苷Ⅰ、羅漢果苷Ⅱ、羅漢果苷Ⅲ、羅漢果苷Ⅳ等的提取及生理功能研究極為少見。因此，對于各具體皂苷成分的分離提取、功能性質(zhì)以及應(yīng)用研究，以及各成分之間是否有協(xié)同作用等將成為今后的研究重點。

其次，目前羅漢果提取物的應(yīng)用研究主要集中在皂苷類，并且對皂苷類的藥理作用研究主要集中在動物實驗，臨床研究、毒性研究也比較少。因此，建議今后的研究可以可從臨床、毒性等機理方面進(jìn)行更深入的研究。