一例副豬嗜血桿菌病的診斷與分析

堯國(guó)民，舒 鳴，王 湘，李中波，侯強(qiáng)紅

懷化職業(yè)技術(shù)學(xué)院，湖南懷化 418000

近年來(lái)，懷化市生豬養(yǎng)殖發(fā)展迅速，規(guī)?；B(yǎng)殖模式占比逐漸提高，同時(shí)養(yǎng)豬業(yè)給當(dāng)?shù)卣宛B(yǎng)殖戶帶來(lái)巨大經(jīng)濟(jì)收入。在生豬養(yǎng)殖過(guò)程中，特別是飼養(yǎng)管理水平較低的情況下，豬群易感染諸多病原，從而引發(fā)疾病，甚至導(dǎo)致死亡。其中副豬嗜血桿菌病在豬場(chǎng)中較為常見(jiàn)，不同階段豬群對(duì)該病均易感，但由于保育豬或仔豬免疫性能低下，更易受到該病的感染，同時(shí)引發(fā)嚴(yán)重的臨床表現(xiàn)，如腦膜炎、關(guān)節(jié)炎和全身性漿膜炎等，且發(fā)病率和死亡率均較高，給豬場(chǎng)造成巨大經(jīng)濟(jì)損失[1，2]。

龍劍[3]等對(duì)湖南部分地區(qū)規(guī)?；i場(chǎng)發(fā)病仔豬進(jìn)行細(xì)菌感染情況調(diào)查，結(jié)果發(fā)現(xiàn)副豬嗜血桿菌（HPS）檢出率高達(dá)30%（24/80），且分離的菌株對(duì)部分常用抗生素耐藥；河南及周邊地區(qū)發(fā)病豬群HPS 分離率為21.7%（531/2445），且血清型眾多，但主要以4 型為主，提示HPS 在我國(guó)豬場(chǎng)流行情況嚴(yán)重，給養(yǎng)殖業(yè)造成經(jīng)濟(jì)損失巨大。本文以一例保育豬副豬嗜血桿菌病為例，對(duì)其臨床和實(shí)驗(yàn)室診斷過(guò)程進(jìn)行闡述，同時(shí)根據(jù)藥敏試驗(yàn)結(jié)果對(duì)豬群用藥，最終使疫情得到有效控制。

1 豬場(chǎng)發(fā)病情況

懷化市某規(guī)?；i場(chǎng)飼養(yǎng)保育豬約900 余頭，該豬場(chǎng)為自繁自養(yǎng)模式。2019 年11 月初，由于天氣突然降溫，其中一棟?rùn)谏岵糠直Ｓi發(fā)病，病豬主要臨床癥狀包括體溫升高（約40 ℃）、精神沉郁、采食量下降、少部分發(fā)病嚴(yán)重的病豬咳嗽、呼吸困難、且四肢關(guān)節(jié)腫脹，臥躺在地，不愿合群。

2 病理變化與樣品采集

對(duì)死亡不久的病豬進(jìn)行解剖，其腹股溝淋巴結(jié)和頜下淋巴結(jié)腫大，且切面多汁；胸腔內(nèi)蓄積大量渾濁液體，且肺部實(shí)變，肺部表面組織與腹腔黏連，大量纖維狀物質(zhì)滲出；剖開(kāi)腫脹關(guān)節(jié)，有大量清亮積液流出。

無(wú)菌采集病變明顯組織器官，如淋巴結(jié)和肺臟等，并分別收集腹腔和關(guān)節(jié)處積液，分別標(biāo)記后，進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室診斷。

3 實(shí)驗(yàn)室診斷

3.1 細(xì)菌性病原檢測(cè)

3.1.1 細(xì)菌分離培養(yǎng)與鑒定

取適量病變組織和積液入滅菌研缽，用滅菌眼科剪將組織充分剪碎，其后以1:10 比例加入無(wú)菌生理鹽水，充分混勻后用無(wú)菌紗布過(guò)濾；用滅菌接種環(huán)蘸取少量過(guò)濾液分別在普通瓊脂培養(yǎng)基和10%乳牛血清的TSA 培養(yǎng)基表面平板劃線，放置于37 ℃恒溫箱內(nèi)培養(yǎng)，分別于24 h 和48 h 觀察平板培養(yǎng)基表面菌落生長(zhǎng)情況。結(jié)果：普通瓊脂培養(yǎng)基表明無(wú)任何菌落生長(zhǎng)，而TSA 培養(yǎng)基表面出現(xiàn)露珠狀、透明而光滑的菌落。將單一菌落均勻涂抹在玻璃片上，以革蘭氏染色法對(duì)樣品進(jìn)行處理，其后油鏡下觀察菌落形態(tài)：菌株為革蘭氏陰性菌，形態(tài)為單個(gè)或成對(duì)絲狀桿菌。

3.1.2 小鼠致病性試驗(yàn)與藥敏試驗(yàn)

用滅菌牙簽隨機(jī)挑取3 個(gè)菌落接種于TSB 培養(yǎng)基，37 ℃培養(yǎng)24 h，其后將菌液（100 μL）腹腔注射至5 只健康小鼠體內(nèi)（試驗(yàn)組I、II 和III），并設(shè)置對(duì)照組（注射等體積生理鹽水），觀察不同組小鼠存活情況。結(jié)果發(fā)現(xiàn)3 組試驗(yàn)組小鼠死亡率高達(dá)100.0%、100.0%和80.0%，而對(duì)照組小鼠一直存活，且將試驗(yàn)組小鼠病變組織處理后染色鏡檢，菌株形態(tài)和大小與之前檢測(cè)結(jié)果一致，說(shuō)明小鼠是因感染副豬嗜血桿菌而死亡，同時(shí)本次試驗(yàn)分離的副豬嗜血桿菌分離株均為強(qiáng)毒株。

將其中一株副豬嗜血桿菌強(qiáng)毒株進(jìn)行擴(kuò)增培養(yǎng)，同時(shí)用L 型玻棒將適當(dāng)濃度菌液均勻涂抹在固體培養(yǎng)基表面，于37 ℃干燥2 ～3 min，其后將14 種不同藥敏紙片貼在培養(yǎng)基表面（4 種紙片/培養(yǎng)基），并固定。將培養(yǎng)基放在37 ℃恒溫箱內(nèi)培養(yǎng)，24 h 后判定菌株對(duì)不同抗生素的敏感性。藥敏試驗(yàn)結(jié)果顯示：菌株對(duì)頭孢噻呋、氟苯尼考、氧氟沙星、阿莫西林和卡那霉素高度敏感，對(duì)阿米卡星、頭孢氨芐、新霉素、鏈霉素和四環(huán)素中敏，對(duì)環(huán)丙沙星、諾氟沙星、慶大霉素和青霉素高度耐藥。

3.2 病毒性病原檢測(cè)

取發(fā)病明顯組織，適當(dāng)處理用商用試劑盒提取組織DNA 和RNA 核酸，并用核轉(zhuǎn)錄試劑盒將RNA反轉(zhuǎn)錄為cDNA，以DNA 或cDNA 樣品為模板，使用PCR 或RT-PCR 法檢測(cè)樣品中是否存在豬圓環(huán)病毒、豬偽狂犬病毒、豬藍(lán)耳病毒和豬瘟病毒病原。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，被檢樣品中均未檢測(cè)出以上病原，提示發(fā)病豬群未感染以上4 種病毒。

4 防控措施

4.1 緊急治療措施

將病豬與假定健康豬隔離飼養(yǎng)，對(duì)發(fā)病豬群肌肉注射氟苯尼考，其用藥量為15 mg/kg，每日1 次，連續(xù)用藥4 d；在飼料中添加阿莫西林，對(duì)全豬進(jìn)行飼喂，每噸飼料中添加阿莫西林1 kg，連續(xù)用藥7 d。

4.2 其它處理措施

飼料中添加適量黃芪多糖和多維等，旨在提高豬群抗病能力；將病死豬群進(jìn)行深埋，并無(wú)害化處理；全場(chǎng)進(jìn)行衛(wèi)生打掃，并用2%濃度氫氧化鈉溶液對(duì)全場(chǎng)進(jìn)行噴灑消毒，2 ～3 h 后用大量清水對(duì)消毒劑進(jìn)行稀釋，每日1 次，連續(xù)消毒4 d；在豬場(chǎng)走廊撒生石灰，進(jìn)行消毒。

連續(xù)實(shí)施以上治療與防控措施1 周后，疫情得到明顯控制。

5 討論

副豬嗜血桿菌嚴(yán)重危害我國(guó)養(yǎng)豬業(yè)發(fā)展，是導(dǎo)致保育豬死亡的主要細(xì)菌性疾病之一，由于其臨床及病理變化明顯，根據(jù)其臨床癥狀可對(duì)本病做出初步判斷，但進(jìn)一步確診還需要實(shí)驗(yàn)室診斷技術(shù)。由于該菌株含有多種血清型，不同血清型菌株對(duì)抗生素耐藥情況不同，所以需要根據(jù)藥敏試驗(yàn)結(jié)果選擇對(duì)菌株敏感的藥物對(duì)疫病進(jìn)行治療。

本次案例中將副豬嗜血桿菌菌株進(jìn)行分離與鑒定，并隨機(jī)篩取3 株菌株進(jìn)行小白鼠接種，確定分離菌株的高致病性，其后對(duì)高致病的菌株進(jìn)行藥敏試驗(yàn)，根據(jù)藥敏試驗(yàn)結(jié)果選擇菌株高度敏感的氟苯尼考和阿莫西林作為抗病藥物，同時(shí)提高豬群飼養(yǎng)管理水平，最終使疫情得到有效控制。