鋅指E盒結(jié)合蛋白1在子宮內(nèi)膜癌患者中的表達(dá)及意義

郭佳義

(北京積水潭醫(yī)院婦產(chǎn)科，北京 100096)

子宮內(nèi)膜癌是臨床常見的惡性腫瘤，占女性生殖系統(tǒng)惡性腫瘤的20%～30%，其中以腺癌發(fā)病率最高。外源性激素類藥物、放射線污染、感染等均與子宮內(nèi)膜癌的發(fā)生、發(fā)展有關(guān)。子宮內(nèi)膜癌好發(fā)于圍絕經(jīng)期和絕經(jīng)后女性，且近幾年其發(fā)病年齡趨向年輕化。目前，關(guān)于子宮內(nèi)膜癌的發(fā)生機(jī)制尚未完全明確[1]。鋅指E盒結(jié)合蛋白1(ZEB1)被發(fā)現(xiàn)與多種腫瘤侵襲有關(guān)[2-3]，包括肝癌、前列腺癌、乳腺癌等多種腫瘤組織中均檢測(cè)出ZEB1的高表達(dá)[4]。目前，國(guó)內(nèi)關(guān)于ZEB1在子宮內(nèi)膜癌中的表達(dá)報(bào)道較少，本研究選取本院2015年1月至2018年6月收治的子宮內(nèi)膜癌患者為研究對(duì)象，通過免疫組織化學(xué)法檢測(cè)ZEB1在子宮內(nèi)膜癌中的表達(dá)情況，分析其與不同臨床病理特征間的關(guān)系，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取本院2015年1月至2018年6月收治的子宮內(nèi)膜癌患者150例為觀察組，另選取同期150例健康體檢者為對(duì)照組。觀察組年齡40～60歲，平均(50.57±3.24)歲；已婚101例，未婚49例；已育123例，未育27例；子宮內(nèi)膜癌臨床分期：Ⅰ期50例，Ⅱ期56例，Ⅲ～Ⅳ期44 例；子宮肌層浸潤(rùn)：浸潤(rùn)深度≥1/2有74例，<1/2 有76例；盆腔淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移28例，未出現(xiàn)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移122例。對(duì)照組年齡40～62歲，平均(50.98±3.87)歲；已婚102例，未婚48例；已育127例，未育23例。納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)對(duì)本研究知情同意，并簽署知情同意書的患者；(2)手術(shù)治療后保存病理切片患者；(3)首次確診患者；(4)病理類型為子宮內(nèi)膜樣腺癌患者；(5)臨床資料完整患者。排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)合并子宮內(nèi)膜增生癥患者；(2)妊娠期、哺乳期患者；(3)盆腔癌、宮頸癌等婦科其他惡性腫瘤患者。觀察組術(shù)后病理結(jié)果均由2名以上病理科醫(yī)師進(jìn)行診斷。根據(jù)國(guó)際婦產(chǎn)科聯(lián)盟制定的子宮內(nèi)膜癌高、中、低分化標(biāo)準(zhǔn)對(duì)觀察組患者標(biāo)本進(jìn)行病理分級(jí)，其中高分化(G1組) 57例，中分化(G2 組)78例，低分化(G3組)15例。G1組年齡42～60歲，平均(50.55±3.20)歲；G2組年齡42～61歲，平均(50.48±3.28)歲；G3組年齡42～61歲，平均(51.58±3.29)歲。觀察組與對(duì)照組年齡、婚育情況等一般資料比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性。

1.2方法

1.2.1檢測(cè)方法 取觀察組150例子宮內(nèi)膜癌組織及對(duì)照組150例正常子宮內(nèi)膜組織進(jìn)行研究，使用10%甲醛固定組織，石蠟包埋后以4 μm厚度連續(xù)切片，貼片后置入80 ℃烤箱內(nèi)脫水，采用免疫組織化學(xué)法檢測(cè)ZEB1，所有步驟必須嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行。具體操作步驟如下：切片脫蠟，配制磷酸鹽緩沖液，抗原修復(fù)，滴加過氧化氫消除內(nèi)源性過氧化物酶，滴加一抗，滴加二抗，DAB顯色，復(fù)染，返藍(lán)，逆梯度乙醇脫水，二甲苯脫水5 min，中性樹脂封片待檢。

1.2.2結(jié)果判讀 ZEB1陽性表達(dá)可位于細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核中，結(jié)果基于染色強(qiáng)度和陽性細(xì)胞占比進(jìn)行判定。染色結(jié)果評(píng)分[5]：染色強(qiáng)度為無顯色、淺黃色、深黃色、棕色分別對(duì)應(yīng)評(píng)分0～3分。陽性細(xì)胞占比評(píng)分[6]：0%、>0%～25%、>25%～50%、>50%～100%分別對(duì)應(yīng)評(píng)分0～3分。根據(jù)染色結(jié)果評(píng)分與陽性細(xì)胞占比評(píng)分的乘積評(píng)價(jià)ZEB1表達(dá)情況：<3分為“-”，表示陰性結(jié)果；3～6分為“+”、7～8分為“++”、9分為“+++”，均表示陽性結(jié)果。

1.3觀察指標(biāo) 比較觀察組與對(duì)照組的ZEB1表達(dá)情況；比較觀察組不同病理分級(jí)患者的ZEB1表達(dá)情況；分析觀察組ZEB1表達(dá)情況與子宮內(nèi)膜癌臨床病理特征的關(guān)系。

2 結(jié) 果

2.1觀察組ZEB1陽性表達(dá)的典型表現(xiàn) 觀察組子宮內(nèi)膜癌組織ZEB1陽性表達(dá)的典型表現(xiàn)為細(xì)胞核中出現(xiàn)淺黃色、深黃色或棕色顆粒。見圖1。

注：A為對(duì)照組正常子宮內(nèi)膜組織ZEB1表達(dá)情況，箭頭顯示ZEB1表達(dá)于內(nèi)膜間質(zhì)；B為觀察組子宮內(nèi)膜癌組織ZEB1表達(dá)情況，箭頭顯示ZEB1表達(dá)于細(xì)胞核中，在腺癌上皮組織內(nèi)無表達(dá)。

圖1 觀察組ZEB1陽性表達(dá)的典型表現(xiàn)

2.2觀察組與對(duì)照組ZEB1表達(dá)情況比較 觀察組ZEB1陽性率為66.67%，明顯高于對(duì)照組的13.33%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表1。

2.3G1、G2、G3組與對(duì)照組ZEB1表達(dá)情況比較 G1、G2、G3組ZEB1陽性率均高于對(duì)照組(P<0.05)；G3組ZEB1陽性率高于G2組與G1組(P<0.05)；G2組ZEB1陽性率高于G1組(P<0.05)。見表2。

表1 觀察組與對(duì)照組ZEB1表達(dá)情況比較[n(%)]

注：與對(duì)照組比較，aP<0.05。

表2 G1、G2、G3組與對(duì)照組ZEB1表達(dá)情況比較[n(%)]

注：與對(duì)照組比較，aP<0.05；與G1組比較，bP<0.05；與G2組比較，cP<0.05。

2.4觀察組ZEB1表達(dá)情況與子宮內(nèi)膜癌臨床病理特征的關(guān)系 觀察組腫瘤分期越高、肌層浸潤(rùn)深度越深、存在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者的ZEB1陽性率越高(P<0.05)。見表3。

表3 觀察組ZEB1表達(dá)情況與子宮內(nèi)膜癌臨床病理特征的關(guān)系[n(%)]

3 討 論

子宮內(nèi)膜癌是一種常見的婦科惡性腫瘤，源于內(nèi)膜上皮組織[7]，近年來其發(fā)病率有逐年上升趨勢(shì)[8]。子宮內(nèi)膜癌發(fā)生機(jī)制與雌激素依賴有關(guān)，多見于絕經(jīng)后女性，早期診斷和治療是延長(zhǎng)生存時(shí)間的重要措施。ZEB1是一種鋅指結(jié)構(gòu)的轉(zhuǎn)錄抑制因子，是微小RNA-200c(miR-200c)下游的靶基因之一，在腫瘤發(fā)生中受miR-200c的負(fù)調(diào)控[9]。鄭國(guó)旭等[10]研究發(fā)現(xiàn)，直腸癌患者的直腸黏膜與健康人群的直腸黏膜相比，ZEB1表達(dá)上調(diào)明顯。沈曉萍等[11]的1項(xiàng)體外研究顯示，下調(diào)ZEB1的表達(dá)可以明顯降低胃癌細(xì)胞的侵襲、轉(zhuǎn)移特性。本研究對(duì)150例子宮內(nèi)膜癌患者及健康對(duì)照者用免疫組織化學(xué)法進(jìn)行了ZEB1表達(dá)情況檢測(cè)，結(jié)果顯示，觀察組ZEB1陽性率為66.67%，明顯高于對(duì)照組的13.33%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，提示ZEB1的表達(dá)與子宮內(nèi)膜癌的發(fā)生可能具有密切聯(lián)系。陳麗娟等[12]研究發(fā)現(xiàn)，子宮內(nèi)膜癌的發(fā)生、發(fā)展與ZEB1不平衡表達(dá)有一定關(guān)系，與本研究結(jié)果類似。

本研究對(duì)觀察組不同病理分級(jí)子宮內(nèi)膜癌患者的ZEB1表達(dá)情況進(jìn)行比較發(fā)現(xiàn)，G1、G2、G3組ZEB1陽性率均高于對(duì)照組(P<0.05)；且隨著子宮內(nèi)膜癌病理分級(jí)升高，ZEB1陽性率也逐漸升高。1項(xiàng)大鼠模型試驗(yàn)結(jié)果顯示，轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子ZEB1表達(dá)上調(diào)的過程與上皮鈣黏蛋白(E-cadherin)的轉(zhuǎn)錄阻遏過程具有密切聯(lián)系，ZEB1是E-cadherin直接轉(zhuǎn)錄的重要抑制物[13]，ZEB1在人類腫瘤細(xì)胞中的表達(dá)水平與 E-cadherin抑制程度密切相關(guān)，而E-cadherin抑制越強(qiáng)烈，上皮細(xì)胞就會(huì)逐漸失去上皮表型。RNA水平下介導(dǎo)ZEB1表達(dá)下調(diào)能夠使E-cadherin表達(dá)去阻遏，細(xì)胞間的連接逐漸恢復(fù)[14]，這充分提示ZEB1 在子宮內(nèi)膜癌變過程中扮演著重要角色。本研究結(jié)果顯示，觀察組腫瘤分期越高、存在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、肌層浸潤(rùn)深度越深的患者ZEB1陽性率越高。分析其原因如下：ZEB家族包含ZEB1與ZEB2 兩個(gè)成員，是細(xì)胞核轉(zhuǎn)錄因子的重要組成部分，都具有C端鋅指簇與N端鋅指簇，鋅指簇中都具有能結(jié)合E-cadherin基因啟動(dòng)子中E2盒[CCACCT(G)]的特殊序列[15]。ZEB1兩個(gè)鋅指簇間可能存在蛋白與蛋白相互作用的同源結(jié)構(gòu)域，這些特殊序列能與E-cadherin啟動(dòng)子中E2 盒特異性結(jié)合，通過抑制E-cadherin轉(zhuǎn)錄對(duì)細(xì)胞上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化過程產(chǎn)生誘導(dǎo)作用，從而增強(qiáng)細(xì)胞的轉(zhuǎn)移、侵襲能力[16]。

4 結(jié) 論

ZEB1在子宮內(nèi)膜癌組織中呈高表達(dá)，且子宮內(nèi)膜癌病理分級(jí)越高，ZEB1陽性率越高；不同腫瘤分期、浸潤(rùn)深度及有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者的ZEB1表達(dá)具有明顯差異。ZEB1可能參與了子宮內(nèi)膜癌的發(fā)生與發(fā)展過程，是子宮內(nèi)膜癌診斷、治療的潛在標(biāo)志物。