UPLC法測定廣西莪術(shù)、醋莪術(shù)及其水提藥渣中莪術(shù)烯醇含量

梁志毅，梁麗金，曾昭君，魏 梅，雷玉婧，林偉雄

(廣東一方制藥有限公司 廣東省中藥配方顆粒企業(yè)重點實驗室，廣東 佛山 528244)

莪術(shù)來源于姜科植物蓬莪術(shù)(CurcumaphaeocaulisVal.)、廣西莪術(shù)(CurcumakwangsiensisS. G. Lee et C. F. Liang)或溫郁金(習(xí)稱“溫莪術(shù)”，CurcumawenyujinY. H. Chen et C. Ling)的干燥根莖[1]。廣西莪術(shù)是廣西的道地藥材，辛、苦、溫，歸肝、脾經(jīng)，具有行氣破血、消積止痛之功效，用于治療癥瘕痞塊、瘀血經(jīng)閉、胸痹心痛、食積脹痛、早期宮頸癌等[1]。莪術(shù)的主要成分為姜黃素類和莪術(shù)烯醇、莪術(shù)二酮、吉瑪酮等，具有活血化瘀、行氣活血、消炎止痛、祛腐生肌的作用。莪術(shù)經(jīng)醋炮制后，活血化瘀、止痛作用增強[2-3]。揮發(fā)油中莪術(shù)烯醇等倍半萜類有效成分是姜科植物抗腫瘤、抗炎、抗菌作用的主要生物活性物質(zhì)[4-6]，《中華人民共和國藥典》中將揮發(fā)油含量作為莪術(shù)質(zhì)量的評價指標(biāo)，但由于莪術(shù)烯醇等倍半萜類物質(zhì)極性較小，使得水提-濃縮-噴霧干燥方式制備的提取物中莪術(shù)烯醇轉(zhuǎn)移率較低，表明了莪術(shù)烯醇等倍半萜類成分在提取階段較難揮發(fā)收集，且揮發(fā)油測定法誤差較大，采用一般分析方法不能最大限度地反映藥材中莪術(shù)烯醇等倍半萜類有效成分的真實含量。因此，作者建立莪術(shù)烯醇含量測定的UPLC法，比較廣西莪術(shù)、醋莪術(shù)及其水提藥渣中莪術(shù)烯醇含量的差異性；同時采用不同方式對水提藥渣進(jìn)行干燥與保存研究，為水提藥渣的保存和二次利用提供參考和理論依據(jù)。

1 實驗

1.1 材料、試劑與儀器

莪術(shù)藥材(批號：YG1905003、YG1905004、YG1905005)，主要采自廣西，經(jīng)廣東一方制藥有限公司魏梅主任藥師鑒定為姜科植物廣西莪術(shù)的干燥根莖。

莪術(shù)烯醇對照品(批號：D-026-170420)，含量98%，成都瑞芬思生物科技有限公司；乙腈(批號：SY21803010)，色譜純，默克公司；磷酸(批號：20180404)，色譜純，天津科密歐化學(xué)試劑有限公司；其它試劑均為分析純；水為超純水。

H-Class型超高效液相色譜儀、TUV檢測器、Empower工作站，Waters公司；ME204E型萬分之一天平、XP26型百萬分之一天平，梅特勒-托利多公司；111B型二兩裝高速中藥粉碎機，浙江瑞安永歷制藥機械有限公司；數(shù)控KQ-500DE型超聲清洗器，昆山超聲儀器有限公司；MiliQ Direct 8型超純水機，默克密理博；DHG-9146A型電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱，上海精宏實驗設(shè)備有限公司。

1.2 方法

1.2.1 對照溶液的制備

精密稱定莪術(shù)烯醇對照品適量，置于25 mL容量瓶中，加入甲醇配成422 μg·mL-1莪術(shù)烯醇儲備液；精密吸取儲備液1 mL于10 mL容量瓶中，加入甲醇定容至刻度，即得42.2 μg·mL-1莪術(shù)烯醇對照溶液。

1.2.2 供試溶液的制備

取樣品粉末(過4號篩得到)約1 g，精密稱定，置于具塞錐形瓶中，精密加入70%甲醇25 mL，稱重；超聲處理(功率250 W，頻率40 kHz)30 min，放冷，再稱重，用70%甲醇補足；搖勻，過濾，即得供試溶液。

1.2.3 色譜條件

Waters ACQUITY UPLC BEH Shield RP C18色譜柱(2.1 mm×150 mm，1.7 μm)；流動相為乙腈-0.1%磷酸溶液(44∶56，體積比)，等度洗脫；柱溫35 ℃；檢測波長262 nm；流速0.3 mL·min-1，進(jìn)樣量1 μL。

2 結(jié)果與討論

2.1 UPLC圖譜(圖1)

圖1 廣西莪術(shù)及其水提藥渣的UPLC圖譜Fig.1 UPLC spectra of Curcuma kwangsiensis and water extract residues

2.2 線性關(guān)系考察

分別精密吸取莪術(shù)烯醇儲備液10 μL、50 μL、150 μL、350 μL、600 μL、850 μL，置于1 mL容量瓶中，加入甲醇得到濃度分別為4.22 μg·mL-1、21.10 μg·mL-1、63.30 μg·mL-1、147.70 μg·mL-1、253.20 μg·mL-1、358.70 μg·mL-1的莪術(shù)烯醇對照溶液。按色譜條件進(jìn)樣測定，以莪術(shù)烯醇濃度(x)為橫坐標(biāo)、峰面積(y)為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，擬合得莪術(shù)烯醇的線性回歸方程為：y=5370x-20200，R=0.9998。表明，莪術(shù)烯醇濃度在4.22～358.70 μg·mL-1范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好。

2.3 精密度實驗

精密吸取供試溶液，按色譜條件連續(xù)進(jìn)樣6次，測定峰面積。計算莪術(shù)烯醇峰面積RSD為0.18%，表明該儀器精密度良好。

2.4 重復(fù)性實驗

取同一批次樣品粉末6份，精密稱定，按1.2.2方法制備供試溶液，按色譜條件進(jìn)樣測定。計算莪術(shù)烯醇含量RSD為0.95%，表明該方法重復(fù)性良好。

2.5 穩(wěn)定性實驗

精密吸取同一供試溶液，分別在0 h、1 h、2 h、3 h、5 h、7 h、9 h按色譜條件進(jìn)樣測定。計算莪術(shù)烯醇峰面積RSD為0.26%，表明供試溶液中莪術(shù)烯醇在9 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.6 加標(biāo)回收率實驗

取已測定含量的樣品粉末約0.5 g，精密稱定，精密加入一定量的莪術(shù)烯醇對照品，按1.2.2方法制備供試溶液9份，按色譜條件進(jìn)樣測定。計算莪術(shù)烯醇平均加標(biāo)回收率為97.71%，RSD為2.83%(表1)，表明該方法回收率良好。

表1 加標(biāo)回收率實驗結(jié)果(n=9)

Tab.1 Results of adding standard recovery experiment(n=9)

序號樣品質(zhì)量g樣品中含量mg對照品加量mg測得量mg加標(biāo)回收率%平均加標(biāo)回收率%RSD%10.49243.0381.484.41492.9720.50133.0931.484.49995.0030.50043.0871.484.49194.8640.50213.0982.955.97097.3650.50153.0942.956.03299.5997.712.8360.50343.1062.956.04999.7670.50273.1024.427.542100.4580.50413.1104.427.52099.7790.50263.1014.427.50499.62

2.7 樣品測定

分別取3批(編號為S1、S2、S3)廣西莪術(shù)飲片、3批(編號為S4、S5、S6)醋莪術(shù)飲片及其水提后經(jīng)過不同溫度干燥所得藥渣樣品，按1.2.2方法制備供試溶液，按色譜條件進(jìn)樣測定，結(jié)果見表2。

表2 廣西莪術(shù)、醋莪術(shù)飲片及其水提藥渣中的莪術(shù)烯醇含量/%

Tab.2 Curcumenol content in Curcuma kwangsiensis,vinegar-boiled Curcuma kwangsiensis,and water extract residues/%

從表2可知，不同干燥溫度下，廣西莪術(shù)與醋莪術(shù)的水提藥渣中莪術(shù)烯醇含量變化較小，隨著干燥溫度的升高，莪術(shù)烯醇含量僅呈略微上升趨勢。說明干燥時間對莪術(shù)烯醇等倍半萜類的影響強于干燥溫度(≤80 ℃)的影響。采用80 ℃快速烘干藥渣可縮短藥渣受熱時長、快速有效地減少水分，不僅有利于有效成分的保留，而且也有利于水提藥渣后期的保存，為水提藥渣的更好利用奠定了基礎(chǔ)。

不同溫度干燥的水提藥渣中莪術(shù)烯醇含量與飲片中莪術(shù)烯醇含量的比值見表3。

表3 不同溫度干燥的水提藥渣中莪術(shù)烯醇含量與飲片中莪術(shù)烯醇含量的比值/%

Tab.3 Proportion of curcumenol content between in water extract residues dried at different temperatures and in decoction pieces/%

從表3可知，3批不同溫度干燥的廣西莪術(shù)水提藥渣中莪術(shù)烯醇含量與對應(yīng)批次飲片中莪術(shù)烯醇含量的比值分別為：53%、48%、50%，均值為50%；3批不同溫度干燥的醋莪術(shù)水提藥渣中莪術(shù)烯醇含量與對應(yīng)批次飲片中莪術(shù)烯醇含量的比值分別為：50%、41%、41%，均值為44%。表明，廣西莪術(shù)與醋莪術(shù)經(jīng)水提后，分別約有50%和44%的莪術(shù)烯醇?xì)埩粼谒幵?，含量很高，具有較大利用價值，可進(jìn)行二次開發(fā)利用。

2.8 干燥方式對水提藥渣中含水量的影響

取3批廣西莪術(shù)藥材，分別按《中華人民共和國藥典》莪術(shù)項下醋莪術(shù)炮制方法，采用醋煮法煮至透心，炮制醋莪術(shù)飲片；同時制備廣西莪術(shù)飲片。分別在廣西莪術(shù)和醋莪術(shù)飲片中加入飲片投料量14倍量水，采用水提法單煎提取1.5 h；所得藥渣分別進(jìn)行曬干7.9 h、50 ℃烘干8.8 h、60 ℃烘干7.8 h、70 ℃烘干6.2 h、80 ℃烘干5.4 h處理；打粉，過4號篩，裝入自封袋中置于干燥器內(nèi)保存；取樣測定含水量，比較干燥方式對水提藥渣中含水量的影響，結(jié)果見表4。

表4 干燥方式對水提藥渣中含水量的影響

Tab.4 Effect of drying method on water content in water extract residues

從表4可知，3批廣西莪術(shù)及醋莪術(shù)的水提藥渣含水量在5.36%～13.80%之間，且隨著干燥溫度的升高、干燥時間的延長，含水量逐漸降低。個別樣品由于烘箱不同位置通風(fēng)效果和實際溫度不同，含水量變化趨勢出現(xiàn)波動。表明，干燥溫度越高，含水量越低，越有利于水提藥渣的后期保存和二次利用。

3 結(jié)論

建立了莪術(shù)烯醇含量測定的UPLC法，比較了廣西莪術(shù)、醋莪術(shù)及其水提藥渣中莪術(shù)烯醇含量的差異性。結(jié)果表明，廣西莪術(shù)和醋莪術(shù)水提藥渣中莪術(shù)烯醇含量分別是廣西莪術(shù)和醋莪術(shù)飲片中莪術(shù)烯醇含量的50%、44%，水提藥渣中莪術(shù)烯醇含量仍然很高，具有較大利用價值，可根據(jù)需求進(jìn)行二次開發(fā)與利用；不同干燥溫度對水提藥渣中莪術(shù)烯醇含量的影響較小，采用80 ℃快速烘干藥渣可縮短藥渣受熱時長、快速有效地減少水分，不僅有利于有效成分的保留，而且也有利于水提藥渣后期的保存，為水提藥渣的更好利用奠定了基礎(chǔ)。UPLC法測定莪術(shù)中莪術(shù)烯醇含量具有較好的精密度、重復(fù)性、穩(wěn)定性，可用于莪術(shù)及炮制品的質(zhì)量控制，為水提藥渣的資源化利用提供科學(xué)依據(jù)。