甲醇乙腈復合流動相在農(nóng)藥殘留領域研究進展

盛建軍 羅 建 羅少輝

(1.江西省環(huán)境保護科學研究院，江西 南昌 330039；2.江西省化學工業(yè)研究所，江西 南昌 330029)

1 引言

復合流動相對于高效液相色譜分析領域具有非常重要的意義，把甲醇和乙腈作為流動相的各種雜亂無章的檢測標準統(tǒng)一起來，以此解決高效液相色譜中許多疑難雜癥，并能極大提高檢測效率和節(jié)約成本。

2 為什么要用甲醇乙腈復合流動相

2.1 在實際檢測工作中，我們會同時收到大量樣品和各種檢測標準，標準制定者往往沒有考慮到一線檢測人員需要頻繁更換流動相，導致工作量巨大。統(tǒng)一用甲醇-乙腈復合流動相能夠大大減輕一線檢測人員的負擔，統(tǒng)一流動方法對一線檢測人員就有重大的幫助意義。

2.2 根據(jù)我們現(xiàn)有甲醇乙腈復合流動相的實驗成果，再通過大量試驗數(shù)據(jù)證明其普遍性、通用性后，許多國標和企標檢測方法將得到修正、補充和參考，對于分析化學領域和標準制定領域來說是具有非常重要的意義。

3 研究內(nèi)容和目標

3.1 研究內(nèi)容

3.1.1 通過對甲醇和乙腈的物理化學性質(zhì)的深入研究，其中包括液體運動黏度、核電荷數(shù)、分子大小、溶解熱、分子極性等，以此反向研究甲醇乙腈復合流動相特殊性。

3.1.2 使用復合流動相方法，采用最簡單、基本的高效液相色譜儀對幾種農(nóng)藥混合標樣進行特殊的梯度法定性定量分析，建立針對該儀器各組分色譜圖出峰時間和DAD圖譜庫。

3.1.3 為進一步確認該方法的普遍性，我們對標樣(樣品)都用復合流動相法和國標法(行業(yè)、企業(yè)標準法)兩種方法進行試驗，且將試驗數(shù)據(jù)和計算結果進行了對比，在后面研究方法中我們都將會列出詳細圖譜和試驗數(shù)據(jù)。

3.2 研究目標

3.2.1 通過研究復合有機流動相在實際檢測中縮短檢測時間，提高檢測效率，節(jié)約流動相成本，將出峰異常率降到最低，免去了摸索各種適合條件的時間。

3.2.2 用梯度分析法改變流動相比率和檢測波長，建立多種農(nóng)藥出峰時間和特異性曲線(DAD)數(shù)據(jù)庫，以此運用于農(nóng)藥殘留。

3.2.3 將復合流動相理論推廣至分析檢測其他應用領域如：化工生產(chǎn)、食品藥品監(jiān)督、保健品、生物化學研究、醫(yī)藥學、病理學研究等。

4 研究方法和技術路線

4.1 經(jīng)參考大量文獻，根據(jù)研究甲醇乙腈極性及大量實驗數(shù)據(jù)，本項目統(tǒng)一有機流動相標準為A(甲醇：乙腈=1：1)，甲醇大致相當89%乙腈洗脫能力，故以此比例換算純甲醇或純乙腈作為有機流動相檢測標準。

4.2 選出典型幾種常用農(nóng)藥進行試驗。產(chǎn)品名錄如下：吡蚜酮、噻呋酰胺、嘧菌酯、己唑醇。

4.3 用復合有機流動相分析法對上述農(nóng)藥混合標樣進行分析，建立各組分出峰時間表和DAD數(shù)據(jù)庫。

4.5 通過試驗數(shù)據(jù)來證明甲醇乙腈復合有機流動相液相色譜分離法的準確性。

5 試驗部分

5.1 試驗條件：Agilent1200高效液相色譜儀；色譜柱：250X4.6mm(i.d.)不銹鋼柱(內(nèi)裝Tc-C18填料)；流速1mL/min；進樣體積20μL。

5.2 在用企業(yè)標準檢混配懸浮劑時出現(xiàn)了噻呋酰胺鼓峰問題，經(jīng)試驗用復合有機流動相方法將問題解決，并且提高了檢測精密度。圖1為企業(yè)標準噻呋·己唑醇典型色譜圖，圖2為本項目通用有機流動相檢測法典型色譜圖，可以看出圖2修正了圖1色譜圖鼓峰情況。

(Agilent 1200 HPLC，Agilent Tc-C18不銹鋼柱，流速1mL/min，檢測波長225nm，進樣體積20μL，噻呋酰胺溶度約0.1g/L甲醇溶液，己唑醇溶度約0.03g/L甲醇溶液)

(Agilent 1200 HPLC，Agilent Tc-C18不銹鋼柱，流速1mL/min，檢測波長225nm，進樣體積20μL，噻呋酰胺溶度約0.1g/L甲醇溶液，己唑醇溶度約0.03g/L甲醇溶液)

5.3 在用國標法甲醇流動相檢測噻蟲·吡蚜酮時，操作條件：吡蚜酮出現(xiàn)鬼峰，采用甲醇乙腈復合有機流動相后成功解決了鬼峰情況，并且有效的將噻蟲嗪和吡蚜酮分離，計算結果在控制標準范圍內(nèi)。如圖3為國標法檢測出吡蚜酮鬼峰色譜圖，圖4為吡蚜酮正常出峰典型色譜。

(Agilent 1200 HPLC，Agilent Tc-C18不銹鋼柱，流速1mL/min，檢測波長265nm，進樣體積20μL，噻蟲嗪和吡蚜酮溶度均約0.1g/L乙腈水混合溶液)

(Agilent 1200 HPLC，Agilent Tc-C18不銹鋼柱，流速1mL/min，檢測波長265nm，進樣體積20μL，噻蟲嗪和吡蚜酮溶度均約0.1g/L乙腈水混合溶液)

5.4 在檢測25%嘧菌酯水分散粒劑時候，我們發(fā)現(xiàn)用HG/T 4931-2016《嘧菌酯水分散粒劑》檢測出一雜峰并拖尾，最后我們使用甲醇乙腈復合有機流動相法將其分離，所得結果比直接采用行標法計算結果更為精準 。圖5為國標法嘧菌酯典型色譜圖，圖6為甲醇乙腈復合有機流動相典型色譜，可以看出圖6成功將圖5種的拖尾峰分離出來。

(Agilent 1200 HPLC，Agilent Tc-C18不銹鋼柱，流速1mL/min，檢測波長254nm，進樣體積20μL，嘧菌酯約0.1g/L乙腈水混合溶液)

(Agilent 1200 HPLC，Agilent Tc-C18不銹鋼柱，流速1mL/min，檢測波長254nm，進樣體積20μL，嘧菌酯約0.1g/L乙腈水混合溶液)

5.6 對嘧菌酯、噻蟲·吡蚜酮、噻呋·己唑醇三種農(nóng)藥樣品用國標法、企標法進行檢測的時間與本項目通用有機流動相檢測時間進行對比，最終統(tǒng)計出國標企標法12小時左右，通用有機流動相方法6小時左右，其中國標法和企標法消耗的大量時間集中在更換流動相時洗柱時間，還有噻蟲·吡蚜酮條件不適合，摸索條件浪費了大量時間。由此可知我們本次試驗的復合有機流動相，提高了檢測效率是顯而易見的。

6 結論

甲醇乙腈復合有機流動相對國標(行標、企標)起了修正、參考、補充作用；該方法能大大提高檢測效率和降低檢測成本，用在復雜組分梯度法定性時，還能降低了檢測門檻，可用高效液相色譜儀替代質(zhì)譜儀。