玉環(huán)剪豆地方性種質資源鑒定評價

沈文英 屠昌鵬 陳涵豐 龔 芬 王建軍

（1.浙江省玉環(huán)市農業(yè)農村和水利局，浙江 玉環(huán)317600；2.浙江省農業(yè)科學院作物與核技術利用研究所，浙江 杭州310021）

玉環(huán)剪豆是一種軟莢豌豆，為浙江省玉環(huán)市地方特色蔬菜品種，在當?shù)胤N植歷史悠久，因使用剪刀采收豆莢而得名。玉環(huán)剪豆的嫩莢色澤翠綠，口感清脆，鮮美爽口，可炒食、做菜飯，且熟性強。玉環(huán)剪豆生長勢強，適應性廣，易種植（不用搭支架），秋末采收上市，可填補蔬菜市場供應淡季，經濟效益較高。收獲后殘留的豆莢莖和葉可用作飼料或綠肥。

1 特征特性

玉環(huán)剪豆根系發(fā)達，可深入土壤層1 m以下，有根瘤菌；莖半直立，偶爾發(fā)生分枝，莖長約1 m、圓形中空；葉互生為羽狀復葉，小葉2～3對，頂端呈卷須狀，葉柄與莖交界處有2片托葉，葉片表面有明顯不規(guī)則白色斑點及蠟粉；始花一般在主蔓上，花蝶形紫紅色，每節(jié)葉腋獨立，葉腋花青斑明顯；主蔓可生10個莢以上，豆莢扁長綠色、長寬比為5∶1，平均莢長6 cm、寬1.2 cm；嫩莢百莢重約150 g，腹側縫隙兩側單行，鮮莢壁較其他剪豆品種薄，熟豆莢干縮，種子呈皺粒狀，種皮有小褐色斑點，千粒重為232.15 g。

2 栽培要點

玉環(huán)剪豆播種期和鮮莢采摘期較長，玉環(huán)地區(qū)8月至翌年1月均可播種。10月份播種，翌年1月開始開花，嫩豆一直可采收至4月份，嫩莢產量300～400 kg/667 m2，高的可達500 kg/667 m2以上；8月上旬播種，10月份開始采收豆莢，采收至翌年2～3月，可采收10次以上。播種早，采收豆莢批次多，產量高。若肥水供應充足，植株基部可再抽生分枝，分枝可繼續(xù)結莢，有利于延長豆莢采收期和提高豆莢產量。玉環(huán)剪豆主要以嫩莢供食用，嫩莢自下而上逐漸成熟，需及時采收。一般開花后10 d左右，莢壁微凸、籽粒還沒完全發(fā)育時采摘（每3 d采收1次），此時莢色嫩綠，莢殼肥嫩，品質最佳。采摘過早產量低，采摘過晚則籽粒中淀粉含量增高，鮮味下降。嫩莢采收后不可長時間置于袋子內，以免嫩莢因呼吸作用變色而降低商品性[1]。

3 DNA指紋圖譜構建

為鑒定與評價玉環(huán)剪豆與其他剪豆品種的差異性，顯示其地方特色，我們選擇在玉環(huán)地區(qū)具有較大影響力的其他剪豆品種大溪剪豆與玉環(huán)剪豆進行DNA指紋圖譜構建。

3.1 材料與方法

3.1.1 試驗材料

供試材料為大溪剪豆、玉環(huán)剪豆。

3.1.2 試驗方法

（1）基因組DNA提?。喝∵m量玉環(huán)剪豆和大溪剪豆幼嫩葉片，采用CTAB-氯仿-異戊醇法提取剪豆基因組DNA（Liueta1.，2007）。（2）PCR與產物檢測：剪豆PCR反應體系20μL，包括模板DNA（10 ng/μL）2.0μL，10×buffer 2.0μL、dNTPs（10 mmol/L）2.0μL、primer（10 mmol/L）1.0μL、TaqPloymerase（2 U/μL）0.5μL、ddH2O 12.5μL。PCR反應程序為94℃5 min、94℃45 s、51℃45 s、72℃1.5 min，共35循環(huán)；72℃10 min，16℃保存。跑電泳時，瓊脂糖膠濃度為2.5%。

3.2 凝膠電泳結果與分析

利用6對ISSR標記引物（6對ISSR標記引物序列見表1）對玉環(huán)剪豆和大溪剪豆基因組DNA進行PCR擴增鑒定[2～4]。擴增鑒定結果見圖1（每對ISSR標記左側條帶為玉環(huán)剪豆，右側為大溪剪豆）。

表1 6對ISSR標記引物信息

圖1 6對ISSR標記對玉環(huán)剪豆和大溪剪豆的擴增結果

由圖1（凝膠電泳結果）可知，6對ISSR標記引物對玉環(huán)剪豆和大溪剪豆基因組DNA擴增后均表現(xiàn)出差異。其中UBC 807和UBC 825標記在玉環(huán)剪豆中擴增出1條帶，而在大溪剪豆中擴增出2條帶；UBC 8和UBC 861在玉環(huán)剪豆中擴增出2條帶，而在大溪剪豆中擴增出1條帶；UBC 41和UBC 817在玉環(huán)剪豆中擴增出2條帶，而在大溪剪豆中未能擴增出相應的條帶?？梢?，利用以上6對ISSR標記可對玉環(huán)剪豆和大溪剪豆進行指紋圖譜鑒定。2個剪豆品種的DNA擴增結果顯示出其品種間的多態(tài)性差異，突出了玉環(huán)剪豆的地方品種特色。