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    PCR技術(shù)在豬肉中微生物檢測的應(yīng)用探討

    2020-06-22 13:13:59郭麗娜邢宇
    食品安全導(dǎo)刊·下旬刊 2020年4期

    郭麗娜 邢宇

    摘 要:本文在明確PCR技術(shù)主要內(nèi)容與微生物檢測原理的基礎(chǔ)上,從沙氏門菌檢測、大腸桿菌檢測、單核細胞增生李斯特氏菌檢測以及金色葡萄球菌檢測方面入手,闡述了豬肉微生物檢測中PCR技術(shù)的具體應(yīng)用。

    關(guān)鍵詞:豬肉微生物檢測;致病菌;PCR技術(shù)

    在豬肉上市前展開質(zhì)檢極為必要,豬肉微生物檢測的常用方法較多,相比較來說,PCR技術(shù)的靈敏度更高、操作更簡便,值得重點探究。

    1 PCR技術(shù)的簡述

    PCR技術(shù)(聚合酶鏈式反應(yīng))是一種用于放大擴增特定DNA片段的分子生物學(xué)技術(shù),在實際應(yīng)用中,可以將其視為生物體外的DNA復(fù)制,實現(xiàn)微量DNA大幅增加,因此達到確定待檢測物質(zhì)中生物成分的效果。

    2 豬肉微生物檢測中PCR技術(shù)的具體應(yīng)用探究

    2.1 在沙門氏菌檢測中的應(yīng)用

    沙門氏菌是導(dǎo)致國內(nèi)外暴發(fā)食源性疾病的主要病原體,而豬肉為沙門氏菌的重要污染物,因此,在豬肉微生物檢測中實施沙門氏菌檢測極為必要。提取待檢驗豬肉樣本,將其磨成勻漿,低速離心1~2次,剔除大組織塊以及血細胞;在6 000 r/min下離心10 min后展開沙門氏菌DNA檢測。當前,有關(guān)應(yīng)用PCR技術(shù)進行沙門氏菌檢測的研究與實驗較多。例如,在2012年,姚大偉等人[1]依托沙門氏菌ttrBCA基因完成了探針與引物的設(shè)計,并提出了含有擴增內(nèi)標的鮮豬肉沙門氏菌PCR檢測法,使用該方法可以在12 h內(nèi)完成豬肉樣品中沙門氏菌的檢測,有效規(guī)避了假陽性現(xiàn)象;在2016年,王靜等人[2]的研究發(fā)現(xiàn),利用40 μg/mL的疊氮溴化丙錠以及0.1%脫氧膽酸鈉,能夠到達抑制沙門氏菌死菌DNA的PCR擴增,同時不會抑制活菌的PCR擴增,可以實現(xiàn)豬肉中活性沙門氏菌的檢測。

    2.2 在大腸桿菌檢測中的應(yīng)用

    大腸桿菌是全世界公認的重要致病菌,其宿主為豬等家畜。因此,在豬肉微生物檢測中實施大腸桿菌檢測極為必要。提取待檢測豬肉樣本,研磨后加入1 mL無菌生理鹽水,混合均勻后在3 000 r/min下離心20 min,取上清液轉(zhuǎn)入1.5 mL離心管,結(jié)合大腸桿菌純培養(yǎng)物完成PCR檢測。當前,有關(guān)應(yīng)用PCR技術(shù)進行大腸桿菌檢測的研究與實驗較多。例如,在2016年,夏燦等人[3]在研究中使用了大腸桿菌的菌體抗原基因、溶血素基因、鞭毛抗原基因等,并設(shè)計了相應(yīng)的特異性引物及探針,提出了大腸桿菌及其他主要毒力菌的三重熒光定量PCR方法,為利用PCR技術(shù)展開豬肉中大腸桿菌的檢測提供參考。

    2.3 在單核細胞增生李斯特氏菌檢測中的應(yīng)用

    對于單核細胞增生李斯特氏菌來說,其在人體、動物糞便、污水、土壤中廣泛分布,屬于食源性致病菌,一旦感染,會引發(fā)孕婦流產(chǎn)、腦膜炎、食物中毒與敗血癥等問題[4]。同時,單核細胞增生李斯特氏菌在4 ℃的環(huán)境下依舊可以生存與繁殖,是未經(jīng)殺菌處理的冷藏豬肉中的重要致病菌。因此,在豬肉微生物檢測中實施單核細胞增生李斯特氏菌檢測極為必要。

    當前,應(yīng)用PCR技術(shù)進行單核細胞增生李斯特氏菌檢測的研究與實驗較多。例如,在2009年,李慧[5]使用hiyA基因作為靶基因,依托鎖定寡核苷酸、熒光定量PCR技術(shù),完成了3種豬肉樣本中單核細胞增生李斯特氏菌的提取與檢測,且靈敏度較高;在2016年,李丹丹等人[6]利用iap基因作為靶基因,完成了合成引物與Taq Man探針的設(shè)計,提出了具備實時性的、靈敏度達到6.5 cfu/mL的熒光定量PCR快速檢測。這些研究均為使用PCR技術(shù)檢測豬肉中單核細胞增生李斯特氏菌的實現(xiàn)提供了支持。

    2.4 在金色葡萄球菌檢測中的應(yīng)用

    金色葡萄球菌極易引發(fā)人體食物中毒,一旦食品受到金色葡萄球菌污染,即便在經(jīng)過高溫烹煮后依舊存在致病性。有關(guān)調(diào)查結(jié)果顯示[7],在市場抽查中,生肉類產(chǎn)品的金色葡萄球菌檢出率達到18.5%,必須進行重點關(guān)注與處理。而應(yīng)用PCR技術(shù)就能夠達到較好的金色葡萄球菌檢測效果。

    3 總結(jié)

    綜上所述,為了保證人們的飲食安全,必須重點落實豬肉致病微生物檢測,而使用PCR技術(shù)能夠得到更精準的檢測結(jié)果?,F(xiàn)階段,在豬肉中沙氏門菌、大腸桿菌、單核細胞增生李斯特氏菌以及金色葡萄球菌的檢測中,PCR技術(shù)均能夠發(fā)揮出較好的效果,且操作簡單,可以拓展至其他食品的檢測與安全維護中。

    參考文獻

    [1]姚大偉,葉可萍,江蕓,等.生鮮豬肉中含擴增內(nèi)標的沙門氏菌 Real-time PCR 檢測方法的建立[J].江蘇農(nóng)業(yè)學(xué)報,2012,28(04):880-885.

    [2]王靜,張慧敏,魏瑋,等.SD-PMA-ddPCR檢測食品中沙門氏菌的研究[J].食品工業(yè)科技,2016,37(10).

    [3]夏燦,蔣蔚,劉迎春,等.腸出血性大腸桿菌O157∶H7抗原基因及毒力基因多重熒光定量PCR檢測方法的建立[J].畜牧與獸醫(yī),2016,(10):13-21.

    [4]山珊,黃昭鴻,黃艷梅,等.不對稱PCR技術(shù)結(jié)合免疫層析法快速檢測產(chǎn)志賀毒素大腸埃希氏菌[J/OL].食品科學(xué):1-14(2020-03-30)[2020-04-02].http://kns.cnki.net/kcms/detail/11.2206.TS.20200330.1154.024.html.

    [5]李慧.熒光定量PCR檢測豬肉中單核細胞增生性李斯特氏菌的研究[D].河北農(nóng)業(yè)大學(xué),2009.

    [6]李丹丹,徐義剛,李夢圓,等.單核細胞增生李斯特氏菌實時熒光定量PCR快速檢測方法的建立[J].中國畜牧獸醫(yī),2016,43(06):1453-1457.

    [7]史瑩瑩,康雨薇,邵俊鋒,等.實時熒光定量PCR鑒定肉制品中牛源性成分及其含量[J].食品研究與開發(fā),2020,41(6):158-163.

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