淋球菌核酸擴(kuò)增熒光檢測（NG-DNA）在淋病篩查診斷中的應(yīng)用價值探討

楊 秋

（核工業(yè)四一六醫(yī)院皮膚科 四川成都 610051）

淋病指的是由淋球菌感染所引起的一種性傳播疾病，發(fā)病率高居我國性傳播疾病的第二位，不僅嚴(yán)重影響患者的日常生活質(zhì)量，若未得到及時有效的治療，則會并發(fā)男性淋球菌性前列腺炎或女性淋球菌性輸卵管炎，甚至?xí)鸩辉胁挥?，而改善患者預(yù)后的關(guān)鍵在于早發(fā)現(xiàn)、早診斷、早治療。該類患者多以尿頻、尿急、尿痛、生殖道分泌物增多等生殖道感染癥狀為臨床特征，無明顯特異性，常需借助實驗室檢查方法予以確診[1]，而既往，NG-培養(yǎng)法是臨床中篩查診斷淋病的金標(biāo)準(zhǔn)，但具有操作復(fù)雜、周期長等缺點，近年來，隨著臨床檢驗技術(shù)的不斷發(fā)展，新型NG-DNA法在淋病患者篩查診斷中的應(yīng)用越來越廣泛，并獲得普遍認(rèn)可[2]。為進(jìn)一步探討分析NG-DNA法在淋病篩查診斷中的應(yīng)用價值，特選取我院100例患者進(jìn)行對照研究，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2019年1月-2019年12月間我院94例疑似淋病患者及6例確診淋病后復(fù)查患者，疑似病例中男44例，女50例，年齡19-51歲(34.5±11.7)歲，確診病例中男2例，女4例，年齡24-37歲(30.5±3.3)歲。納入標(biāo)準(zhǔn)：①所有患者均符合《淋病診療指南(2014版)》中診斷標(biāo)準(zhǔn)；②確診病例均經(jīng)規(guī)范用藥治療；③對本次研究知情，簽署知情同意書。排除標(biāo)準(zhǔn)：①拒絕入組；②未經(jīng)NG-培養(yǎng)法或NG-DNA檢查。

1.2 儀器與試劑資料 NG-DNA法采用美國Bio-Rad(伯樂)公司的CFX96實時定量PCR儀(聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)儀)，并采用PCR-熒光探針法檢驗，試劑盒由上海之江生物科技股份有限公司提供；NG-培養(yǎng)法采用力康公司的HF212UV二氧化碳培養(yǎng)箱，使用鄭州安圖生物工程股份有限公司的淋球菌瓊脂平板，并分別采用氧化酶試驗、革蘭氏染色法鑒定，試劑分別由杭州濱和微生物試劑有限公司、珠海貝索生物技術(shù)有限公司提供。

1.3 檢驗方法

1.3.1標(biāo)本采集方法。每位患者均由性病實驗室檢驗技師采集2支生殖道分泌物拭子，采集標(biāo)本前2h不排尿，其中男性患者首先用無菌生理鹽水沖洗尿道口，再用無菌棉拭子插入尿道口1-2cm處，輕輕轉(zhuǎn)動2-3周后停留10-20s取出；女性患者清除陰道宮頸口分泌物后，于宮頸口2-3cm處插入無菌棉拭子并輕輕轉(zhuǎn)動2-3周后停留10-20s取出，取出時需注意避免與陰道壁接觸。

1.3.2檢測方法。①NG-培養(yǎng)法：生殖道棉拭子標(biāo)本采集后立即送檢，1h內(nèi)接種于瓊脂平板和選擇性淋球菌培養(yǎng)基，隨后放置于5%二氧化碳培養(yǎng)箱，在37℃恒溫環(huán)境中培養(yǎng)24-48h，最后根據(jù)典型菌落，經(jīng)氧化酶試驗陽性、菌株涂片鏡檢為革蘭氏陰性雙球菌者則判定為陽性；②NG-DNA法：生殖道棉拭子標(biāo)本采集后用1ml0.9%生理鹽水洗脫后，置于-20℃冰箱中保存，檢測時取出并自然平衡至室溫，嚴(yán)格遵照儀器操作規(guī)范及試劑盒說明書進(jìn)行操作與結(jié)果判定。

1.4 觀察指標(biāo) 觀察對比兩種方法陽性檢出率。

2 結(jié)果

兩組診斷陽性率無差異(P>0.05)；確診復(fù)查病例NG-培養(yǎng)法診斷陽性率為0%，NG-DNA法診斷陽性率為100%，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，見表1。

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3 討論

淋病的是我國高發(fā)性傳播疾病，并且經(jīng)流行病學(xué)調(diào)查顯示，該病發(fā)病率呈逐年上升趨勢發(fā)展，已經(jīng)發(fā)展成為重要的公共衛(wèi)生問題，對我國居民身心健康造成嚴(yán)重危害，而快速、準(zhǔn)確檢測淋病病原體淋球菌是指導(dǎo)臨床治療、防止疾病傳播的關(guān)鍵[3]。既往，NG-培養(yǎng)法因具有較高的敏感性與特異性一直被作為篩查診斷淋球菌感染的金標(biāo)準(zhǔn)，但在實踐過程中，存在操作復(fù)雜、檢測耗時長等缺陷，越來越不適用于臨床早期快速篩查診斷，同時該法也會因標(biāo)本采集及保存方法要求高而出現(xiàn)漏診現(xiàn)象。而NG-DNA法是基于熒光定量PCR技術(shù)發(fā)展而來的新興淋球菌檢測法，不僅具有極高的敏感性與特異性，并且自動化操作極大的簡化了NG-培養(yǎng)法的復(fù)雜檢測過程，目前已經(jīng)被廣泛用于淋病的篩查診斷中。通過本次研究發(fā)現(xiàn)，NG-DNA法對94例疑似病例的診斷陽性率為100%，與NG-培養(yǎng)法結(jié)果一致，而對6例復(fù)查病例的診斷陽性率為100%，與NG-培養(yǎng)法的0%有著明顯差異，其原因在于NG-DNA法的檢測靶標(biāo)為淋球菌DNA，而當(dāng)患者經(jīng)有效治療淋球菌死亡后，其DNA仍能于患者機(jī)體穩(wěn)定存在至少3周時間，進(jìn)而會出現(xiàn)假陽性表現(xiàn)。

綜上所述，NG-DNA法在淋病早期篩查診斷中具有操作簡便、準(zhǔn)確率高等優(yōu)勢，可代替常規(guī)NG-培養(yǎng)法予以推廣，但該方法無法代替NG-培養(yǎng)法作為患者判愈標(biāo)準(zhǔn)，臨床應(yīng)合理選擇使用。