MEK通路抑制劑對(duì)人胰腺癌細(xì)胞生長(zhǎng)及細(xì)胞周期相關(guān)抑癌基因表達(dá)

吳小紅

【摘要】目的 探討細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶信號(hào)通路（MEK）通路抑制劑對(duì)人胰腺癌細(xì)胞生長(zhǎng)及細(xì)胞周期相關(guān)抑癌基因表達(dá)的影響。方法 通過(guò)培養(yǎng)人胰腺癌PANC1、CFPAC1細(xì)胞系，用MEK通路抑制劑PD98059處理作為A組，用DMSO處理作為B組，比較兩組用藥后PANC1、CFPAC1細(xì)胞系的細(xì)胞數(shù)、用藥后24 h胰腺癌細(xì)胞周期分布，統(tǒng)計(jì)A組干預(yù)后24h后抑癌基因表達(dá)變化。結(jié)果 用藥3 d、6 d后A組PANC1、CFPAC1細(xì)胞系的細(xì)胞數(shù)低于B組，A組PANC1、CFPAC1細(xì)胞系的G0/G1期細(xì)胞比例高于B組，S期細(xì)胞數(shù)比例低于B組（P<0.05）;A組經(jīng)PD98059干預(yù)后，PANC1、CFPAC1細(xì)胞p16INK4a、P21WAFl、P27K1PlmRNA表達(dá)上升。結(jié)論 MEK通路抑制劑PD98059可能通過(guò)上調(diào)細(xì)胞周期相關(guān)抑癌基因表達(dá)水平，抑制胰腺癌細(xì)胞增殖、細(xì)胞周期進(jìn)展。

【關(guān)鍵詞】MEK通路抑制劑;胰腺癌;抑癌基因

【中圖分類(lèi)號(hào)】R73 【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】A 【文章編號(hào)】ISSN.2095.6681.2020.12..02

胰腺癌是臨床常見(jiàn)惡性腫瘤病癥，近年來(lái)隨著國(guó)民生活方式的轉(zhuǎn)變和生活節(jié)奏的加快，國(guó)內(nèi)胰腺癌發(fā)病率呈不斷升高趨勢(shì)[1]。胰腺癌患者病情隱匿，缺乏典型癥狀，大多數(shù)病例在發(fā)病時(shí)病情已發(fā)展成晚期，生存率較低[2]。本文就細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶信號(hào)通路（MEK）抑制劑對(duì)人胰腺癌細(xì)胞生長(zhǎng)及細(xì)胞周期相關(guān)抑癌基因表達(dá)的影響，旨在為胰腺癌的臨床治療提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料

中科院上海細(xì)胞生物學(xué)研究所提供的人胰腺癌PANC1、CFPAC1細(xì)胞系;美國(guó)Sigma公司提供的MEK通路抑制劑PD98059、DMSO;BIOBASE酶標(biāo)儀;賽默飛Attune NxT流式細(xì)胞儀;BiO-Rad公司提供的無(wú)血清RPMI1640培養(yǎng)基;BIO-RAD TC20自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)器。

1.2 方法

通過(guò)培養(yǎng)人胰腺癌PANC1、CFPAC1細(xì)胞系，用MEK通路抑制劑PD98059處理（加入濃度50 ?mol/LPD98059）作為A組，用DMSO處理（加入濃度50 ?mol/LDMSO）作為B組。培養(yǎng)后1/3/6 d隨機(jī)取三孔，使用細(xì)胞計(jì)數(shù)器完成細(xì)胞數(shù)檢測(cè)。取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞，使用培養(yǎng)基培養(yǎng)24 h以同步化，比較兩組干預(yù)24 h后的細(xì)胞周期，收集兩組細(xì)胞，制作為單細(xì)胞懸液，取2 ml懸液，固定處理后去乙醇后孵育，染色后使用流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞周期，重復(fù)3次。取干預(yù)24 h的兩組細(xì)胞，使用Trizol法完成細(xì)胞總RNA提取，逆轉(zhuǎn)錄為cDNA，使用實(shí)時(shí)熒光定量PCR測(cè)定p16INK4a、P21WAFl、P27K1PlmRNA表達(dá)。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

將數(shù)據(jù)錄至SPSS 23.0，以x2檢驗(yàn)定性資料（%、n），以t檢驗(yàn)定量資料x(chóng)±s，P小于0.05，提示有差異。

2 結(jié) 果

2.1 人胰腺癌細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制情況

根據(jù)檢測(cè)結(jié)果可知兩組使用的藥物對(duì)人胰腺癌細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制效果，不同細(xì)胞系的細(xì)胞數(shù)如下，PANC1：1 d：A組為（17.37±3.83）×105/ml，B組為（16.42±3.17）×105/ml，t=1.351，P=0.090;3 d：A組為（18.47±2.38）×105/ml，B組為（25.53±2.29）×105/ml，t=15.115，P=0.000;6 d：A組為（19.36±2.29）×105/ml，B組為（63.16±6.13）×105/ml，t=47.329，P=0.000。CFPAC1：1 d：A組為（18.50±3.22）×105/ml，B組為（20.02±2.23）×105/ml，t=2.744，P=0.004;3 d：A組為（25.52±3.24）×105/ml，B組為（42.53±3.15）×105/ml，t=26.617，P=0.000;6 d：A組為（41.53±3.72）×105/ml，B組為（120.54±8.69）×105/ml，t=59.103，P=0.000。

2.2 胰腺癌細(xì)胞周期分布對(duì)比

不同細(xì)胞系的細(xì)胞周期分布如下：PANC1：G0/G1期：A組為（72.49±1.57）%，B組為（56.53±1.69）%，t=48.924，P=0.000;S期：A組為（5.14±1.10）%，B組為（14.32±1.31）%，t=37.947，P=0.000;G2/M期：A組為（24.83±3.38）%，B組為（25.16±1.42）%，t=0.636，P=0.263。CFPAC1：G0/G1期：A組為（80.25±1.63）%，B組為（68.22±1.74）%，t=35.678，P=0.000;S期：A組為（6.93±1.16）%，B組為（13.47±1.32）%，t=26.316，P=0.000;G2/M期：A組為（13.26±3.24）%，B組為（14.01±1.34）%，t=1.513，P=0.067。

2.3 A組經(jīng)MEK通路抑制劑干預(yù)后抑癌基因mRNA表達(dá)變化

根據(jù)檢測(cè)結(jié)果可知A組不同細(xì)胞系經(jīng)MEK通路抑制劑干預(yù)后抑癌基因mRNA表達(dá)：PANC1：p16INK4amRNA表達(dá)為（5.32±0.43），P21WAFlmRNA表達(dá)為（3.12±0.34），P27K1PlmRNA表達(dá)為（4.21±0.29）;CFPAC1：p16INK4amRNA表達(dá)為（5.52±0.48），P21WAFlmRNA表達(dá)為（4.51±0.32），P27K1PlmRNA表達(dá)為（3.42±0.23）。

3 討 論

胰腺癌中的RAS基因突變率較高，約為70～90%，可導(dǎo)致MEK轉(zhuǎn)導(dǎo)異常，激活癌基因，造成抑癌基因失活。隨著醫(yī)學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展，抑制MEK信號(hào)通路成為了抗腫瘤的靶點(diǎn)之一[3]。本次研究結(jié)果顯示，用藥1 d后，兩組PANC1、CFPAC1細(xì)胞系的細(xì)胞數(shù)比較無(wú)明顯差異，用藥3 d、6 d后，A組上述細(xì)胞系的細(xì)胞數(shù)低于B組，說(shuō)明A組采用的MEK通路抑制劑PD98059能夠有效抑制人胰腺癌細(xì)胞生長(zhǎng)、增殖。且A組PANC1、CFPAC1細(xì)胞系的G0/G1期細(xì)胞比例高于B組，S期細(xì)胞數(shù)比例低于B組，兩組G2/M期細(xì)胞比例比較無(wú)明顯差異，表明經(jīng)過(guò)MEK通路抑制劑干預(yù)后，PANC1、CFPAC1細(xì)胞系的G0/G1期細(xì)胞比例明顯上升，S其細(xì)胞數(shù)比例下降，可抑制細(xì)胞周期進(jìn)展。分析后可知，PD98059作為一種MEK抑制劑，對(duì)人體ATP并無(wú)明顯影響，抗腫瘤效果確切，可通過(guò)抑制人胰腺癌細(xì)胞系CFPAC1、PANC1生長(zhǎng)，阻礙癌細(xì)胞由低分化期向高分化期轉(zhuǎn)化，達(dá)到抑制胰腺癌細(xì)胞生長(zhǎng)、增殖、控制病情進(jìn)展的干預(yù)目標(biāo)。結(jié)合本次研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，A組經(jīng)PD98059干預(yù)后，CFPAC1、PANC1細(xì)胞P21WAFl、P27K1Pl、p16INK4amRNA表達(dá)水平顯著上升，提示MEK通路抑制劑PD98059可能通過(guò)上調(diào)細(xì)胞周期相關(guān)抑癌基因表達(dá)水平，影響胰腺癌細(xì)胞生長(zhǎng)、周期進(jìn)展。

綜上所述，與MEK通路抑制劑DMSO相比較，PD98059可能通過(guò)上調(diào)細(xì)胞周期相關(guān)抑癌基因表達(dá)水平，阻礙病情進(jìn)展。

參考文獻(xiàn)

[1] 中華醫(yī)學(xué)會(huì)外科學(xué)分會(huì)胰腺外科學(xué)組.胰腺癌診治指南（2014版）[J].中華消化外科雜志，2014，13（11）：831-837.

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[3] 喬銀標(biāo)，楊 波.HGF/c-MET信號(hào)通路抑制劑在抗胰腺癌中的研究進(jìn)展[J].國(guó)際腫瘤學(xué)雜志，2017，44（4）：304-306.