動物源性食品中氯霉素類藥物殘留量的測定

馬永飛 劉鍇 張巍

摘 要：本文采用QuE-UPLC/MS/MS法測定豬肉、草魚、牛奶、蜂蜜等動物源性食品中氯霉素、甲砜霉素的殘留量。該方法使用乙腈作為提取溶劑，樣品經(jīng)攪勻、渦旋、振蕩、離心、凈化處理后上機分析。本方法的優(yōu)點體現(xiàn)在樣品前處理方法簡易、省時，能夠同時檢測氯霉素和甲砜霉素兩種目標(biāo)組分，在節(jié)省了檢測時間的同時降低了基質(zhì)效應(yīng);氯霉素和甲砜霉素的回收率均可達(dá)到85%以上，確保了實驗結(jié)果的準(zhǔn)確性和重現(xiàn)性;氯霉素和甲砜霉素的檢出限均為0.1μg/kg，優(yōu)于《可食動物肌肉、肝臟和水產(chǎn)品中氯霉素、甲砜霉素和氟苯尼考?xì)埩袅康臏y定 液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法》（GB/T 20756-2006）的檢測方法。

關(guān)鍵詞：氯霉素 ?甲砜霉素 ?殘留量 ?QuE-UPLC/MS/MS

氯霉素又名氯胺苯醇，是一種廣譜抗菌素，可有效抑制革蘭氏陰性細(xì)菌、革蘭氏陽性細(xì)菌等多種病原菌[1]。由于氯霉素具有面世時間早、藥性穩(wěn)定、價格便宜等優(yōu)點，曾被廣泛應(yīng)用于畜禽疾病的控制與治療[2]。但是，食品中殘留的氯霉素會對人體健康造成威脅，如可逆性骨髓抑制、神經(jīng)系統(tǒng)受損等，故西方發(fā)達(dá)國家已將氯霉素列為違禁藥物[3]。我國現(xiàn)行有效標(biāo)準(zhǔn)《動物源性食品中獸藥最高殘留限量》（農(nóng)業(yè)部第235號公告）中也明確規(guī)定，氯霉素在動物源性食品中不得檢出[4]。甲砜霉素是氯霉素的同類物[5]，其抗菌譜和抗菌作用與氯霉素相仿——具有廣譜抗微生物作用，可有效殺滅流感嗜血桿菌、肺炎鏈球菌和腦膜炎奈瑟菌[6]。作為氯霉素的替代品，甲砜霉素能有效克服氯霉素導(dǎo)致的再生障礙性貧血的副作用[7]，故被廣泛應(yīng)用于動物源性食品的生產(chǎn)以防治畜禽由流感桿菌、大腸桿菌、沙門菌屬感染導(dǎo)致的呼吸系統(tǒng)、肝膽系統(tǒng)、泌尿系統(tǒng)和消化系統(tǒng)疾病[8]，但甲砜霉素殘留量過高也會對人體健康造成危害。因此，全球各國分別制定了甲砜霉素在肉類食品中的最高殘留限量[9]。我國農(nóng)業(yè)部第235號公告中規(guī)定，食品中甲砜霉素的最大殘留限量為50μg/kg。

由于動物源性食品中氯霉素類藥物殘留量超標(biāo)會影響肉、蛋、奶等食品的安全性，不僅會對人體健康產(chǎn)生危害，還不利于我國養(yǎng)殖業(yè)的健康發(fā)展，更會對我國農(nóng)產(chǎn)品的出口造成不利影響[10]。因此，開發(fā)一種簡便、高效、安全的氯霉素類獸藥殘留檢測方法已迫在眉睫。本研究利用QuE-UPLC/MS/MS法測定草魚、豬肉、牛奶、蜂蜜等動物源性食品中氯霉素類藥物的殘留量，希望能對相關(guān)檢測工作起到借鑒作用。

1 材料和方法

1.1 所需儀器設(shè)備和試劑樣品

1.1.1 儀器設(shè)備

Waters Xevo TQD三重四極桿液質(zhì)聯(lián)用儀，沃特世公司;ME204T分析天平，梅特勒-托利多集團;EPED-PLUS-E3超純水機，南京易普易達(dá)科技發(fā)展有限公司;HD-2500多管漩渦混合儀，杭州佑寧儀器有限公司;MV5多通道平行濃縮儀，北京萊伯泰科儀器股份有限公司。

1.1.2 試劑樣品

市售草魚、豬肉、牛奶、蜂蜜等動物源性食品;色譜純乙腈，氯霉素、甲砜霉素標(biāo)準(zhǔn)品，壇墨質(zhì)檢;ProElut QuE 2mL Tube固相萃取凈化管、0.22μm ProMax尼龍針頭式濾器，迪馬科技。

1.2 操作方法

1.2.1 提取

1.2.1.1 豬肉、草魚、蜂蜜樣品

依次在15mL離心管中加入5.0g待測樣品、2.0g NaCl，攪拌均勻后加入5.0mL乙腈，在多管漩渦混合儀中渦旋混勻1min。振蕩5min，8000rpm下離心3min，取1mL上清液待凈化。

1.2.1.2 牛奶樣品

在15mL離心管中加入5.0g待測樣品、2.0g NaCl，攪拌均勻后加入2.5mL乙腈，在多管漩渦混合儀中渦旋混勻1min。振蕩5min，8000rpm下離心3min，取1mL上清液待凈化。

1.2.2 凈化

將1mL提取液轉(zhuǎn)移到ProElut QuE 2mL Tube固相萃取凈化管，渦旋混合30s。10000rpm下離心1min，取上清液500μL于濃縮管中，加水100μL，渦旋混勻，室溫下氮吹至剩余約100μL溶液，加水定容至500μL，混勻，過0.22μm微孔濾膜，進LC-MS/MS分析。

1.2.3色譜條件

1.2.3.1 UPLC條件

色譜柱C18：100×2.1mm，1.8μm;流速：0.2mL/min;進樣量：5μL;柱溫：35℃;流動相A：10mmol/L乙酸銨，流動相B：乙腈;實驗梯度洗脫程序設(shè)置參數(shù)如表1。

1.2.3.2 質(zhì)譜條件

電離模式：ESI;掃描方式：負(fù)離子掃描;檢測方式：多反應(yīng)監(jiān)測;電噴霧電壓：-4500V;霧化器壓力：50psi;輔助氣氣壓：50psi;氣簾氣壓力：20psi;離子源溫度：500℃。

2 結(jié)果與討論

2.1 提取溶劑的選擇

查閱文獻可知，氯霉素類藥物殘留的提取劑有乙腈、乙酸乙酯[11]、水[12]等，本實驗比較了3種不同的提取溶劑對提取效果的影響。實驗數(shù)據(jù)表明，以乙腈作為提取溶劑時，提取效果優(yōu)于乙酸乙酯和水，故本實驗選用乙腈作為提取溶劑。

2.2 色譜條件的優(yōu)化

本研究分別以10mmol/L乙酸銨-乙腈、水-甲醇[13]、水-乙腈[14]為流動相，按照“1.2.3.1”中的梯度洗脫條件進行檢測。由實驗結(jié)果可知，以10mmol/L乙酸銨-乙腈作為流動相時對氯霉素、甲砜霉素的分離效果最好，色譜峰尖銳、對稱，響應(yīng)靈敏度最高。

2.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線和檢出限

本實驗?zāi)繕?biāo)組分在0.25～50μg/kg的范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，回歸方程y=0.0084x+0.0366，相關(guān)系數(shù)R2=0.9932。采用在空白豬肉樣品中添加目標(biāo)組分的方法，依據(jù)GB/T 27415-2013[15]的規(guī)定計算得出本實驗最低定量限在0.25μg/kg，檢測限為0.1μg/kg。

2.4 精密度和回收率試驗

分別向空白草魚、豬肉、牛奶、蜂蜜等樣品中添加2個濃度水平的氯霉素、甲砜霉素標(biāo)準(zhǔn)溶液，進行回收率實驗，結(jié)果見表2。氯霉素、甲砜霉素的回收率分別為85.8%～96.4%，87.3%～97.1%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.8%～1.3%。

3 結(jié)論

本文建立了一種動物源性食品中氯霉素類藥物殘留量的測定方法，即采用乙腈作為提取溶劑，樣品經(jīng)攪勻、渦旋、振蕩、離心、凈化處理，然后上機分析。本方法的優(yōu)點為，樣品前處理方法簡易、省時，并且能夠同時檢測氯霉素和甲砜霉素兩種目標(biāo)組分，在節(jié)省檢測時間的同時降低了基質(zhì)效應(yīng);氯霉素和甲砜霉素的回收率均達(dá)到85%以上，確保了實驗結(jié)果的準(zhǔn)確性和重現(xiàn)性;氯霉素和甲砜霉素的檢出限均為0.1μg/kg，優(yōu)于國家標(biāo)準(zhǔn)GB/T 20756-2006的檢測方法。

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