1例多次輸血者弱抗體的產(chǎn)生過程及其對輸血效果的影響

黃嫻，李彤彤，種靖慧，解金輝(天津市血液中心免疫血液學(xué)研究室，天津300110)

為保證輸血安全和有效，輸血前需要篩查患者的不規(guī)則抗體，以使患者輸注配合的血液。漏檢低效價的弱抗體會導(dǎo)致血液輸注無效，甚至導(dǎo)致溶血性輸血反應(yīng)[1]。本實驗室遇到1例因多次輸血致產(chǎn)生弱的不規(guī)則抗體的病例，報告如下。

1 材料與方法

1.1研究對象及資料 患兒，女，9歲，既往無輸血史，懷疑藥物導(dǎo)致貧血，血型鑒定為A型，RhD陽性。2017年5月11日入院，15 d內(nèi)輸血12次，輸血效果不佳。本實驗室全程受醫(yī)院委托進行交叉配血，第12次輸血前檢出抗E抗體，回顧性檢測該抗體的產(chǎn)生過程，分析其對輸血效果的影響。

1.2主要試劑和儀器 篩選細胞和譜細胞購自荷蘭Sanquin公司，抗人球蛋白卡購自美國Bio-Rad公司，凝聚胺、聚乙二醇(polyethylene glycol，PEG)試劑購自長春博德公司，酸放散試劑購自珠海貝索生物技術(shù)公司，木瓜酶粉劑、抗E、抗e、抗C、抗c均購自上海血液生物醫(yī)藥公司，所有試劑均在有效期內(nèi)使用。KA-2200型離心機(日本久保田公司)，試劑卡孵育箱和離心機、數(shù)字顯示式恒溫水浴箱、可調(diào)移液器(美國Bio-Rad公司)。

1.3不規(guī)則抗體鑒定 鹽水法、凝聚胺法、微柱凝集法(microcolumn gel test，MGT)3種常用血型血清學(xué)試驗方法和酸放散試驗均按試劑說明書操作，直接抗人球蛋白試驗采用MGT。

1.4PEG-MGT 在試管中加入100 μL患者血漿、200 μL PEG試劑和50 μL 2%～5%紅細胞，37 ℃溫育15 min后用鹽水洗滌4次，配制成合適濃度的懸液。由于本試驗中試管抗人球蛋白法檢測PEG處理后的細胞凝集強度很弱，為便于判讀，將處理后的細胞配成合適濃度的懸液，加入IgG單抗的凝膠卡并離心，記錄凝集強度。

1.5酶-MGT 采用2步酶法，將篩選細胞和譜細胞用鹽水洗滌3次后配成2%～3%濃度，加入等量的木瓜蛋白酶，37 ℃溫育10 min后用鹽水洗滌3次。由于試管抗人球法檢測木瓜酶處理后的紅細胞與患者血漿凝集強度太弱無法判讀，將酶處理紅細胞配制成1%濃度的低離子懸液，加入抗IgG+C3d的凝膠卡，再加入患者血漿，37 ℃溫育后離心，記錄凝集強度。

2 結(jié)果

2.1直接抗人球蛋白試驗 見表1。第1次輸血前患者紅細胞直接抗人球蛋白試驗呈2+，第2次呈1+，第3次和第4次呈w+，第5次至第12次輸血前樣本直接抗人球蛋白試驗全為陰性。

2.2抗體篩查 第1至4次輸血前抗篩鹽水法、凝聚胺法、MGT均為陰性，由于此時患者直接抗人球蛋白試驗陽性，為避免自身抗體干擾未進行PEG-MGT和酶-MGT試驗。第5至8次輸血前抗篩鹽水法、凝聚胺法、MGT、PEG-MGT和酶-MGT均為陰性。第9次輸血前酶-MGT檢出不規(guī)則抗體，第12次輸血前酶-MGT與PEG-MGT均檢出不規(guī)則抗體，譜細胞格局符合抗E抗體(篇幅所限未列出譜細胞格局表)，患者Rh分型為CCDee。歷次抗篩結(jié)果見表1。另外，第1次和第12次輸血前抗篩鹽水法室溫下為陰性，2次的血清4 ℃溫育10 min后抗篩細胞和自身對照均凝集且強度均為3+，均含有自身冷抗體。

表1 患者歷次抗篩結(jié)果和供者RhE抗原

注：抗篩凝集強度為患者血漿與EE純合子細胞的凝集強度。

2.3抗體性質(zhì) 第12次輸血前的患者血清經(jīng)2-Me處理30 min后，酶-MGT法檢測抗篩變?yōu)殛幮裕C實抗E抗體為IgM性質(zhì)。

2.4酸放散試驗 第1次和第12次輸血前的患者樣本分別進行酸放散試驗，第1次的紅細胞放散液未檢出特異性抗體，第12次的紅細胞放散液采用酶-MGT法檢出抗E抗體。

2.5抗體對輸血有效性的影響 血紅蛋白量隨天數(shù)變化的曲線見圖1。結(jié)合圖1和表1結(jié)果發(fā)現(xiàn)，從第13天開始檢測到抗E抗體，第6天、12天、15天輸注不含E抗原的血液，均使血紅蛋白提高。而第5天、9天、10天、14天僅輸注含有E抗原的血液，均未能提高血紅蛋白水平。

圖1 患者血紅蛋白變化曲線

3 討論

鹽水法、凝聚胺法、MGT、酶法是常見的不規(guī)則抗體篩查方法，凝聚胺法、MGT、酶法對于檢測Rh系統(tǒng)的常見IgG類抗體，差異無統(tǒng)計學(xué)意義[2]；而IgM類抗體通常采用鹽水法篩查，部分IgM抗體可由MGT檢測到[3]。本例弱IgM抗E抗體伴隨自身冷抗體，室溫鹽水法陰性，4 ℃鹽水法由于冷抗體無法鑒定特異性抗體，PEG-試管抗人球蛋白法(PEG-IAT)和酶-試管抗人球蛋白法(酶-IAT)亦因凝集強度太弱而不易判讀。采用酶-MGT，患者直抗陰性，37 ℃溫育排除冷抗體的干擾，使用含有多種抗人球蛋白的凝膠卡檢測血漿，具有更高的靈敏度且結(jié)果直觀，為鑒定弱IgM型不規(guī)則抗體提供了可選方法。為避免補體C3結(jié)合自身抗體的干擾，PEG-MGT使用IgG單抗卡，該方法在本例弱抗體檢測過程中的靈敏度不及酶-MGT。本研究中患者輸注不含相應(yīng)抗原的血液，血紅蛋白水平得到提升，而含有相應(yīng)抗原的血液不能提高血紅蛋白水平，證明該抗體具有臨床意義。

受血者產(chǎn)生不規(guī)則抗體與輸血次數(shù)密切相關(guān)，當(dāng)輸血次數(shù)大于6次，不規(guī)則抗體的發(fā)生頻率可達89.7%[4]。在我國最常見的不規(guī)則抗體是抗E抗體[5]，本研究中患者15 d輸血12次，出現(xiàn)輸注無效，經(jīng)鑒定產(chǎn)生抗E抗體。對于多次受血者可檢測E抗原，輸注E同型或相容的血液，降低多次受血者產(chǎn)生不規(guī)則抗體的概率，減少其輸注無效和發(fā)生輸血反應(yīng)的頻率，從而提升輸血的安全性和有效性。