食品中兩類致病微生物檢測結果不確定度評定

肖 煒 伊犁州檢驗檢測認證研究院 新疆伊犁 835000

用外行話說，不確定度額定值是指不可靠的程度，主要用來表示實驗測量結果的可行性程度。它可以用來測試參與實驗的人員、適用的測量儀器和設備、以及具體的實驗環(huán)境條件等因素對測量能力的水平進行量化。

1 實驗材料與實驗方法

1.1 材料

實驗食品從2018年至2019年隨機抽檢的236批蛋糕和肉制品中抽取。實驗中涉及的食物主要有火腿、烤雞、蛋糕等不同種類。[1]BP計數(shù)瓊脂:用北京路橋有限公司提供的培養(yǎng)基按照說明書配制培養(yǎng)液，將配制好的培養(yǎng)液倒在平板上。腦心提取肉湯(BHI)、兔血漿、小斜營養(yǎng)瓊脂均由北京路橋有限公司提供，直接用于實驗。生理鹽水緩沖液由伊犁州產(chǎn)品質量檢驗所食品室配制而成。

1.2 檢測方法

1.2.1 分析培養(yǎng)基增菌技術

目前，在我國食品微生物檢測過程中，主要采用選擇性培養(yǎng)基和顯色培養(yǎng)基兩種技術來實現(xiàn)培養(yǎng)基的生長[2]。值得注意的是，雖然選擇性培養(yǎng)基常用于區(qū)分不同類型的細菌，但檢測結果不能用于準確識別細菌類型，只有通過分型鑒定等方式才能確定是否有相應菌株的存在。

1.2.2 沙門氏菌檢驗

在食品病原微生物實驗室檢測過程中，微生物檢測能力的高低直接影響檢測結果的可靠性和準確性，是檢測質量控制的關鍵[3-4]。長期以來，中國食品藥品檢驗所等機構一直以實驗室比對計劃的形式開展沙門氏菌檢測能力驗證活動。在具體的驗證過程中，盲樣檢測過程主要采用《食品安全國家標準 食品微生物學檢驗 沙門氏菌檢驗》（GB4789.4-2016）。

1.2.3 金黃色葡萄球菌檢驗

在食品微生物檢測過程中，日常采用《食品微生物學檢驗 金黃色葡萄球菌檢驗》(GB4789.10-2016)作為檢測方法，包括預富集培養(yǎng)、分離培養(yǎng)、菌落形態(tài)觀察、血漿凝固酶實驗等多個實驗步驟。然而，在傳統(tǒng)的檢測過程中，檢測的具體操作步驟煩瑣且需要大量的時間[5]。檢測靈敏度不夠，容易出現(xiàn)漏檢問題。隨著微生物研究技術的不斷完善，應用于食品中病原微生物檢測的相關技術也在不斷完善，金黃色葡萄球菌的檢測技術得到了很大的發(fā)展，從傳統(tǒng)的培養(yǎng)方法中衍生出了大量更有效的檢測方法[6]。金黃色葡萄球菌的檢測也應用了生物化學、分子生物學和免疫學等不同領域的方法和技術[7-8]。

2 實驗結果

2.1 樣品致病菌檢測結果

表1 肉制品和蛋糕的致病菌檢測結果

2.2 選定兩份樣品Y1和Y2檢測的結果

從樣本Y1和Y2的檢測結果可以看出，兩個樣本中均有定量檢測金黃色葡萄球菌[10-11]。用公式計算樣品Y1中同批次的5個獨立包裝得到：低于10CFU/g、20CFU/g、低于10CFU/g、15CFU/g和30CFU/g，而樣品Y2的5個獨立包裝檢測結果為：15CFU/g、20CFU/g、低于10CFU/g、30CFU/g、低于10CFU/g[12]。結合相關國家標準，可以得出Y1和Y2不存在過量的金黃色葡萄球菌的結論[13]。

3 實驗結論

事實上，影響平板上金黃色葡萄球菌計數(shù)結果的因素很多。在本實驗中，主要因素是樣品的稀釋程度、菌落數(shù)量、樣品體積的大小、個體計數(shù)的重復性以及實驗人員確認研究了計數(shù)過程中的不確定度。在整個研究過程中，也存在著不同的影響因素，如標準菌種、培養(yǎng)箱參數(shù)、菌落重疊、培養(yǎng)基質量、采樣均勻性、菌落計數(shù)誤差等。實驗結果的分析和計算可以證明，在檢測過程中,樣品中金黃色葡萄球菌的平皿計數(shù),計數(shù)的不確定性,重復計數(shù),不確定性的血漿凝固酶陽性細菌的數(shù)量確認測試是最有影響力的生成因素。