穿心蓮內(nèi)酯自乳化制劑工藝研究

李園園

摘要： 目的：篩選穿心蓮內(nèi)酯自乳化釋藥系統(tǒng)的最佳處方。方法：通過篩選得出該自乳化系統(tǒng)的油相、表面活性劑和助表面活性劑，確定最佳處方組成比例。結(jié)果：穿心蓮內(nèi)酯最佳自乳化給藥系統(tǒng)由中鏈甘油三酸酯、膏狀大豆卵磷脂和無水乙醇組成，最佳質(zhì)量比為3：2：1。結(jié)論：穿心蓮內(nèi)酯自乳化制劑制備工藝簡單，質(zhì)量穩(wěn)定，能顯著提高藥物的溶解度。

Abstract： Objective： to select the best prescription of andrographolide self-emulsifying drug delivery system. Methods： the oil phase， surfactant and co-surfactant are selected to determine the optimum formulation. Results： the best andrographolide self-emulsifying drug delivery system consists of medium chain triglycerides， paste soy lecithin and ethanol； the optimum ratio is 3：2：1. Conclusion： andrographolide self-emulsifying preparation process is simple， has a stable quality， and can significantly improve the solubility of the drug.

關(guān)鍵詞： 穿心蓮內(nèi)酯；自乳化；處方設(shè)計(jì)

Key words： andrographolide；self-emulsifying；performulation

中圖分類號：R286 文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A 文章編號：1006-4311（2016）36-0122-02

0 引言

穿心蓮內(nèi)酯為天然植物穿心蓮（Andrographis paniculata （Burm.f.）Nees）的主要有效成分，具有祛熱解毒，消炎止痛之功效，對細(xì)菌性與病毒性上呼吸道感染及痢疾有特殊療效，被譽(yù)為天然抗生素藥物，近現(xiàn)代研究表明以穿心蓮內(nèi)酯為代表的二萜內(nèi)酯類成分具有廣譜的抗腫瘤活性[1]，但均難溶于水，口服生物利用度較低，從而阻礙了其臨床的廣泛應(yīng)用。

自乳化釋藥系統(tǒng)（self-emulsifying drug delivery system， SEDDS）由油相、表面活性劑和助表面活性劑組成，在環(huán)境溫度（通常指37℃）和溫和攪拌的條件下，可自發(fā)形成乳滴為o/w型的5μm左右的乳劑[2]。SEDDS制劑可提高難溶性藥物和脂溶性藥物的溶解度，增加藥物的吸收速度和程度，提高藥物的生物利用度，目前已有學(xué)者采用SEDDS系統(tǒng)提高了水難溶性藥物水飛薊素、紫杉醇等的生物利用度[3-4]。SEDDS在體內(nèi)的乳化情況主要取決于兩個(gè)因素：乳滴粒徑及Zeta電位。乳滴粒徑越小，越有利于藥物的釋放與吸收；Zeta電位越大，乳滴間斥力就越大，乳劑就越穩(wěn)定[5]。本研究通過篩選、優(yōu)化穿心蓮內(nèi)酯自乳化制劑工藝，制備出穿心蓮內(nèi)酯自乳化制劑，大大提高了穿心蓮內(nèi)酯在水中的溶解度。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 高效液相色譜儀（Waters 2690），檢測器（Waters 2487） 色譜柱（C18柱，迪馬一代，250×4.6mm），N2000型色譜工作站（浙江大學(xué)智能信息工程研究所）；FA1004分析天平（上海精科天平），Zetasizer Nano （馬爾文儀器有限公司，型號：Nano-zs90）；恒溫水浴箱（Fisher Scientific）；2003型恒溫磁力加熱攪拌器；KQ-300VDE型雙頻數(shù)控超聲清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）。

1.2 試藥 穿心蓮內(nèi)酯（成都天臺山制藥有限公司）；大豆卵磷脂（上海太偉藥業(yè)有限公司）；Tween 80（南京威爾化工有限公司，分析純）；Pluronic F-68（BASF CO.USA）；丙二醇（天津市德恩化學(xué)試劑有限公司）；甘油（藥用規(guī)格）；大豆油（中糧艾地盟糧油工業(yè)有限公司）；花生油（萊陽魯花濃香花生油有限公司）；中鏈甘油三酸酯（鐵嶺北亞藥用油有限公司）；油酸乙酯（中國醫(yī)藥（集團(tuán)）上海化學(xué)試劑公司）；乙酸乙酯（天津市巴斯夫化工有限公司）；橄欖油；其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 色譜柱：（Diamonsil C18，250×4.6mm）；柱溫：25℃；流動(dòng)相∶甲醇∶水（60∶40）；檢測波長：226nm；流速：0.8mL / min。

2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線 精密稱取穿心蓮內(nèi)酯4.9mg，置10mL容量瓶中，加甲醇適量，超聲20 min使之溶解，并稀釋至刻度，得0.49 mg·ml-1的標(biāo)準(zhǔn)溶液。分別進(jìn)樣0.5，1，3，5，7μL測定峰面積，以峰面積（A）為縱坐標(biāo)，質(zhì)量（單位：μg）為橫坐標(biāo)進(jìn)行回歸分析，得線性方程A=2×105x+83252，r=0.9997，結(jié)果表明穿心蓮內(nèi)酯在0.245μg-3.430μg與峰面積呈良好的系（見圖1）。

2.3 精密度和回收率試驗(yàn) 精密吸取穿心蓮內(nèi)酯（0.45 mg·ml-1）對照品溶液1μL，重復(fù)進(jìn)樣6次，測定穿心蓮內(nèi)酯色譜峰面積，其RSD為0.96%（n=6），表明儀器精密度良好。

制備3份空白自乳化體系，分別精密加入穿心蓮內(nèi)酯對照品2.0mg、2.5mg、3.0mg，超聲溶解，然后吸取100μL，在溫和磁力攪拌、37℃水浴條件下，加入到10mL蒸餾水中，直到溶液形成乳白色均一乳劑。每份樣品均加9倍量甲醇稀釋后，超聲混勻，分別進(jìn)樣10μL，測定穿心蓮內(nèi)酯峰面積，外標(biāo)法計(jì)算含量。計(jì)算得平均回收率為101.39%。

2.4 SEDDS的制備 取處方量的油相，乳化劑和助乳化劑，超聲混勻；加入處方量的藥物，37℃水浴加熱溶解，得粘稠液，37℃放置12h。

2.5 處方篩選

2.5.1 穿心蓮內(nèi)酯在不同油中溶解度測定 分別取乙酸乙酯、好理油、蓖麻油、大豆油、花生油、油酸乙酯、橄欖油、中鏈甘油三酸酯約2mL置EP管中依次加入過量的穿心蓮內(nèi)酯超聲30min溶解使成過飽和溶液，37℃恒溫水浴平衡；離心，分別取中鏈甘油三酸酯、油酸乙酯和乙酸乙酯上清液過0.45μm濾膜，甲醇稀釋10倍；取不溶于甲醇的大豆油、花生油、橄欖油以及好理油的上清液適量，加適量甲醇萃取12h，離心，吸取甲醇層進(jìn)樣測定其含量，計(jì)算溶解度見表1。

穿心蓮內(nèi)酯可溶于乙酸乙酯、大豆油、好理油和中鏈甘油三酸酯，在花生油、油酸乙酯和橄欖油中極微溶解，但乙酸乙酯毒性較大，故選擇大豆油、好理油和中鏈甘油三酸酯作為油相進(jìn)行處方篩選。

2.5.2 處方配伍篩選 以大豆油、好理油和中鏈甘油三酸酯為油相，Tween-80、泊洛沙姆和大豆卵磷脂為乳化劑，丙二醇、無水乙醇和甘油為助乳化劑，將油、乳化劑和助乳化劑以不同的比例混合，觀察現(xiàn)象，考察混溶情況，結(jié)果見表2。結(jié)果表明，合適的油相組成分別為：①大豆油、大豆卵磷脂和甘油；②中鏈甘油三酸酯、泊洛沙姆和無水乙醇；③中鏈甘油三酸酯、大豆卵磷脂和無水乙醇。

分別取上述三種自乳化系統(tǒng)，在預(yù)實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上按油∶乳化劑∶助乳化劑=3∶2∶1依2.4項(xiàng)下的方法制備空白自乳化體系，分別取該系統(tǒng)2mL，加入過量的穿心蓮內(nèi)酯使成過飽和溶液，超聲30min，37℃恒溫過夜，HPLC測含量；然后取合適的量加入一定體積的37℃的水中，邊加邊攪拌，使成乳液，測平均粒徑和Zeta電位，結(jié)果見表3。

結(jié)果表明②③自乳化系統(tǒng)可明顯增加穿心蓮內(nèi)酯的溶解度，且成乳后平均粒徑較小，由Zeta電位看出乳劑較穩(wěn)定；但②加入穿心蓮內(nèi)酯恒溫過夜后出現(xiàn)分層現(xiàn)象，不穩(wěn)定，所以最佳油相組成為：中鏈甘油三酸酯、大豆卵磷脂和無水乙醇，比例為：中鏈甘油三酸酯∶大豆卵磷脂∶無水乙醇=3∶2∶1。

3 討論

①本實(shí)驗(yàn)在處方設(shè)計(jì)前初步考察了藥物在多種油相中的溶解情況，從中篩選出對穿心蓮內(nèi)酯溶解度較大的油相，然后通過油相、乳化劑與助乳化劑三者之間的互溶情況篩選出合適的油相、乳化劑和助乳化劑組成。結(jié)果表明最佳組成和比例為：中鏈甘油三酸酯∶大豆卵磷脂∶無水乙醇=3∶2∶1，其中大豆卵磷脂為兩性離子型表面活性劑，與文獻(xiàn)報(bào)道的[6]：SEDDS一般采用非離子SA有差別。

②SEDDS在體內(nèi)的乳化情況主要取決于兩個(gè)因素[7]：乳滴粒徑及Zeta電位。乳滴粒徑越小，比表面積越大，越利于藥物的釋放與吸收。Zeta電位越大，乳滴間斥力就越大，乳劑越穩(wěn)定。本實(shí)驗(yàn)篩選出的處方在體外條件下乳化后平均粒徑在500nm左右，即為亞微乳。Zeta電位在-30mV左右，屬于穩(wěn)定的范疇。

參考文獻(xiàn)：

[1]Yang S，Evens AM，Prachand S，et al. Mito-chondrial-mediated apoptosis in lymphoma cells by the diterpenoid lactone andrographolide，the active component of Andrographis paniculata [J].Clin Cancer Res，2010，16（19）： 4755-4768.

[2]王嬌，李葆林，何曉明，等.新型自乳化給藥系統(tǒng)研究進(jìn)展[J].中國現(xiàn)代應(yīng)用藥學(xué)，2016，33（1）：119-121.

[3]Seo YG， Kim DW， Cho KH， et al. Preparation and pharmaceutical evaluation of new tacrolimus-loaded solid self-emulsifying drug delivery system [J]. Arch Pharm Res， 2015， 38（2）： 223-228.

[4]趙艷雪，馮彩霞，劉勛濤，等.水飛薊賓自乳化制劑對CCl4 所致肝損傷的保護(hù)作用[J].中國現(xiàn)代應(yīng)用藥學(xué)，2016，33（8）：1006-1009.

[5]Bolko K， Zvonar A， Ga？觢perlin M. Mixed lipid phase SMEDDS as an innovative approach to enhance resveratrol solubility [J]. Drug development and industrial pharmacy， 2013， 18（9）：1-8.

[6]Weerapol Y， Limmatvapirat S， Kumpugdee-Vollrath M， et al. Spontaneous emulsification of nifedipine-loaded self-nanoemulsifying drug delivery system [J]. AAPS PharmSciTech， 2015， 16（2）：435-443.

[7]Bahloul B， Lassoued MA， Seguin J， et al. Self-emulsifying drug delivery system developed by the HLB-RSM approach： Characterization by transmission electron microscopy and pharmacokinetic study [J]. Int J Pharm， 2015， 487（1-2）：56-63.