山楂葉總黃酮提取分離實(shí)驗(yàn)研究

侯愛珍

摘要：文章通過對(duì)山楂植物進(jìn)行概述，設(shè)計(jì)關(guān)于山楂葉總黃酮提取的實(shí)驗(yàn)研究，實(shí)驗(yàn)采用分析純?cè)噭┖蛯?shí)驗(yàn)室提供山楂葉為實(shí)驗(yàn)原料，利用蘆丁質(zhì)量濃度 C（mg/mL）與吸光度 A 之間的回歸方程為判別提取率方法，結(jié)果測(cè)得總黃酮得率的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）為 2.2%，表明該方法重復(fù)性良好。

1 山楂植物概述

山楂為薔薇科（Rasaceae）山楂屬（CrataegusL.）植物，全世界山楂屬植物共有140 多種，我國植物志記載共有 17 種 2 個(gè)變種。山楂屬植物在我國已有3000多年的栽培歷史，栽培面積廣，據(jù)1990年統(tǒng)計(jì)，全國山楂栽培面積達(dá)35萬hm²，2003年統(tǒng)計(jì)栽培面積已達(dá)530萬畝，主要分布在東北、華北、山西、廣西、云南等地，中國植物志將中國山楂按植物學(xué)特性分為6組，包括麻核組、羽裂組、毛序組、光核組、淺裂組、楔形組。山楂化學(xué)成分的研究追溯于 1921 年，當(dāng)時(shí)的研究熱點(diǎn)主要集中于纖維素、鞣質(zhì)、三萜等成分，隨著對(duì)山楂研究的逐步深入，研究者發(fā)現(xiàn)山楂中的黃酮類化合物對(duì)心血管疾病具有良好的藥理作用，同時(shí)人們發(fā)現(xiàn)山楂葉具有和山楂果相同的功效，開始將研究方向轉(zhuǎn)移到山楂葉上，通過一定的分離手段從山楂葉中分離出各種黃酮類化合物。近年來隨著檢測(cè)技術(shù)的發(fā)展，對(duì)山楂葉中的氨基酸、微量元素及有機(jī)酸等也有了進(jìn)一步研究。

2 材料和方法

黃酮類化合物是山楂葉主要的功能活性物質(zhì)，總黃酮提取工藝成為提高山楂葉利用價(jià)值的關(guān)鍵所在，因此開發(fā)出一種操作簡(jiǎn)單、環(huán)保無害、適用性強(qiáng)的黃酮提取工藝，對(duì)提高山楂葉的附加利用價(jià)值具有重要的實(shí)踐指導(dǎo)意義。

2.1 材料

山楂葉（Crataegus pinnatifida Bge.）實(shí)驗(yàn)室采購實(shí)驗(yàn)用樣品，蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品，阿拉丁試劑（上海）有限公司;無水乙醇、甲醇、亞硝酸鈉、氯化鋁、氫氧化鈉等，國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，以上化學(xué)試劑均為分析純。

2.2 儀器設(shè)備

酶標(biāo)儀 Spectra Max 190，美國 Molecular Devices 公司;KQ-600DV 數(shù)控超聲清洗器，昆山市超聲儀器有限公司;RHP-100? 高速多功能粉碎機(jī)，浙江榮浩工貿(mào)有限公司;Mettler ME204 型電子天平，梅特勒-托利多儀器有限公司;RE-2000E 旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器，上海亞榮生化儀器廠。

2.3 方法

根據(jù)文獻(xiàn)進(jìn)行改進(jìn)，采用倍比稀釋法制備濃度為 0.25、0.125、0.0625、0.03125 mg/mL 的蘆丁標(biāo)準(zhǔn)液。精密吸取 50μL 蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液，加入 0.5mol/L NaNO2溶液 20μL，靜置 5min;加入 0.3mol/L AlCl3溶液 20μL，靜置 6min;最后加入 0.5mol/L NaOH溶液 200μL，在酶標(biāo)儀中振蕩 30s，以試劑空白作對(duì)照，于 510nm 下測(cè)定吸光度。蘆丁質(zhì)量濃度 C（mg/mL）與吸光度 A 之間的回歸方程為：

A=1.5399C+0.0062（R2=0.9998）

3總黃酮提取

準(zhǔn)確稱取 1.000g 山楂葉粉末于 100mL 具塞三角瓶中，以一定料液比加入一定體積分?jǐn)?shù)的乙醇溶液，在一定溫度下超聲提取一定時(shí)間后抽濾，濾液轉(zhuǎn)入 100mL 容量瓶中，定容，精密吸取適量樣液按照標(biāo)準(zhǔn)曲線制作方法測(cè)定吸光度，計(jì)算總黃酮得率，計(jì)算公式如下：

提取率=cv/W

式中：C 為粗提液總黃酮質(zhì)量濃度（mg/m L）;V 為粗提液體積（m L）;W 為原料質(zhì)量（g）。再進(jìn)行單因素影響實(shí)驗(yàn)，料液比 1：30，提取溫度 70℃，超聲功率 420W，以不同乙醇體積分?jǐn)?shù) 40%、50%、60%、70%、80%、90%為溶劑提取 30min，考察乙醇體積分?jǐn)?shù)對(duì)總黃酮得率的影響;以 70%乙醇為溶劑，料液比 1：30，提取時(shí)間 30min，超聲功率 420W，設(shè)置不同溫度 30℃、40℃、50℃、60℃、70℃、80℃提取，考察提取溫度對(duì)總黃酮得率的影響;以 70%乙醇為溶劑，提取溫度 70℃，料液比 1：30，超聲功率 420W，設(shè)置不同時(shí)間 10min、20min、30min、40min、50min、60min 提取，考察提取時(shí)間對(duì)總黃酮得率的影響;以 70%乙醇為溶劑，提取溫度 70℃，提取時(shí)間 40min，超聲功率 420W，設(shè)置不同料液比 1：15、1：20、1：25、1：30、1：35、1：40 提取，考察料液比對(duì)總黃酮得率的影響;每個(gè)處理重復(fù) 3 次。

4 結(jié)果

取濃度為 0.25mg/mL 的蘆丁標(biāo)準(zhǔn)液重復(fù)測(cè)定 5 次，求得相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）為 1.18%，表明該方法精密度良好。取同一批山楂葉樣品制備 5 份粗提液，結(jié)果測(cè)得總黃酮得率的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）為 2.2%，表明該方法重復(fù)性良好。

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