復(fù)方杜仲提取物對(duì)海鱸肝臟修復(fù)作用的研究

陳雪影 柴文君 葉彩燕

摘 要：為了評(píng)估復(fù)方杜仲提取物對(duì)海鱸夏季高溫期以肝腫大為特征的消化系統(tǒng)癥狀修復(fù)作用，將150尾健康海鱸設(shè)置3個(gè)平行，每個(gè)平行隨機(jī)分5組（1個(gè)常溫組、4個(gè)高溫組），常溫組和高溫組分別在（27±0.5）℃、（33±0.5）℃處理2周。試驗(yàn)期間飽食投喂普通飼料，2周后高溫組肝臟出現(xiàn)了肝細(xì)胞腫脹、空泡變性等組織病變，對(duì)高溫組分別投以0、1∶6、1∶4、1∶2復(fù)方杜仲提取物水平的飼料，常溫組投喂普通飼料，2周后高溫組血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）和谷草轉(zhuǎn)氨酶（AST）含量均顯著降低（P<0.05）;且下降幅度隨中草藥添加量增加而增大，1∶2試驗(yàn)組ALT和AST均極顯著低于高溫對(duì)照組（P<0.01）;病理組織學(xué)結(jié)果顯示，高溫組肝細(xì)胞損傷修復(fù)程度與復(fù)方杜仲提取物比例成正相關(guān)。因此，復(fù)方杜仲提取物對(duì)高溫期海鱸肝臟病變具有修復(fù)作用，且1∶2試驗(yàn)組效果最好。

關(guān)鍵詞：海鱸;高溫期;消化系統(tǒng)疾病;病理模型;杜仲提取物

Abstract： In order to evaluate the effect of Eucommia ulmoides extract on repair the hepatomegaly on sea bass because of the high temperature in summer. 150 healthy sea bass were divided into three parallel treatments， which were randomized in one normal temperature group and four high temperature groups. Normal temperature group were treated at the room temperature （（27±0.5）℃）while high temperature groups at the high temperature（（33±0.5）℃）for two weeks. Two weeks later， symptoms such as hepatocyte tumefaction， vacuolation， stenosis of sinus were observed on the pathological histological section in high temperature groups. Then the high temperature groups were fed for 0 （control）， 1∶6， 1∶4， 1∶2 commercial feed diets containing Eucommia ulmoides extract and the normal temperature group was feed for ordinary commercial feed for two weeks. The serum alanine aminotransferase （ALT） and aspartate aminotransferase （AST） were significant decreased （P<0.05） and the decreasing extent with Eucommia ulmoides extract increasing， and the addition of 1∶2 decreased most. Besides， the histopathological results showed that the restorative effects had positively correlation with amount of Eucommia ulmoides extract， which could alleviate the pathological damage of liver. In summary， eucommia ulmoides extract has prominent repair effect on the liver lesions of sea bass， and addition of 1∶2 is the most obvious.

Key words： Sea bass; High temperature period; Digestive symptoms; Pathological model; Eucommia ulmoides

據(jù)統(tǒng)計(jì)，2018年廣東海水鱸魚(yú)池塘養(yǎng)殖面積達(dá)6667hm2，產(chǎn)量超20萬(wàn)t，海鱸已成為全國(guó)性海水養(yǎng)殖主導(dǎo)品種之一[1]。近年來(lái)，實(shí)踐發(fā)現(xiàn)，海鱸精養(yǎng)區(qū)夏季高溫期間，海鱸容易出現(xiàn)加料難、階段料比高等問(wèn)題，解剖發(fā)現(xiàn)海鱸肝腫大發(fā)白成為共性癥狀，病理學(xué)特征方面主要表現(xiàn)肝細(xì)胞空泡變性，肝血竇出現(xiàn)擠壓性竇腔狹窄，未見(jiàn)紅細(xì)胞和白細(xì)胞浸潤(rùn)等。海鱸上述肝臟問(wèn)題持續(xù)1～3個(gè)月，期間可引起魚(yú)體食欲減退，營(yíng)養(yǎng)吸收效率低，生長(zhǎng)緩慢，免疫水平降低，輕則引起零星死亡，嚴(yán)重時(shí)極易結(jié)合細(xì)菌、病毒等暴發(fā)大規(guī)模疾病，嚴(yán)重影響海鱸養(yǎng)殖經(jīng)濟(jì)效益。

肝臟是魚(yú)類(lèi)的重要實(shí)質(zhì)器官，與機(jī)體消化、解毒、免疫和代謝等功能密切相關(guān)[2-4]。養(yǎng)殖環(huán)境變化、流行性病害、藥物濫用、投喂不當(dāng)?shù)染鶗?huì)造成魚(yú)體肝臟的病變[3-7]。肝臟作為重要的消化器官，其損傷會(huì)引起料比高，消化吸收能力減弱，免疫系統(tǒng)紊亂，導(dǎo)致魚(yú)體抗病力下降等，進(jìn)而引發(fā)一系列的養(yǎng)殖問(wèn)題的出現(xiàn)[4-6]。溫度是影響?hù)~(yú)類(lèi)生長(zhǎng)發(fā)育的重要因素之一，眾多研究表明，高溫脅迫造成虹鱒、石斑魚(yú)、牙鲆、大黃魚(yú)等生長(zhǎng)率、存活率降低，引發(fā)肝臟損傷，甚至死亡[8-12]。夏季高溫加上投喂過(guò)度則更易引發(fā)肝臟損傷，影響?hù)~(yú)類(lèi)健康生長(zhǎng)。目前，對(duì)魚(yú)類(lèi)肝臟疾病的研究，主要集中在草魚(yú)、青魚(yú)、羅非魚(yú)等淡水經(jīng)濟(jì)魚(yú)類(lèi)上，包括發(fā)病癥狀、發(fā)病原因、發(fā)病規(guī)律、不同藥物治療效果等，如脂肪肝、毒性和藥源性物質(zhì)引發(fā)的肝中毒等[3-5]。鱸魚(yú)類(lèi)僅大口黑鱸、梭鱸有相關(guān)研究，孫永旭等從免疫學(xué)角度研究發(fā)現(xiàn)長(zhǎng)期高溫脅迫對(duì)大口黑鱸幼體產(chǎn)生應(yīng)激損傷，并且肝臟對(duì)溫度脅迫更敏感，王國(guó)成研究發(fā)現(xiàn)高溫脅迫造成梭鱸肝臟損傷[13-14]。海鱸僅涉及對(duì)養(yǎng)殖過(guò)程中常見(jiàn)病害的病原病因分析和防治建議等基礎(chǔ)研究，尚未見(jiàn)從病理組織學(xué)和免疫學(xué)角度去研究海鱸肝臟疾病及防治效果的相關(guān)報(bào)道。因此，探尋防治魚(yú)類(lèi)肝膽疾病的有效藥物具有非常重要的意義。本研究通過(guò)高溫脅迫構(gòu)建海鱸肝臟損傷模型，對(duì)模型組投喂以添加不同濃度復(fù)方杜仲提取物的商品飼料，從組織病理學(xué)和免疫學(xué)層面探討中草藥制劑防治的有效性，為研究中草藥制劑作為海鱸保肝藥物的應(yīng)用提供參考。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料及試驗(yàn)魚(yú) 試驗(yàn)用海鱸購(gòu)自珠海市斗門(mén)區(qū)一精養(yǎng)池塘，共150尾，平均體重（100.0±5.0）g。海鱸全價(jià)商品飼料購(gòu)自市場(chǎng)，產(chǎn)品主要成分見(jiàn)表1。含復(fù)方杜仲提取物中草藥制劑是廣東海大集團(tuán)股份有限公司自主研制及生產(chǎn)的專(zhuān)利產(chǎn)品。血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）和谷草轉(zhuǎn)氨酶（AST）酶采用試劑盒進(jìn)行測(cè)定，試劑盒購(gòu)自上海酶聯(lián)生物科技有限公司。

1.2 試驗(yàn)養(yǎng)殖管理 養(yǎng)殖用水為經(jīng)全循環(huán)系統(tǒng)曝氣凈化的自來(lái)水。試驗(yàn)期間持續(xù)增氧，水體pH7.0～7.8，水溫27℃，溶解氧7.0～8.0mg/L，每天上、下午各投餌1次（10∶00、16∶00），試驗(yàn)期間飽食投喂。

1.2.1 試驗(yàn)分組及高溫模型的構(gòu)建 試驗(yàn)組分為1個(gè)常溫組（27±0.5℃）和4個(gè)高溫組（33±0.5℃），每組3個(gè)平行，10尾/組，各飼養(yǎng)在容積為200L的圓柱形水族箱中。室溫（27±0.5）℃進(jìn)行暫養(yǎng)5d后，高溫組加入加熱棒，使水體以1℃/d的速度升溫，升至（33±0.5）℃后維持2周，常溫組不升溫，造模期間各組均投喂海鱸全價(jià)商品飼料。

1.2.2 投喂復(fù)方杜仲提取物中草藥制劑 基于前期預(yù)試驗(yàn)結(jié)果，造模2周后，每組隨機(jī)選取一平行全部解剖，取樣做病理組織切片分析。確定已成功構(gòu)建海鱸肝臟病理?yè)p傷模型后，將高溫組分為高溫對(duì)照組和3個(gè)試驗(yàn)組，普通組不變。常溫組和高溫對(duì)照組投喂常規(guī)配合飼料，高溫試驗(yàn)組投喂常規(guī)配合飼料和中草藥飼料混合物，中草藥制劑和常規(guī)飼料比例分別為1∶6、1∶4和1∶2。高溫組（33±0.5）℃、常溫組（27±0.5）℃繼續(xù)維持2周。

1.3 樣品采集及肝組織病理組織學(xué)觀察 試驗(yàn)結(jié)束后，禁食24h，每組隨機(jī)取3尾魚(yú)用于尾靜脈采血，靜置4h后以4000rpm/min、4℃條件下離心10min，收集血清，試劑盒檢測(cè)谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）和谷草轉(zhuǎn)氨酶（AST）含量。同時(shí)取魚(yú)的肝臟制作組織切片，光學(xué)顯微鏡觀察組織切片。

1.4 數(shù)據(jù)處理 試驗(yàn)結(jié)果以平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤差形式表示。采用SPSS統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的標(biāo)準(zhǔn)為P<0.05。

2 結(jié)果與分析

2.1 海鱸肝臟損傷模型 造模2周后，與常溫組相比，高溫組肝組織均出現(xiàn)一定程度的病理特征：肝細(xì)胞腫脹、體積增大、胞漿染色變淺、空泡變性、肝血竇狹窄、血細(xì)胞減少（圖1 A1-A2）。

2.2 投喂不同比例的復(fù)方杜仲提取物中草藥對(duì)海鱸肝臟修復(fù)的影響

2.2.1 肝臟組織形態(tài) 投喂復(fù)方杜仲提取物中草藥制劑后，與高溫對(duì)照組比較，各高溫試驗(yàn)組肝組織均出現(xiàn)不同程度好轉(zhuǎn)，其中1∶2試驗(yàn)組的肝組織修復(fù)效果最好。1∶6和1∶4試驗(yàn)組肝組織結(jié)構(gòu)正常，肝細(xì)胞的損傷程度有所降低，空泡變性的程度減輕，肝細(xì)胞血竇血流量正常（圖1 B1-B2）;1∶2試驗(yàn)組肝血竇豐度較高，肝內(nèi)血流量大，肝細(xì)胞形態(tài)整體符合正常范圍（圖1 C1-C2）。

2.2.2 血清轉(zhuǎn)氨酶檢測(cè)結(jié)果 由表2可知，添加復(fù)方杜仲提取物2周后，海鱸血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）和谷草轉(zhuǎn)氨酶（AST）含量均呈降低趨勢(shì)，且下降幅度隨中草藥添加量增加而增大，1∶2試驗(yàn)組ALT和AST均極顯著低于高溫對(duì)照組（P<0.01），與常溫組差距最小。1∶4試驗(yàn)組ALT和AST雖與高溫對(duì)照組相比有顯著差異，但與常溫組差距較大。因此，1∶2試驗(yàn)組修復(fù)效果最好。

3 討論

肝臟是魚(yú)類(lèi)重要的消化、免疫、代謝、解毒器官，在集約化養(yǎng)殖的情況下，肝臟疾病的發(fā)生已成為限制水產(chǎn)養(yǎng)殖快速、健康發(fā)展的重要問(wèn)題[3-7]。閆少靜、汪開(kāi)毓、介子林等研究表明，肝臟損傷或病變往往會(huì)引起魚(yú)類(lèi)免疫系統(tǒng)紊亂、抗病力下降，并極易引發(fā)其他疾病暴發(fā)，造成魚(yú)類(lèi)大量死亡[4-6]。肝臟是機(jī)體內(nèi)代謝最為旺盛的組織器官之一，Lushchak研究表明熱應(yīng)激可使肝臟氧化還原反應(yīng)明顯增強(qiáng)，進(jìn)而產(chǎn)生大量活性氧造成肝細(xì)胞損傷，李大鵬、童娜等發(fā)現(xiàn)對(duì)損傷的適應(yīng)性反應(yīng)常引起細(xì)胞結(jié)構(gòu)改變，當(dāng)細(xì)胞膜通透性改變、細(xì)胞內(nèi)水分增加時(shí)，即出現(xiàn)細(xì)胞腫脹、水泡變性，所以長(zhǎng)期高溫容易引發(fā)魚(yú)類(lèi)肝臟疾病[15-17]。管標(biāo)、Aboka、李佳凱等研究表明虹鱒、鳙魚(yú)、大黃魚(yú)等受到高溫脅迫后，應(yīng)激反應(yīng)強(qiáng)烈，肝臟發(fā)生損傷[11，18-19]。汪開(kāi)毓、周寧、杜震宇等對(duì)魚(yú)類(lèi)肝臟疾病分析發(fā)現(xiàn)，飼料投喂不當(dāng)，包括蛋白質(zhì)含量過(guò)高、維生素缺乏、投喂過(guò)度等，也是引發(fā)肝臟疾病的一類(lèi)重要原因[2，4，20]。本試驗(yàn)結(jié)果顯示，高溫期間飽食投喂能夠引發(fā)海鱸肝臟損傷，主要病理組織學(xué)癥狀為肝細(xì)胞腫大、肝細(xì)胞發(fā)生空泡變性。

Aboka、邵彥翔等研究表明急性細(xì)胞腫脹是一種早期的、完全可逆的損傷[9，19]。中草藥因其療效好、無(wú)殘留等優(yōu)點(diǎn)，開(kāi)發(fā)對(duì)肝臟具有保護(hù)作用的中草藥是目前研究的熱點(diǎn)[21，24]。農(nóng)業(yè)部推薦養(yǎng)殖生產(chǎn)中使用的GMP中草藥有多種，多用于抗菌治療，且存在普適性、對(duì)癥性差等弊端。劉英娟、白潔、謝炎福等研究發(fā)現(xiàn)，枸杞多糖、葉下珠、當(dāng)歸提取物、甘草提取物、黃芪提取物、姜黃素、黃芩、垂盆草等對(duì)肝臟具有良好的保護(hù)和損傷修復(fù)效果[23，25-27]。但目前這些研究成果多停滯在基礎(chǔ)理論研究層面，距離快速實(shí)現(xiàn)產(chǎn)品化及投入市場(chǎng)應(yīng)用還很遙遠(yuǎn)。所以解決此類(lèi)肝臟疾病對(duì)于推動(dòng)水產(chǎn)行業(yè)的健康發(fā)展具有重大意義。杜仲是我國(guó)特有的經(jīng)濟(jì)林資源和名貴藥材，其化學(xué)成分多樣且復(fù)雜，生物活性廣泛，具有保肝護(hù)腎、抗炎、提高生長(zhǎng)性能等藥理作用[28-31]。近年來(lái)，關(guān)于杜仲修復(fù)肝細(xì)胞、調(diào)節(jié)養(yǎng)殖動(dòng)物免疫作用的報(bào)道在畜禽和淡水魚(yú)方面報(bào)道較多，羅慶華、高銀輝、王建輝等研究表示添加杜仲提取物能提高機(jī)體免疫應(yīng)答水平，增強(qiáng)抗肝細(xì)胞損傷、抗纖維化、抗細(xì)菌感染能力，而在特種魚(yú)方面相關(guān)很少[32-36]。本試驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)，內(nèi)服復(fù)方杜仲提取物后，肝細(xì)胞組織顯著得到改善，肝細(xì)胞形態(tài)恢復(fù)正常，肝細(xì)胞排列整齊，血竇豐度正常。而且這種防治效果隨著復(fù)方杜仲提取物添加量增加而提高，這將更有利于肝臟發(fā)揮正常的生理機(jī)能，更能促進(jìn)海鱸的免疫功能及消化吸收進(jìn)行。免疫學(xué)檢測(cè)指標(biāo)亦顯示，復(fù)方杜仲提取物能顯著對(duì)抗肝損傷海鱸血清中ALT、AST水平的升高，并呈現(xiàn)明顯的劑量相關(guān)性。試驗(yàn)結(jié)果表明復(fù)方杜仲提取物對(duì)肝臟受損海鱸具有明顯的保護(hù)作用，孫黎清、戚向陽(yáng)、劉慧等對(duì)其有效成分分析發(fā)現(xiàn)，這可能與杜仲所含有的一些化學(xué)活性成分如苷類(lèi)、生物堿、多糖等有關(guān)，因?yàn)樯鲜龌钚猿煞志哂姓{(diào)節(jié)動(dòng)物機(jī)體免疫作用[29-30，37]。

4 結(jié)論

試驗(yàn)結(jié)果表明，飼料中添加復(fù)方杜仲提取物對(duì)受損海鱸肝組織有修復(fù)作用，還能顯著降低血清ALT和AST活性。因此，復(fù)方杜仲提取物對(duì)受損海鱸肝臟有保護(hù)作用，并具有促進(jìn)機(jī)體免疫機(jī)能恢復(fù)作用，可以作為一種保肝制劑。

參考文獻(xiàn)

[1]麥良彬，姜志勇，鐘小慶.2018年海水鱸魚(yú)養(yǎng)殖漁情專(zhuān)題報(bào)告[J].當(dāng)代水產(chǎn)，2019（4）：82-83.

[2]周寧.淺談魚(yú)類(lèi)肝膽綜合征的防治[J].科學(xué)養(yǎng)魚(yú)，2017（9）：91-91.

[3]姜禮燔.魚(yú)類(lèi)肝臟疾病及防治研究[J].內(nèi)陸水產(chǎn)，2003，28（1）：43-44.

[4]汪開(kāi)毓.魚(yú)類(lèi)肝病防治[J].淡水漁業(yè)，2001，31（1）：37-40.

[5]介子林，李傳圣.集約化養(yǎng)殖魚(yú)類(lèi)肝臟疾病的防治[J].河南水產(chǎn)，2002，（4）：23.

[6]閆少靜，李欣宇.魚(yú)類(lèi)脂肪肝病淺析[J].江西水產(chǎn)科技，2019（1）：34-36.

[7]劉偉，文華，蔣明，等.投喂率和投喂頻率對(duì)吉富羅非魚(yú)幼魚(yú)生長(zhǎng)和肝臟健康的影響[J].淡水漁業(yè)，2019，49（2）：89-98.

[8]馮淇元，線(xiàn)婷，王荻，等.中草藥添加劑對(duì)熱應(yīng)激虹鱒部分生化指標(biāo)及激素水平的影響[J].水產(chǎn)學(xué)雜志，2019，32（2）：8-15.

[9]邵彥翔，陳超，張廷廷，等.高溫脅迫對(duì)2種雜交石斑魚(yú)存活率及血清生化指標(biāo)的影響[J].廣東海洋大學(xué)學(xué)報(bào)，2017，37（6）：93-99.

[10]徐冬冬，樓寶，詹煒，等.高溫脅迫對(duì)褐牙鲆生長(zhǎng)及肝臟抗氧化酶活性的影響[J].水產(chǎn)學(xué)報(bào)，2010，34（7）：1099-1105.

[11]李佳凱，王志勇，劉賢德，等.高溫對(duì)大黃魚(yú)（larimichthys crocea）幼魚(yú)血清生化指標(biāo)的影響[J].海洋通報(bào)，2015（4）：457-462.

[12]肖啟東，方俊華，楊斌.持續(xù)高溫對(duì)不同水產(chǎn)養(yǎng)殖品種的影響和防治對(duì)策[J].漁業(yè)致富指南，2005，11：40-41.

[13]孫永旭，董宏標(biāo)，王文豪.溫度對(duì)大口黑鱸幼魚(yú)不同組織抗氧化能力及免疫相關(guān)蛋白表達(dá)的影響[J].生態(tài)科學(xué)，2019，38（3）：18-25.

[14]王國(guó)成.高溫脅迫對(duì)白梭吻鱸生理生化的影響及其HSC70基因的克隆與表達(dá)[D].蘇州：蘇州大學(xué)，2017：2-7.

[15]Lushchak V I， Bagnyukova T V. Temperature increase results in oxidative stress in goldfish tissues Indices of oxidative stress[J]. Comparative Biochemistry & Physiology Part C Toxicology & Pharmacology， 2006，143（1）：30-35.

[16]李大鵬，劉松巖，謝從新.水溫對(duì)中華鱘血清活性氧含量及抗氧化防御系統(tǒng)的影響[J].水生生物學(xué)報(bào)，2008，32（3）：327-332.

[17]童娜，尹曉燕，李大鵬.急性熱應(yīng)激對(duì)草魚(yú)腎細(xì)胞的影響[J].華中農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，2014，33（4）：88-92.

[18]管標(biāo)，溫海深，劉群，等.急性溫度脅迫對(duì)虹鱒肝臟代謝酶活性及生長(zhǎng)相關(guān)基因表達(dá)的影響[J].大連海洋大學(xué)學(xué)報(bào)，2014（6）：566-571.

[19]Aboka E R， Jian Z， Shengming S. Histopathological changes in gills， liver， and kidney tissues of bighead carp（aristichthys nobifis）due to the effects of acute high—temperature stress[J]. The Israeli Journal of Aquaculture-Bamidgeh， 2017， 69：2-10.

[20]杜震宇.養(yǎng)殖魚(yú)類(lèi)脂肪肝成因及相關(guān)思考[J].水產(chǎn)學(xué)報(bào)，2014，38（9）：1628-1638.

[21]高峰.中草藥防治甲魚(yú)腫肝病[J].農(nóng)家致富，2008（3）：44-44.

[22]梅景良，黃一帆，陳文列.中藥制劑對(duì)歐鰻實(shí)驗(yàn)性肝病保護(hù)作用的超微病理學(xué)研究[J].中國(guó)農(nóng)學(xué)通報(bào)，2006，22（6）：468-468.

[23]謝炎福.中草藥治療鯉脂肪肝病[J].齊魯漁業(yè)，2008（4）：5-6.

[24]張盈嬌，朱宇，王娟.中西藥結(jié)合防治養(yǎng)殖魚(yú)類(lèi)夏季肝膽疾病[J].現(xiàn)代農(nóng)業(yè)科技，2009（20）：336-336.

[25]劉英娟，杜金梁，賈睿，等.枸杞多糖對(duì)四氯化碳致建鯉急性肝損傷的保護(hù)作用[J].浙江農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)，2015，27（1）：37-43.

[26]白潔.葉下珠對(duì)魚(yú)類(lèi)肝損傷保護(hù)機(jī)理的研究[D].福州：福建農(nóng)林大學(xué)，2008：3-5.

[27]陳鵬飛，陳靜，郭兆祥.四逆散對(duì)鯉魚(yú)肝臟保護(hù)與修復(fù)作用的初步研究[J].飼料工業(yè)，2006，27（6）：28-31.

[28]羅慶華.杜仲葉粉對(duì)鯉魚(yú)免疫力的影響[J].湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)（自然科學(xué)版），2002，28（1）：51-53.

[29]戚向陽(yáng)，陳維軍，張聲華，等.杜仲粉的藥理作用及其有效成分特性研究[J].中國(guó)食品學(xué)報(bào)，2002，2（4）：42-47.

[30]孫黎清.杜仲有效成分分析及藥理學(xué)探析[J].中國(guó)中醫(yī)藥咨訊，2012，4（2）：56-56.

[31]張青紅.飼料中添加杜仲葉粉對(duì)青魚(yú)生長(zhǎng)、免疫和肉質(zhì)的影響研究[D].南寧：廣西大學(xué)，2015：1-9.

[32]羅慶華，賀建華，劉清波.杜仲大蒜復(fù)方添加劑對(duì)草魚(yú)免疫力的影響[J].安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，2007，35（28）：8910-8911.

[33]高銀輝，史秀玲，王美，等.杜仲醇提物和水提物對(duì)小鼠免疫性肝損傷保護(hù)作用的研究[J].華北煤炭醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2011，13（2）：7-9.

[34]王建輝，賀建華，易宣.杜仲提取物對(duì)豬生長(zhǎng)性能及血液指標(biāo)的影響[J].飼料研究，2007（2）：1-4.

[35]周程艷，艾凌艷，王美，等.杜仲多糖抗肝纖維化作用的實(shí)驗(yàn)研究[J].中草藥，2011，42（2）：324-329.

[36]周程艷，余海平，王樹(shù)華，等.杜仲醇提物對(duì)小鼠急性肝損傷的保護(hù)作用[J].中國(guó)中藥雜志，2009，34（9）：1173-1175.

[37]劉慧，劉仲華，張盛.杜仲中活性成分的研究進(jìn)展[J].農(nóng)產(chǎn)品加工，2011（8）：12-18. （責(zé)編：王慧晴）