香菇液體菌種培養(yǎng)基篩選及適宜接種期試驗(yàn)初報(bào)

陳文杰

（1河北省微生物研究所，河北保定071051；2廊坊師范學(xué)院，河北廊坊065000）

香菇（Lentinus edodes）液體菌種一直以來被認(rèn)為具備使用方便、出菇整齊、出菇快、利于機(jī)械化自動化生產(chǎn)等優(yōu)勢；但也有較多缺點(diǎn)，特別是生產(chǎn)不穩(wěn)定，經(jīng)常出現(xiàn)菌絲不萌發(fā)現(xiàn)象（筆者預(yù)備試驗(yàn)也出現(xiàn)過這種情況）。分析原因可能有兩個：一是發(fā)酵液中菌絲體含量太少，接種后不能適應(yīng)外界環(huán)境，二是轉(zhuǎn)接過早菌絲體含量不足，接種后不萌發(fā)，或接種過晚，菌絲體產(chǎn)生了次生代謝物，菌絲活力下降。為此，筆者進(jìn)行本試驗(yàn)。

1 材料與方法

1.1 供試菌株

香菇0912，河北省微生物研究所食用菌研究室提供。

1.2 試驗(yàn)設(shè)備

QYC-211全溫空氣搖床（常州市三盛儀器制造有限公司）；SW-CJ-1FD超凈工作臺（蘇州安泰空氣技術(shù)有限公司）。

1.3 供試培養(yǎng)基配方

（1）液體搖瓶培養(yǎng)基

配方①：玉米粉6 g，蔗糖6 g，葡萄糖3 g，酵母膏1.5 g，KH2P042 g，MgSO41 g，加水 1 000 mL；配方②：玉米粉2 g，馬鈴薯淀粉2 g，葡萄糖20 g，酵母膏2 g，KH2P041 g，MgSO41 g，加水 1 000 mL；配方③：紅糖12.5 g，MgSO40.5 g，KH2P041 g，酵母粉2.5 g，玉米粉10 g，加水1 000 mL；配方④：豆粉3 g，玉米粉4 g，蔗糖6 g，葡萄糖6 g，KH2PO41.2 g，MgSO40.6 g，酵母膏1.5 g，加水1 000 mL。

（2）木屑培養(yǎng)基：柞木木屑（30目）79%，麩皮20%，石膏1%，培養(yǎng)料含水量55%。木屑培養(yǎng)基分裝到18 mm×180 mm試管中，裝料高度8 cm，126℃下滅菌2 h。

1.4 試驗(yàn)方法

液體菌種培養(yǎng)方法：搖瓶接種后，溫度25℃靜置7 h后上搖床。搖瓶培養(yǎng)溫度25℃，轉(zhuǎn)速180 r/min。

1.4.1 消泡劑添加試驗(yàn)

每個配方液體培養(yǎng)基分裝12瓶（500 mL三角瓶分裝300 mL），其中6瓶加消泡劑，6瓶不加消泡劑（做對照）。配方①和配方④加泡敵，用量為0.05 mg/mL；配方②和配方③加豆油，用量為0.2 mg/mL。觀察泡敵和豆油兩種消泡劑對香菇液體發(fā)酵的影響。

1.4.2 液體菌種培養(yǎng)基配方篩選試驗(yàn)

按供試配方配制液體培養(yǎng)基，500 mL三角瓶分裝300 mL，每個配方6瓶，121℃滅菌0.5 h。觀察菌球形成及菌球量。

1.4.3 液體菌種適宜接種期試驗(yàn)

各配方同時(shí)進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng)，然后分別在搖瓶培養(yǎng)144 h、168 h、192 h、216 h和288 h時(shí)取液體菌種接入試管木屑培養(yǎng)基中，每支試管接種2 mL液體菌種。觀測木屑培養(yǎng)基中菌絲的生長情況，以生長速度為指標(biāo)尋求最佳接種時(shí)間。每個配方液體菌種每天接試管木屑培養(yǎng)基3支。

1.5 測定方法

液體發(fā)酵的菌絲體含量測定：將發(fā)酵液倒入試管中靜置1 h后，測量發(fā)酵液總高度及菌絲體所占高度（菌絲體已下沉），以發(fā)酵液中菌球高度與發(fā)酵液總高度百分比表示[1]。

菌絲在木屑培養(yǎng)基中的生長速度測定：接種后開始觀察菌絲萌發(fā)情況，待接種后48 h菌絲開始吃料時(shí)劃線測量，每天測量一次，直至接種后192 h。

2 結(jié)果與分析

2.1 培養(yǎng)基添加消泡劑試驗(yàn)結(jié)果

觀測搖瓶培養(yǎng)144 h發(fā)酵液，加消泡劑與未加消泡劑的4個配方的發(fā)酵情況沒有區(qū)別，說明兩種消泡劑對發(fā)酵沒有影響。

2.2 液體菌種發(fā)酵配方篩選試驗(yàn)

試驗(yàn)結(jié)果見表1。

由表1可見，搖瓶培養(yǎng)120 h時(shí)，搖瓶內(nèi)菌球少而小，接種意義不大，所以放棄接種試管木屑培養(yǎng)基試驗(yàn)。

搖瓶培養(yǎng)144 h時(shí)，配方①的菌球不如配方②均勻、黏稠。配方②的菌球小而均勻，黏稠，是4個配方里表現(xiàn)最好的，配方③其次，配方④的菌球少不黏稠，最差。搖瓶發(fā)酵液中菌球量排序：配方②＞配方③＞配方①＞配方④。

搖瓶培養(yǎng)168 h時(shí)，4個配方菌球數(shù)量均增多，配方②菌球數(shù)量最多，配方④菌球數(shù)量增長較快，超過了配方③和配方①，搖瓶液體發(fā)酵菌球量排序：配方②＞配方④＞配方③＞配方①。

表1 供試配方液體培養(yǎng)香菇（0912）結(jié)果

表2 試管木屑培養(yǎng)基接種香菇液體菌種菌絲生長觀察

搖瓶培養(yǎng)192 h時(shí)，搖瓶菌球量排序：配方②＞配方④＞配方③＞配方①。但配方②搖瓶較培養(yǎng)168 h時(shí)菌球變少，發(fā)酵液變得更加清澈。

搖瓶培養(yǎng)216 h時(shí)，4個配方菌球量變化不明顯，配方②表現(xiàn)還是最好，搖瓶菌球量排序：配方②＞配方④＞配方③＞配方①。

搖瓶培養(yǎng)288 h時(shí)（又培養(yǎng)了72 h），4個配方菌球數(shù)量沒有明顯變化，發(fā)酵液都變得清澈，搖瓶菌球量排序：配方②＞配方④＞配方③＞配方①。

2.3 液體菌種適宜接種時(shí)間試驗(yàn)結(jié)果

搖瓶培養(yǎng)144 h開始，每24 h各配方搖瓶菌種接種木屑試管。菌絲生長均測量到接種后的第8天（192 h）。試驗(yàn)結(jié)果見表2。

由表2結(jié)果可以計(jì)算得出，搖瓶配方①～配方④不同搖瓶時(shí)間菌種接種木屑培養(yǎng)基后，8 d平均菌絲生長量分別是1.24 cm，1.45 cm，1.33 cm，1.24 cm，配方②搖瓶菌種接種木屑培養(yǎng)基生長速度最快，配方③次之，配方①和配方④較慢。

搖瓶培養(yǎng) 144 h、168 h、192 h、216 h、288 h的液體菌種接種木屑培養(yǎng)基后，8 d平均總生長量分別是1.38 cm，1.29 cm，1.28 cm，1.23 cm和1.39 cm。由此看出，搖瓶培養(yǎng)144 h與288 h液體接種轉(zhuǎn)接供試固體木屑培養(yǎng)基萌發(fā)生長最快，但發(fā)酵時(shí)間越長，污染概率增加，成本上升，因此實(shí)際生產(chǎn)以發(fā)酵144 h為佳。

3 小結(jié)與討論

試驗(yàn)結(jié)果表明：四個供試液體培養(yǎng)基配方，以配方②的香菇生長速度最快，為試驗(yàn)最佳配方。發(fā)酵過程中加入消泡劑泡敵或豆油對發(fā)酵無不良影響。

搖瓶培養(yǎng)144 h菌絲體含量已經(jīng)達(dá)到最大值，進(jìn)入穩(wěn)定期，這時(shí)是菌絲生長最快的時(shí)期，應(yīng)是液體菌種的最好狀態(tài)。轉(zhuǎn)接固體木屑培養(yǎng)基結(jié)果也證明了這一點(diǎn)。

試驗(yàn)搖瓶培養(yǎng)288 h液體菌種轉(zhuǎn)接固體木屑菌絲生長速度與搖瓶培養(yǎng)144 h相當(dāng)，但考慮發(fā)酵時(shí)間太長的生產(chǎn)風(fēng)險(xiǎn)，應(yīng)以發(fā)酵144 h為最佳液體菌種接種時(shí)機(jī)。