2種彝藥對CCl₄誘導(dǎo)小鼠肝臟損傷的影響

董艷珍　郝應(yīng)芬　王思蘆　肖文淵　吉木阿洛

摘要：為探討天胡荽（MT）和虎杖（JC）對四氯化碳誘導(dǎo)小鼠肝損傷的影響，分別以2種彝藥的不同濃度對模型小鼠連續(xù)7 d灌胃給藥，7 d后通過酶聯(lián)免疫吸附測定（ELISA）法檢測小鼠血清中總膽紅素（TBIL）、丙二醛（MDA）含量和肝勻漿中的超氧化物歧化酶（SOD）、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT）、谷草氨酸轉(zhuǎn)氨酶（AST）活性。結(jié)果表明，MT和JC均能不同程度地下調(diào)各項指標，JC效果總體優(yōu)于MT。與模型組比，JC各濃度均可顯著下調(diào)TBIL和MDA含量，且均以低濃度效果最好，使TBIL下降了30.73%（P<0.05），MDA下降了22.42%（P<0.05），JC低濃度組對TBIL的下調(diào)作用優(yōu)于聯(lián)苯雙酯（P<0.05）;聯(lián)苯雙酯與不同濃度的2種彝藥均能顯著降低ALT和AST水平，其中JC高濃度組的效果最好，使ALT比模型組和陽性組分別降低了32.37%（P<0.05）和14.55%（P<0.05），使AST比模型組和陽性組分別降低了26.95%（P<0.05）和8.31%（P>0.05）。JC具有顯著的保肝效果，可為臨床應(yīng)用提供依據(jù)。

關(guān)鍵詞：彝藥;天胡荽;虎杖;四氯化碳;肝功能

中圖分類號： R285.5 文獻標志碼： A

文章編號：1002-1302（2020）07-0214-03

肝臟作為動物機體最大的代謝器官，其功能的完善是保障動物機體健康的重要前提。肝細胞常因病原微生物的侵入或有毒有害物質(zhì)的攝入及代謝而造成損傷，引起肝炎、肝硬化、肝癌等疾病。現(xiàn)代研究表明，許多天然草藥對肝功能具有調(diào)節(jié)作用，彝醫(yī)臨床對肝病的診治具有一定的特色，如天胡荽（Hydrocotyle sibthorpioides，彝藥名為滿天星，簡稱MT）、虎杖（Polygonum cuspidatum，彝藥名為幾初，簡稱JC）均為四川涼山州特產(chǎn)，當?shù)匾歪t(yī)常用其治療肝病和黃疸。本研究探討了2種彝藥的水煎劑對CCl4誘導(dǎo)的急性肝炎中相關(guān)生化指標的影響，以評價其作用機制。

1 材料與方法

1.1 藥物與試劑

天胡荽（MT）、虎杖（JC）（西昌彝醫(yī)藥研究所）;聯(lián)苯雙酯滴丸（萬邦健制藥集團股份有限公司）;丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT）、谷草氨酸轉(zhuǎn)氨酶（AST）、總膽紅素（TBIL）、丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）、Elisa試劑盒均購自武漢純度生物科技公司。

1.2 試驗動物

90只體質(zhì)量為（20±2） g的清潔級健康昆明（KM）小鼠，由西昌學(xué)院動物科學(xué)學(xué)院動物醫(yī)學(xué)實驗室提供，常規(guī)飼養(yǎng)。

1.3 方法

1.3.1 藥物制備

彝藥水煎劑制備：將2種彝藥充分干燥至恒重后，分別取100 g粉碎后過80目篩，以適量去離子水分別煎煮15 min，過濾收集濾液，濾渣重復(fù)煎煮1次，合并濾液濃縮至100 mL，加入乙醇至其終濃度為75%，冷藏過夜后2 000 r/min離心10 min，取上清液回收掉乙醇后，用去離子水配制成濃度為1 g/mL，4 ℃冷藏備用。

聯(lián)苯雙酯懸液制備：將聯(lián)苯雙酯滴丸以適量去離子水研磨，配制成濃度為0.01 mg/mL的懸液。

1.3.2 動物分組與處理

將90只健康KM小鼠，隨機分為15個組，每組10只，雌雄各半?？瞻捉M和模型組每天以0.2 mL去離子水灌胃;2種彝藥各設(shè)高、中、低3個劑量組（1.00、0.50、0.25 g/mL），每天灌胃0.2 mL;陽性組以聯(lián)苯雙酯懸液0.2 mL灌胃;各組均連續(xù)灌胃7 d。除了空白組外，其余各組于分別于第3、5、7天對小鼠腹腔注射0.1% CCl4橄欖油0.2 mL/只。

各組均于最后一次給藥12 h后，摘眼球采血，分離血清待測;同時頸椎脫臼處死小鼠，精確稱取0.1 g肝組織，加入1 mL 4 ℃生理鹽水，用球磨儀勻漿器300次/min的振動頻率研磨90 s，于4 ℃3 000 r/min 離心10 min，取上清液待測。

1.3.3 肝功能指標測定

按照Elisa試劑盒使用說明，以酶標儀測定各指標的標準曲線，計算各組小鼠血清或肝臟勻漿中的TBIL、MDA含量和AST、ALT、SOD活性。

1.3.4 數(shù)據(jù)處理

各組數(shù)據(jù)均以平均值±標準差表示，并對數(shù)據(jù)進行組間方差分析，以P<0.05表示組間差異顯著。

2 結(jié)果與分析

2.1 2種彝藥對小鼠血清TBIL、MDA水平的影響

結(jié)果表明，與空白組比，模型組的TBIL含量升高了11.68%（P>0.05），差異不顯著;MDA含量升高了11.91%（P<0.05），差異顯著，表明CCl4可能誘導(dǎo)小鼠肝臟處理TBIL的能力有下降的趨勢，而肝臟的抗氧化能力則顯著降低。與模型組比，陽性組的聯(lián)苯雙酯可顯著提高肝細胞抗氧化功能，降低TBIL（P>0.05）和MDA（P<0.05）含量，而MT組高、中濃度均能顯著降低血清TBIL含量，其中高濃度效果最好，使血清TBIL含量降低了22.13%（P<0.05），同時比陽性組效果好，且差異顯著（P<0.05）;不同濃度的MT組均可顯著降低血清MDA含量，其中高濃度效果最好，使MDA含量比模型組降低了19.43%;表明MT對CCl4誘導(dǎo)肝損傷小鼠的血清TBIL、MDA含量具有下調(diào)作用，且呈劑量依賴性。

與模型組比，各濃度JC組均可顯著下調(diào)TBIL（P<0.05）和MDA（P<0.05）含量，且均以低濃度效果最好，使TBIL含量下降了30.73%，MDA含量下降了22.42%，JC低濃度組對TBIL的下調(diào)作用優(yōu)于聯(lián)苯雙酯。表明JC可能通過促進肝臟代謝及抗氧化功能，從而抑制CCl4損傷肝細胞（表1）。

2.2 2種彝藥對小鼠肝臟勻漿ALT、AST、SOD活性的影響

試驗結(jié)果表明，與空白組比，CCl4未引起小鼠肝臟的SOD表達發(fā)生變化，但使模型組ALT和AST在肝勻漿中的活性均顯著升高（P<0.05），表明肝細胞出現(xiàn)顯著的損傷。與模型組比，陽性藥物聯(lián)苯雙酯與2種彝藥不同劑量均能顯著降低ALT和AST活性，其中JC高濃度組的效果最好，使ALT比模型組和陽性組分別降低了32.37%（P<0.05）和14.55%（P<0.05），使AST比模型組和陽性組分別降低了26.95%（P<0.05）和8.31%（P>0.05），說明MT和JC均可能通過抵抗或抑制CCl4代謝的某環(huán)節(jié)發(fā)揮不同程度的保肝效果，且JC組的效果整體優(yōu)于MT組，但二者與聯(lián)苯雙酯均對肝臟SOD的活性無顯著影響（表2）。

3 討論

研究表明，CCl4在肝臟內(nèi)被細胞色素P450激活產(chǎn)生具有毒性的三氯甲基自由基和三氯甲基過氧自由基，對肝細胞膜和細胞器膜均有破壞作用，從而導(dǎo)致肝細胞壞死。陽性藥物聯(lián)苯雙酯可以通過對抗自由基，發(fā)揮保肝降酶、減輕肝臟損傷的作用。

天胡荽的現(xiàn)代藥理研究表明，其主要的活性成分為黃酮類槲皮素，具有抗炎活性[1]。天胡荽具有抗乙型肝炎病毒表面抗原的活性[2]，以及抗肝纖維化作用[3]，在臨床用于治療病毒性肝炎及黃疸?；⒄鹊乃幚硌芯勘砻?，其大黃素等蒽醌類化合物具有病毒、抗菌活性[4]?；⒄溶盏姆肿咏Y(jié)構(gòu)中含有許多共軛雙鍵，清除自由基是虎杖苷抗氧化的途徑之一，因此具有顯著的抗氧化性[5];同時虎杖苷通過阻斷NF-κB途徑，下調(diào)腫瘤壞死因子（TNF-α）、白介素6（IL-6）和白介素1b（IL-1b）的表達發(fā)揮抗炎活性[6-7]。目前這2種草藥對肝臟功能的影響研究報道較少，洪照友等研究表明，虎杖水煎劑可能通過降低肝缺血性損傷組織中氧自由基的含量，減少其對肝組織的損傷[8]。

本試驗中，由CCl4代謝產(chǎn)生的自由基引起細胞膜脂質(zhì)發(fā)生過氧化反應(yīng)產(chǎn)生MDA，而血清MDA含量在一定程度可以反映細胞的損傷程度，試驗結(jié)果表明，2種彝藥對血清MDA含量具有下調(diào)作用，但對肝臟組織SOD的活性沒有顯著影響，說明2種彝藥的保肝作用可能與SOD活性無關(guān)，而是通過抑制代謝CCl4的氧化酶活性或者含有能與自由基反應(yīng)的抗氧化活性基團實現(xiàn)的。同時，本試驗結(jié)果表明，MT和JC的水煎劑均可不同程度地降低小鼠肝臟中的ALT和AST的活性，說明二者可能通過對抗自由基維護肝細胞膜穩(wěn)定性，減少肝細胞損傷，同時還能促進肝細胞對間接膽紅素的轉(zhuǎn)化，有利于直接膽紅素的排泄，從而降低血清TBIL含量，發(fā)揮臨床治療肝炎性黃疸的作用。

參考文獻：

[1]董關(guān)濤，宋良科，李小鋒，等. 天胡荽及其近緣植物的槲皮素含量測定[J]. 安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，2010，38（10）：5101-5103.

[2]鄭民實，李 文，李 蓉，等. 使用ELISA技術(shù)篩選270種中草藥抗HBsAg作用[J]. 中醫(yī)研究，1996，9（1）：51-54.

[3]彭震宇，王一奇，戚虎昶，等. 天胡荽有效成分HAS抗大鼠免疫性肝纖維化的實驗研究[J]. 中華中醫(yī)藥學(xué)，2009，27（8）：1654-1656.

[4]時圣明，潘明佳，王文倩，等. 虎杖的化學(xué)成分及藥理作用研究進展[J]. 2016，39（2）：317-321.

[5]蘇 丹，張邦樂，宦夢蕾，等. 白藜蘆醇與白藜蘆醇苷抗氧化活性比較[J]. 中國藥師，2010，13（4）：471-473.

[6]Xie X，Peng J，Huang K，et al.Polydatin ameliorates experimental diabetes-induced fibronectin through inhibiting the activation ofNF-κB signaling pathway in rat glomerular mesangial cells[J]. Mole Cell Endocrinol，2012，362（1/2）：183-193.

[7]Yao J，Wang J Y，Liu L，et al.Polydatin ameliorates DSS-induced colitis in mice through inhibition of nuclear factor-κB activation[J]. Planta Med，2011，77（5）：421-427.

[8]洪照友，高 毅，詹興海. 中藥虎杖對大鼠肝臟缺血性損傷保護的形態(tài)學(xué)觀察[J]. 世界華人消化雜志，2000（2）：162-164.