鐵觀音茶水提物對小鼠高尿酸血癥的緩解作用

席圓圓, 徐宏彥, 劉霞, 尹慧青, 劉曉盼, 王慶路, 王清路

齊魯醫(yī)藥學院, 山東省高校生物醫(yī)學工程技術重點實驗室, 山東 淄博 255300

近年來，隨著不良飲食習慣(如高嘌呤、高鹽、高糖飲食等)的增加導致高尿酸血癥(hyperuricemia，HUA)和痛風的發(fā)病率逐漸上升[1-2]。高尿酸血癥是指在正常嘌呤飲食狀態(tài)下，非同日2次空腹血尿酸水平男性高于420 μmol·L-1、女性高于360 μmol·L-1，即稱為高尿酸血癥[3]。高尿酸血癥在人群中高發(fā)，隱藏性強，危害性大。研究表明，高尿酸血癥不僅是痛風的并發(fā)癥，還會引起糖尿病、高血壓、動脈粥樣硬化等其他一系列疾病[4-5]。還有不少高尿酸血癥患者，可以持續(xù)不發(fā)生癥狀，被稱為無癥狀高尿酸血癥，但無癥狀高尿酸血癥仍會造成患者腎臟損害，且這類患者依舊有發(fā)生痛風等疾病的風險[6-8]。

肝臟黃嘌呤氧化酶(xanthine oxidase，XOD)活性異?；蛘呤悄蛩?uric acid，UA)排泄量減少都會導致尿酸蓄積量增加，二者是導致HUA的主要原因[9]。因此，調(diào)整機體相關酶活性以及相關尿酸陰離子轉(zhuǎn)運體的表達是防治和緩解高尿酸血癥的重要切入點。黃嘌呤氧化酶是尿酸生成過程中的關鍵酶，可通過抑制其活性來降低血清尿酸水平,進而達到緩解高尿酸血癥的效果[10]。尿酸重吸收轉(zhuǎn)運體尿酸轉(zhuǎn)運蛋白1(uric acid transporter 1，URAT1)、有機陰離子轉(zhuǎn)運蛋白3(organic anion transporter 3，OAT3) 、葡萄糖轉(zhuǎn)運子9(glucose transporter 9，GLUT9)和有機陰離子轉(zhuǎn)運蛋白1(organic anion transporter 1，OAT1)是控制尿酸代謝的重要陰離子轉(zhuǎn)運體。URAT1主要表達于腎小管上皮細胞刷狀緣，促進上皮細胞對尿酸的重吸收；OAT1和OAT3主要表達于腎近曲小管基底膜，其中，OAT1主要作用是將尿酸鹽從管周間隙攝取入腎小管細胞，而OAT3主要作用是將尿酸鹽陰離子從基底膜轉(zhuǎn)運到腎近曲小管上皮細胞進而促進尿酸的排泄；GLUT9是一種高效能尿酸鹽轉(zhuǎn)運體，主要表達于近端腎小管[11-12]。因此，URAT1、OAT1、OAT3、GLUT9基因表達水平的變化可以反映高尿酸血癥的發(fā)展程度，且URAT1、OAT3表達的增加以及OAT1、GLUT9表達的減少，對于降低血清尿酸濃度具有重要意義[13-14]。

茶水是深受我國居民喜愛的傳統(tǒng)飲品。茶葉在國人眼中是保健佳品，而鐵觀音茶在日常飲用選擇中尤為普遍。鐵觀音在六大類茶中屬半發(fā)酵茶，含有茶黃素、植物堿等具有特性和功能的成分，具有治療心腦血管疾病、降脂、預防神經(jīng)退行性疾病等多種生物活性作用[15-16]。諸多研究表明，發(fā)酵茶(如紅茶等)的提取物具有抑制肝臟XOD活性、減少尿酸生成以及促進尿酸排泄的作用[17-18]。有研究表明，發(fā)酵茶具有降低高尿酸血癥模型小鼠血清尿酸的作用[17,19]，但目前有關半發(fā)酵茶對于高尿酸血癥的影響的研究報道較少。因此，本研究以半發(fā)酵茶鐵觀音茶為原料，以高尿酸血癥小鼠為研究對象，將21只已造模成功的小鼠隨機分為模型組、鐵觀音茶水提物組、陽性藥物組，7只非模型鼠作為對照組。不同處理2周后，通過觀察病理切片、測定生化指標并從分子層面測定相關基因和蛋白質(zhì)的表達，繼而探究半發(fā)酵茶鐵觀音茶水提物是否具有緩解高尿酸血癥的作用，以期為居民選擇養(yǎng)生飲品提供指向作用，也為今后相關藥物研發(fā)提供思路。

1 材料與方法

1.1 材料、試劑與儀器設備

1.1.1 實驗動物 SPF級雄性昆明小鼠40只，體重(25±2) g，購自濟南金豐實驗有限公司。正常飼養(yǎng)溫度21～25 ℃，相對濕度55%～65%，12 h光照/12 h黑暗，正常飼養(yǎng)，自由進水、進食。

1.1.2 實驗材料 鐵觀音茶由福建省安溪市獨尊一品旗幟店生產(chǎn)加工。鐵觀音屬于青茶類，介于綠茶和紅茶之間，屬于半發(fā)酵茶，經(jīng)過采摘、涼青、做青、炒青、簸揀等工藝加工而成。

1.1.3 實驗試劑 氧嗪酸鉀購自上海愛純生物科技有限公司；別嘌呤醇片購自凱瑪試劑有限責任公司；次黃嘌呤購自合肥博美生物科技有限責任公司；尿酸試劑盒、XOD試劑盒購自南京建成生物工程研究所；Trizol試劑、異丙醇、氯仿、無水乙醇等分析純試劑購自碧云天生物技術公司；PMSF、蛋白裂解液、Qubit 蛋白定量試劑盒、TransScript Green one step qRT-PCR supermix購自全式金生物公司；高靈敏度化學發(fā)光檢測試劑盒、一抗Rabbit anti-XOD和二抗HRP-anti-Rabbit IgG購自英國Abcam公司；顯影液、定影液購自天津市世紀奧博商貿(mào)有限公司；化學發(fā)光HPR底物購自北京科恩堡生物科技有限公司；引物由生工生物工程(上海)股份有限公司合成。

1.1.4 儀器與設備 冷凍干燥機(上海愛朗儀器有限公司)；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀、分光光度計、臺式離心機(上海安亭科學儀器廠)；脫水機、切片機(濟南豐奧有限公司)；烤片機、漂片儀(常州市郝思琳醫(yī)用儀器有限公司)；新型金屬浴、實時定量PCR儀(杭州博日科技有限公司)；Qubit 3.0系統(tǒng)(美國Thermo Scientific公司)；電泳儀(北京六一生物科技有限公司)。

1.2 實驗方法

1.2.1 茶粉制備方法 稱取鐵觀音茶葉56 g，按茶水比1∶10在沸水浴中提取30 min，過濾，再將濾渣加入280 mL沸水水浴加熱15 min，合并濾液于55 ℃下旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮至200 mL，-20 ℃預凍2 h，再使用冷凍干燥機干燥成茶粉備用。

1.2.2 高尿酸血癥小鼠模型的建立 40只SPF級KM小鼠適應性飼養(yǎng)7 d后，稱重，隨機分為正常組、模型組，正常組10只，模型組30只。模型組利用氧嗪酸鉀300 mg·kg-1和次黃嘌呤250 mg·kg-1聯(lián)合造模7 d[20]，摘眼球取血，每組采血時間不超過5 min，將血液于室溫靜置，離心取血清以檢測血清尿酸(serum uric acid，SUA)濃度，當模型組測得的SUA濃度顯著高于33.2 mg·L-1時，說明造模成功，由此來建立HUA小鼠模型。本實驗中最終造模成功小鼠為21只。

1.2.3 動物實驗設計及取樣 將已造模成功的高尿酸血癥小鼠21只，隨機分為模型組、陽性藥物組、鐵觀音茶水提物組，每組各7只，將它們和未經(jīng)任何處理、相同環(huán)境下飼養(yǎng)的小鼠(空白對照組)一起飼養(yǎng)，并進行稱重。接下來2周，空白對照組和模型組用生理鹽水按照每天每只小鼠0.2 mL的量進行灌胃；陽性藥物組用別嘌呤醇(5 mg·kg-1·d-1)進行灌胃；參照袁冬寅等[21]和朱創(chuàng)等[22]的實驗中低劑量組灌胃組的茶粉灌胃量，給予鐵觀音茶水提物組小鼠茶粉水溶液(500 mg·kg-1·d-1)進行灌胃。

不同處理2周，在末次處理2 h后，眼后靜脈叢取血0.8 mL以檢測末次處理后的血液中的生化指標，隨后頸椎脫位處死小鼠。取肝臟左葉，固定液固定，石蠟包埋，HE染色，用于病理組織學觀察；取肝臟右前葉用于黃嘌呤氧化酶組織測定，其余部分于-80 ℃冰箱保存，用于進一步的分子水平檢測。取腎臟，左腎固定液固定，石蠟包埋，HE染色，用于病理組織學觀察；右腎于-80 ℃冰箱保存，用于腎臟與尿酸轉(zhuǎn)運相關基因表達的檢測。取小腸2 cm左右，用生理鹽水反復沖洗內(nèi)容物，固定液固定，石蠟包埋，HE染色，用于病理組織學觀察；其余小腸于-80 ℃冰箱保存，用于腸道與尿酸轉(zhuǎn)運相關基因表達的檢測。

1.3 檢測方法

1.3.1 高尿酸血癥小鼠肝臟、腎臟、小腸病理切片的觀察 研究表明，尿酸的生成主要在肝臟，尿酸的吸收和轉(zhuǎn)運主要在腎臟，少部分在腸道[23-24]。因此，本研究取肝臟、腎臟、小腸固定于固定液，經(jīng)沖洗、脫水機脫水、石蠟包埋、HE染色等步驟，于光學顯微鏡下觀察病理組織切片，以直觀觀測相關臟器損傷情況。

1.3.2 血清尿酸含量的測定 血清尿酸檢測可以在早期提示腎臟是否存在損傷。將血樣于室溫靜置30 min后，3 000 r·min-1離心10 min，分離血清，然后按尿酸試劑盒說明書測定血清尿酸水平。

1.3.3 肝臟組織中XOD活性測定 肝臟組織中XOD是尿酸生成過程中的關鍵酶，通過檢測其活性，可以在一定程度上了解體內(nèi)尿酸的生成情況。取肝臟組織，稱重后，每1 g組織加入9 mL預冷生理鹽水，在研磨器中勻漿，制成10%肝組織勻漿，3 000 r·min-1離心 10 min，取上清液，然后按黃嘌呤氧化酶(A002-1-1)試劑盒說明書測定XOD的活性。

1.3.4 高尿酸血癥小鼠腎臟與腸道相關轉(zhuǎn)運體mRNA及肝臟XOD mRNA表達水平的測定 通過對高尿酸血癥小鼠腎臟與腸道相關轉(zhuǎn)運體mRNA表達含量的測定，以觀測鐵觀音茶水提物對HUA小鼠分子水平的影響。使用Trizol法提取腎臟中總RNA，用Qubit 3.0系統(tǒng)進行RNA定量，反應體系和反應程序參照實時熒光定量PCR試劑盒進行。檢測肝臟XOD和腸道相關轉(zhuǎn)運體mRNA表達情況與腎臟mRNA測定方法相同。引物序列借助NCBI網(wǎng)站(網(wǎng)址：https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/)設計得到，其中GAPDH為內(nèi)參基因，所用引物序列具體信息見表1。

表1 小鼠腎臟與腸道相關轉(zhuǎn)運體mRNA及肝臟XOD mRNA引物序列Table 1 The primer sequences of kidney and intestinal related transporter mRNA and liver XOD mRNA in mice

1.3.5 Western blot檢測高尿酸血癥小鼠肝臟XOD基因蛋白表達 Western blot可以從蛋白質(zhì)表達情況推測鐵觀音茶水提物對HUA小鼠尿酸的調(diào)控機制。將肝臟組織剪碎并按每100 mg組織加入1 mL RIPA裂解液與10 μL PMSF，研磨勻漿，冰上裂解30 min，14 000 r·min-1、4 ℃離心15 min，取上清液，用Qubit蛋白試劑盒和儀器Qubit 3.0進行蛋白定量，按照上樣量計算，加入5×上樣緩沖液，混勻，金屬浴加熱煮沸5 min。將定量后的蛋白樣品上樣10 μL，10% SDS-PAGE分離膠電泳分離，并在電泳結(jié)束后轉(zhuǎn)膜，將膠上蛋白轉(zhuǎn)至NC膜，在含5%脫脂奶粉的TBST溶液中，37 ℃封閉1 h，然后孵育相關一抗4 ℃過夜，對應二抗37 ℃孵育1 h，曝光之后，進行顯影和定影，利用Image J分析目的蛋白條帶與內(nèi)參條帶的灰度值比值，比較各組差異。

1.4 數(shù)據(jù)處理

利用Origin 8.0軟件繪制圖表，利用Duncan新復極差法分析數(shù)據(jù)。

2 結(jié)果與分析

2.1 鐵觀音茶水提物對高尿酸血癥模型小鼠各組織病理學影響

2.1.1 鐵觀音茶水提物對高尿酸血癥模型小鼠肝臟組織病理學影響 通過觀察小鼠肝臟病理切片，從細胞層面比較各組肝臟損傷情況，進而判斷鐵觀音茶水提物對肝臟受損的高尿酸血癥小鼠的影響。如圖1所示，正常組肝細胞形態(tài)結(jié)構(gòu)正常，無病理現(xiàn)象；模型組肝細胞脂肪變性明顯，可見肝細胞內(nèi)大小不等，多個空泡，肝細胞體積增大，肝索增寬，肝血竇變窄；陽性藥物組與模型組比較時，肝細胞病理變化明顯，肝細胞內(nèi)可見明顯脂肪空泡，肝細胞體積增大，肝索增寬，肝血竇變窄，說明別嘌呤醇治療高尿酸血癥時，對肝臟造成了一定的損傷；鐵觀音茶水提物組的肝臟有一定的可逆性恢復，肝細胞形態(tài)結(jié)構(gòu)正常，無肝細胞壞死現(xiàn)象。說明鐵觀音水提物對高尿酸血癥小鼠的肝臟有一定的保護作用，對高尿酸血癥有一定的緩解作用。

2.1.2 鐵觀音茶水提物對高尿酸血癥模型小鼠腎臟組織病理學影響 通過觀察小鼠腎臟病理切片，從細胞層面比較各組腎臟損傷情況，進而判斷鐵觀音茶水提物對腎臟受損的高尿酸血癥小鼠的影響。如圖2所示，正常組腎小球及腎小管結(jié)構(gòu)正常，無病理變化；模型組腎小管細胞發(fā)生輕度脂肪變性，腎小管上皮細胞內(nèi)可見脂肪空泡，說明造模藥物對腎小管上皮細胞有輕度損傷作用；陽性藥物組與模型組比較，腎小管上皮細胞脂肪變性明顯，可見大小不等圓形空泡，細胞體積增大，向管腔面凸起，細胞核被擠到細胞一側(cè)，呈扁橢圓形，腎小管管腔狹窄，說明別嘌呤醇治療高尿酸血癥時，對腎臟造成了一定的損傷；鐵觀音茶水提物組腎小管上皮細胞正?；蚩梢娚倭恐咀冃?，與模型組比較，病變輕微，大部分腎小管結(jié)構(gòu)恢復正常，個別腎小管上皮細胞內(nèi)可見脂肪空泡。說明鐵觀音水提物對高尿酸血癥小鼠的腎臟有一定的保護作用，對高尿酸血癥有一定的緩解作用。

圖1 鐵觀音茶水提物對高尿酸血癥模型小鼠肝臟的影響(×100)Fig.1 Effect of Tieguanyin tea aqueous extract >on liver in hyperuricemia mice(×100)

圖2 鐵觀音茶水提物對高尿酸血癥模型小鼠腎臟的影響(×100)Fig.2 Effect of Tieguanyin tea aqueous extract on >kidney in hyperuricemia mice(×100)

2.1.3 鐵觀音茶水提物對高尿酸血癥模型小鼠小腸組織病理學影響 鮮有研究報告從病理層面對高尿酸血癥小鼠的腸道損傷情況進行觀測，本實驗通過小腸病理切片闡釋了小腸損害情況。如圖3所示，各實驗組小鼠小腸均管壁形態(tài)結(jié)構(gòu)完整，無病理變化，管腔規(guī)則，小腸絨毛結(jié)構(gòu)完整，上皮細胞形態(tài)結(jié)構(gòu)正常，無病理變化。說明尿酸的轉(zhuǎn)運對腸道的損傷較小，幾乎無法觀測到影響。

2.2 鐵觀音茶水提物對高尿酸血癥模型小鼠血清尿酸濃度及肝臟XOD活性的影響

實驗過程中實驗小鼠正常生長，毛發(fā)細膩光澤，體重正常增加，整體無異常。氧嗪酸鉀和次黃嘌呤聯(lián)合造模后，使用血清尿酸和XOD試劑盒對小鼠相關指標進行檢測，以確定造模是否成功，以及通過比較各組指標，直觀顯示鐵觀音茶對小鼠高尿酸血癥的緩解作用。如表2所示，小鼠模型組和空白對照組相比血尿酸濃度顯著升高(P<0.05)，XOD活性顯著增加(P<0.05)，說明小鼠高尿酸血癥模型造模成功；相比于模型組，鐵觀音茶水提物組和陽性藥物組的小鼠血尿酸濃度顯著降低(P<0.05)，且XOD的活性也顯著降低(P<0.05)。本結(jié)果說明鐵觀音茶水提物可降低高尿酸血癥小鼠的血清尿酸水平，并抑制肝臟XOD活性，進一步展示了其緩解HUA的潛力。

2.3 鐵觀音茶水提物對高尿酸血癥模型小鼠的mRNA的影響

通過對具有目的功能性的相關基因的觀測，進一步探究鐵觀音茶水提物對高尿酸血癥模型小鼠mRNA的影響。從圖4的qRT-PCR結(jié)果可以看出，同模型組相比，鐵觀音茶水提物可顯著恢復降低的URAT1和OAT3的表達水平(P<0.05)，以及顯著減少了OAT1和GLUT9的mRNA的表達水平(P<0.05)。此外，同陽性藥物組相比，鐵觀音茶水提物組的URAT1和OAT3的表達水平呈顯著上升狀態(tài)(P<0.05)。從基因?qū)用孢M一步發(fā)現(xiàn)鐵觀音茶水提物對尿酸轉(zhuǎn)運相關的基因存在抑制或刺激作用，即可通過抑制尿酸轉(zhuǎn)運相關基因OAT1、GLUT9的mRNA表達和刺激URAT1、OAT3的表達，降低血清尿酸濃度。

注：左側(cè)是對腸道宏觀觀察，右側(cè)為微觀觀察。圖3 鐵觀音茶水提物對高尿酸血癥模型小鼠腸道影響(×100)Fig.3 Effect of Tieguanyin tea aqueous extract on >small intestines in hyperuricemia mice(×100)

表2 鐵觀音茶水提物對HUA模型小鼠血清尿酸濃度及肝臟XOD活性的影響Table 2 Effect of Tieguanyin tea aqueous extract on >serum uric acid, xanthine oxidase and adenosine >deaminase activities in hyperuricemia mice

注：同列數(shù)據(jù)后不同小寫字母表示同列數(shù)據(jù)間的差異在P<0.05水平上具有統(tǒng)計學意義。

注：不同小寫字母表示同一基因內(nèi)不同組別數(shù)據(jù)間的差異在P<0.05水平上具有統(tǒng)計學意義。圖4 鐵觀音茶水提物對高尿酸血癥模型小鼠mRNA的影響Fig.4 Effect of Tieguanyin tea aqueous extract on >mRNA in hyperuricemia mice

2.4 鐵觀音茶水提物對高尿酸血癥模型小鼠XOD的mRNA和蛋白表達水平影響

利用qRT-PCR和Western blot對尿酸生成的主要催化酶XOD的mRNA和蛋白的表達水平進行檢測，由此推測鐵觀音茶水提物對小鼠高尿酸血癥的緩解機制。如圖5所示，鐵觀音茶水提物組和陽性藥物組mRNA的表達水平與模型組相比顯著上升(P<0.05)，且與Western blot結(jié)果一致。推測可能是茶水提物中某種成分抑制XOD的活性，使得不具有催化活性的XOD蛋白增加，對XOD基因的轉(zhuǎn)錄表達造成一種正反饋，即增加XOD基因的轉(zhuǎn)錄、翻譯，繼而又產(chǎn)生大量無催化活性的XOD蛋白，從而產(chǎn)生XOD的mRNA和蛋白水平均上調(diào)、但尿酸生成量卻下降的現(xiàn)象。

注：不同小寫字母表示數(shù)據(jù)間的差異在P<0.05水平上具有統(tǒng)計學意義。圖5 鐵觀音茶水提物對高尿酸血癥模型小鼠XOD的影響Fig.5 Effect of Tieguanyin tea aqueous extract on XOD in hyperuricemia mice

3 討論

正常人體尿液中產(chǎn)物主要為尿素，含少量尿酸。尿酸是嘌呤代謝的最終產(chǎn)物，當進行高嘌呤飲食或者肝腎疾病導致尿酸生成和排泄的平衡被打破時，均可導致血清中尿酸升高[5]。如果機體長期處于尿酸過高的狀態(tài)，會導致高尿酸血癥，進而發(fā)展成痛風、高血壓等一系列代謝性疾病[4]。因此很多代謝性疾病發(fā)生、發(fā)展的必經(jīng)之路就是高尿酸血癥，如果能夠在這個階段進行有效調(diào)控，就可以大大降低罹患痛風、高血壓等疾病的患病風險，使居民生活質(zhì)量得到進一步的改善。

本研究主要采用氧嗪酸鉀和次黃嘌呤聯(lián)合造模，升高血清中尿酸的濃度，使小鼠體內(nèi)尿酸生成和排泄處于失衡狀態(tài)，從而形成高尿酸血癥動物模型。模型小鼠經(jīng)過2周處理后，小鼠各個組織的病理切片顯示，別嘌呤醇使小鼠的肝臟出現(xiàn)明顯的脂肪空泡，肝細胞體積增大，肝板增寬，肝血竇變窄，受損嚴重；別嘌呤醇還使小鼠腎小管上皮細胞脂肪變性明顯，出現(xiàn)大小不等的圓形空泡；而鐵觀音水提物組未有明顯改變，說明鐵觀音茶水提物對肝臟和腎臟的損傷要小于別嘌呤醇。尿酸的吸收和轉(zhuǎn)運主要在腎臟，少部分在腸道[24]，但通過病理切片未見腸道有明顯損傷，說明高尿酸血癥可能對腸道影響不大，其嚴重影響的臟器主要為肝臟和腎臟。由病理切片可知，常規(guī)藥物治療也會造成肝、腎的二次損傷，所以研發(fā)有調(diào)節(jié)血尿酸作用、但損害小或無損害藥物成為了新的出發(fā)點，而本研究中的鐵觀音茶水提物為此類藥物的研發(fā)提供了新思路。

在本研究中，末次處理2 h后進行眼球取血，用以檢測血清尿酸濃度，通過觀察發(fā)現(xiàn)，陽性藥物組和鐵觀音茶水提物組相比于模型組，血清中尿酸水平均降低，且均低于對照組，但鐵觀音茶水提物組降尿酸水平更為明顯，提示鐵觀音茶水提物可能具有緩解高尿酸血癥的作用。

在體內(nèi)，尿酸的生成途徑為：腺嘌呤核苷→次黃嘌呤核苷→次黃嘌呤→黃嘌呤→尿酸，整個過程通過黃嘌呤氧化酶催化[22]，實驗表明陽性藥物組和鐵觀音茶水提物組XOD的活性相比模型組均顯著降低(P<0.05)。可見鐵觀音茶水提物對高尿酸血癥小鼠的黃嘌呤氧化酶的活性具有一定的抑制作用，繼而影響整個尿酸生成途徑，從而使尿酸的生成減少。鐵觀音屬于半發(fā)酵茶，發(fā)酵程度在20%～70%，所以鐵觀音可能具有發(fā)酵茶葉和未發(fā)酵茶葉的雙重特性。高文波和翁國斌[25]研究發(fā)現(xiàn)綠茶的茶多酚能抑制細胞中XOD的活性，防止病理條件下自由基的爆發(fā)，鐵觀音茶水提物緩解高尿酸血癥也可能與這一機制有關。

蛋白質(zhì)水平上的結(jié)果也可部分驗證鐵觀音水提物能夠緩解高尿酸血癥?，F(xiàn)今市場上常見的治療高尿酸血癥的藥物為別嘌呤醇等，其治療原理為別嘌呤醇和次黃嘌呤結(jié)構(gòu)相似，化學結(jié)構(gòu)上只是N7與C8互換了位置，因此可以特異性結(jié)合黃嘌呤氧化酶，減少黃嘌呤氧化酶和次黃嘌呤結(jié)合，最終抑制尿酸的生成[26]。而本研究中，鐵觀音水提物組XOD相關蛋白的表達相對于模型組增加，但尿酸生成卻減少，說明鐵觀音水提物中某成分可能和別嘌呤醇等藥物一樣阻斷了黃嘌呤氧化酶催化次黃嘌呤生成黃嘌呤進而生成尿酸的過程，緩解了高尿酸血癥，反而又正反饋激活了XOD基因表達上調(diào)，但相關成分待查證。

鐵觀音茶水提物對腎臟和小腸中陰離子轉(zhuǎn)運體的影響也是本研究探究的方向之一。我們查閱了與尿酸轉(zhuǎn)運陰離子轉(zhuǎn)運體相關度較高的文獻[13]，之后觀察相關基因表達是否受到鐵觀音水提物的影響。URAT1主要表達于腎小管上皮細胞刷狀緣，OAT1和OAT3大量表達于腎近段小管基底膜，而GLUT9在小腸表達[27]，本研究發(fā)現(xiàn)鐵觀音水提物能升高URAT1和OAT3的mRNA表達水平，可降低GLUT9和OAT1的mRNA表達水平。說明鐵觀音茶水提物緩解高尿酸血癥的可能與調(diào)整體內(nèi)陰離子轉(zhuǎn)運體的表達有關。先前周啟蒙等[28]在高尿酸血癥模型小鼠上證實，茶黃素能通過抑制黃嘌呤氧化酶活性、調(diào)節(jié)相關陰離子轉(zhuǎn)運體mRNA與蛋白表達而實現(xiàn)降低血清尿酸含量，且鐵觀音茶中茶黃素含量顯著高于其他類型茶葉，僅次于發(fā)酵茶[29]；本研究中發(fā)現(xiàn)的鐵觀音茶水提物能調(diào)控相關陰離子轉(zhuǎn)運體mRNA與蛋白的表達水平，從而明顯降低小鼠血清尿酸含量，可能也與鐵觀音水提物中含有茶黃素這一成分有關。但相關機制和有效成分仍需進一步探究。

茶葉因為其常見且功效諸多的特點[30-31]，經(jīng)常走進科研工作者的視野，尤其在其對高尿酸血癥的緩解作用方面。但現(xiàn)今大部分研究都圍繞探求發(fā)酵茶(如紅茶和黑茶等)的作用及機制[22,32]，而此類茶葉在國人的認購度往往不及鐵觀音等半發(fā)酵茶，故本研究對半發(fā)酵茶中的鐵觀音是否能夠緩解高尿酸血癥進行進一步研究，為居民購買茶葉提供一定的指導。現(xiàn)今，市場上治療高尿酸血癥藥物有限，且大多對肝、腎有強損害性，且患者依從性差。不如從根源抓起，為具有罹患高尿酸血癥風險的居民提供一條簡便可行的養(yǎng)生方式，且鐵觀音茶水提物作為一種茶葉發(fā)酵后的產(chǎn)物，其安全性大大提高，為已經(jīng)患病的居民提供一種輔助性的安全有效的降尿酸的方式。本研究結(jié)果也為今后相關藥物的研發(fā)提供了參考。但本研究也具有局限性，雖然解析了鐵觀音茶水提物對血清尿酸的降低作用，但沒能確定水提物中哪種成分有此功效。此外，動物模型中的基因和蛋白質(zhì)的敏感性和多樣性和人體相比也是有一定差異的，后續(xù)還要進行更多的臨床實驗，進一步驗證和探究相關機制。