丁香酚對(duì)紫紅笛鯛幼魚的麻醉效果

黃小林，楊潔，，戴超，，李濤，楊育凱，黃忠，虞為，林黑著*，孫莘溢，舒琥

(1.中國水產(chǎn)科學(xué)研究院南海水產(chǎn)研究所深圳試驗(yàn)基地，廣東 深圳518121；2.中國水產(chǎn)科學(xué)研究院南海水產(chǎn)研究所，農(nóng)業(yè)農(nóng)村部南海漁業(yè)資源開發(fā)利用重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室/國家漁業(yè)資源環(huán)境大鵬觀測實(shí)驗(yàn)站/廣東省漁業(yè)生態(tài)環(huán)境重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，廣州510300； 3.廣州大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，廣州 510006)

紫紅笛鯛 (Lutjanusargentimaculatus) 隸屬鱸形目、笛鯛科、笛鯛屬(Lutjanus)，俗稱紅友、紅油等，分布于印度洋、太平洋中部和西部[1]，為珊瑚礁、巖礁魚類，肉質(zhì)細(xì)嫩，廣鹽性，抗病力強(qiáng)，是中國華南沿海水產(chǎn)養(yǎng)殖的常見魚種[2]。

丁香酚是丁香油的主要成分，化學(xué)名為2-甲氧基-4-烯丙基苯酚，分子式為C10H12O2，常溫下為淡黃色黏稠油狀液體，揮發(fā)性強(qiáng)，有強(qiáng)烈的丁香氣味，易溶于有機(jī)溶劑而難溶于水，在口腔科治理、麻醉和消炎鎮(zhèn)痛等方面應(yīng)用廣泛[3-4]。此外，丁香酚也廣泛應(yīng)用于水產(chǎn)動(dòng)物麻醉[5-6]、畜牧業(yè)抑菌抗蟲[7-8]和食品與飼料防腐添加劑[9]等領(lǐng)域。

水產(chǎn)養(yǎng)殖生產(chǎn)過程中，為減少魚類應(yīng)激反應(yīng)，需在親魚精卵采集、活魚抽血、鮮活運(yùn)輸、試驗(yàn)取樣和標(biāo)記放流等人為操作時(shí)進(jìn)行麻醉，以保護(hù)魚類[10-11]。丁香酚類產(chǎn)品憑借其高性價(jià)比、代謝物在魚體內(nèi)能快速排出等特點(diǎn)，是目前水產(chǎn)養(yǎng)殖產(chǎn)業(yè)中使用較多的魚類麻醉劑之一[12]。丁香酚被美國FDA(Food and Drug Administration)認(rèn)定為對(duì)人體無害物質(zhì)，可用作食品添加劑[13]。在日本、澳大利亞、芬蘭和智利等國家，丁香酚作為水產(chǎn)麻醉劑得到廣泛應(yīng)用，麻醉后的水產(chǎn)品須休藥暫養(yǎng)后方可上市[12-14]。丁香酚對(duì)魚類麻醉效果的研究已有較多報(bào)道，比如錦鯉(Cyprinuscarpio)[15]、斑點(diǎn)叉尾鮰(IetalurusPunetaus)[16]、鯽(Carassiusauratus)[17]、大西洋鮭(Salmosalar)[18]、斑馬魚(Daniorerio)[19]、俄羅斯鱘(Acipensergueldenstaedti)[20]、翹嘴鲌(Culteralburnus)[21]、Flowerhorn(Amphilophuslabiatus×Amphilophustrimaculatus)[22]及神仙魚(Pterophyllumscalare)[23]和黃斑籃子魚(Siganusoramin)[6]等，目前，國內(nèi)外尚未見丁香酚對(duì)紫紅笛鯛麻醉研究的相關(guān)報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)研究了不同濃度丁香酚對(duì)紫紅笛鯛幼魚的麻醉效果，以期為紫紅笛鯛養(yǎng)殖生產(chǎn)、試驗(yàn)操作、運(yùn)輸和增殖放流等提供參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

紫紅笛鯛幼魚來源于深圳市龍岐莊實(shí)業(yè)發(fā)展有限公司土池培育的苗種，人工隨機(jī)選出活力好、體表無傷的個(gè)體進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，幼魚體質(zhì)量 (1.041±0.477) g，全長 (4.02±0.54) cm。實(shí)驗(yàn)開始前禁食1 d，實(shí)驗(yàn)在室內(nèi)透明玻璃缸中進(jìn)行，玻璃缸大小為20 cm×20 cm×50 cm。丁香酚購自常熟尚齒齒科材料有限公司，凈含量96 %，密度范圍為1.0361～1.050 g/mL。實(shí)驗(yàn)用水為沙濾自然海水，鹽度31‰，水溫 (29.5±0.9) ℃，溶解氧高于6 mg/L，pH為7.9。

1.2 方法

1.2.1 麻醉劑的配制

麻醉液現(xiàn)配現(xiàn)用，丁香酚與無水乙醇按體積比為1∶9混合作為母液，按實(shí)驗(yàn)所需濃度將母液稀釋即可。

1.2.2 麻醉和復(fù)蘇過程行為特征觀察

實(shí)驗(yàn)魚在20 mg/L丁香酚溶液中，10 min內(nèi)未能進(jìn)入4期麻醉，而在麻醉劑濃度大于50 mg/L時(shí)，實(shí)驗(yàn)魚絕大部分在1 min 30 s內(nèi)進(jìn)入4期麻醉狀態(tài)，丁香酚濃度過高時(shí)，各麻醉分期界限不明顯，而濃度過低則無法進(jìn)入深度麻醉。因此，為觀察到穩(wěn)定且分期明顯的麻醉特征，需要適當(dāng)?shù)穆樽韯舛?。根?jù)預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果，紫紅笛鯛幼魚在丁香酚濃度為30 mg/L時(shí)麻醉過程的行為特征比較明顯，適于觀察。

隨機(jī)選取6尾紫紅笛鯛幼魚置于30 mg/L的丁香酚溶液中，一半用于入麻觀察直到實(shí)驗(yàn)魚完全進(jìn)入6期麻醉，一半在魚進(jìn)入4期麻醉后，迅速撈出放入自然海水內(nèi)復(fù)蘇，重復(fù)3次，麻醉和復(fù)蘇全過程用高清攝像機(jī)拍攝，之后結(jié)合現(xiàn)場觀察和錄像對(duì)各麻醉分期的行為特征進(jìn)行描述。麻醉和復(fù)蘇的分期標(biāo)準(zhǔn)參考彭寧東等[5]和劉長琳等[10]等的研究，并結(jié)合紫紅笛鯛幼魚自身行為特征。

1.2.3 最終麻醉程度

根據(jù)預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果，設(shè)計(jì)10、15、20、30、40、50、60、70、80和90 mg/L等10個(gè)質(zhì)量濃度梯度。每個(gè)梯度實(shí)驗(yàn)用魚20尾，測定10、20和30 min后各濃度下實(shí)驗(yàn)魚能達(dá)到的最終麻醉程度。

1.2.4 不同質(zhì)量濃度的丁香酚的麻醉效果

根據(jù)實(shí)驗(yàn)1.2.3的結(jié)果，分別在30、40、50、60、70、80和90 mg/L等7個(gè)丁香酚質(zhì)量濃度下測定紫紅笛鯛幼魚的入麻時(shí)間和復(fù)蘇時(shí)間，各濃度下實(shí)驗(yàn)用魚3尾，重復(fù)3次。入麻時(shí)間為從放入丁香酚溶液開始至進(jìn)入4期麻醉所需的時(shí)間，復(fù)蘇時(shí)間為從4期麻醉撈出放入自然海水中開始至完全復(fù)蘇所需時(shí)間。

1.2.5 空氣暴露時(shí)間對(duì)復(fù)蘇的影響

將紫紅笛鯛幼魚放入30 mg/L的丁香酚溶液中，進(jìn)入4期麻醉后撈出置于海水浸濕毛巾上，并用另一塊濕毛巾覆在魚體上，漏出頭部，在空氣中分別暴露2、4、6、8、10、12、14和16 min后，各取3尾放入自然海水中復(fù)蘇，記錄復(fù)蘇時(shí)間，重復(fù)3次。

1.2.6 麻醉對(duì)呼吸頻率的影響

根據(jù)預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果，在30、40、50、60、70、80和90 mg/L等7個(gè)質(zhì)量濃度的丁香酚溶液中，分別測定20 s、40 s、1 min、1 min 30 s、2 min、3 min和5 min時(shí)紫紅笛鯛幼魚的呼吸頻率。各濃度實(shí)驗(yàn)魚3尾，重復(fù)3次，鰓蓋一張一合記為1次呼吸，通過錄像統(tǒng)計(jì)連續(xù)10 s的呼吸次數(shù)，再換算為每分鐘的呼吸次數(shù)，即為呼吸頻率。

1.2.7 低麻醉狀態(tài)下紫紅笛鯛幼魚耗氧率

采用靜水法測定耗氧率。實(shí)驗(yàn)在室內(nèi)自制透明玻璃魚缸中進(jìn)行，玻璃缸高30 cm、長15 cm、寬15 cm，用虹吸管從提前儲(chǔ)備的500 L養(yǎng)殖桶中將沙濾自然海水吸到玻璃缸中并溢出，養(yǎng)殖桶中海水溶解氧大于6 mg/L，用校準(zhǔn)后的德國WTW多參數(shù)分析儀溶氧探頭插入玻璃缸，缸口用封口膜密封，待玻璃缸中水的溶解氧降為4 mg/L時(shí)，結(jié)束實(shí)驗(yàn)并記錄時(shí)間。每個(gè)濃度用魚6尾，重復(fù)3次。耗氧率的計(jì)算公式見式(1)。

RO=(CDO0-CDO1)×Q/T×W

式(1)

式中RO為耗氧率[mg/(g·h)]；CDO0為試驗(yàn)前養(yǎng)殖桶中海水溶氧量(mg/L)；CDO1為流出呼吸室的海水溶氧量(mg/L)；Q為試驗(yàn)玻璃缸體積(L)；T為玻璃缸中溶氧降到4 mg/L所需時(shí)間(min)；W實(shí)驗(yàn)魚體重(g)。

1.2.8 數(shù)據(jù)處理

實(shí)驗(yàn)所得數(shù)據(jù)用SPSS 20.0(IBM公司，美國)和Microsoft Excel 2016軟件(微軟公司，美國)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 麻醉和復(fù)蘇的行為特征

紫紅笛鯛幼魚在30 mg/L丁香酚溶液中入麻和復(fù)蘇各分期的時(shí)間及行為特征如表1。

2.2 紫紅笛鯛幼魚在丁香酚溶液中的最終麻醉程度

丁香酚濃度小于100 mg/L時(shí)，紫紅笛鯛幼魚在10、20及30 min內(nèi)達(dá)到的最終麻醉程度如圖1、圖2及圖3所示。

在10 mg/L丁香酚溶液中，浸泡10 min和 20 min時(shí)，紫紅笛鯛幼魚的最終麻醉程度為2期(100%)，30 min時(shí)90%紫紅笛鯛幼魚進(jìn)入4期麻醉，10%進(jìn)入5期麻醉；在15 mg/L丁香酚溶液中，浸泡10 min有30%進(jìn)入2期麻醉，70%進(jìn)入3期麻醉，20 min時(shí)全部進(jìn)入3期麻醉，30 min時(shí)40%進(jìn)入5期麻醉，60%進(jìn)入6期麻醉；在20 mg/L丁香酚溶液中，浸泡10 min全部進(jìn)入3期，20 min時(shí)20%進(jìn)入3期，80%進(jìn)入4期，30 min時(shí)全部進(jìn)入6期麻醉；在30 mg/L丁香酚溶液中，浸泡10 min有90%進(jìn)入4期，10%進(jìn)入5期，20 min時(shí)50%進(jìn)入5期，50%進(jìn)入6期，30 min時(shí)全部進(jìn)入6期麻醉；在40 mg/L丁香酚溶液中，浸泡10 min有30%進(jìn)入4期，70%進(jìn)入5期，20 min已全部進(jìn)入6期麻醉；在50 mg/L丁香酚溶液中，浸泡10 min有50%進(jìn)入5期，50%進(jìn)入6期，20 min已全部進(jìn)入6期麻醉；在60 mg/L丁香酚溶液中，浸泡10 min有30%進(jìn)入5期，70%進(jìn)入6期，20 min已全部進(jìn)入6期麻醉；在70、80及90 mg/L丁香酚溶液中，浸泡10 min已全部進(jìn)入6期麻醉。

表1 紫紅笛鯛幼魚在30 mg·L-1丁香酚溶液中入麻和復(fù)蘇分期的時(shí)間及行為特征Tab.1 The time and behavioral traits of juvenile L. argentimaculatus at anesthesia and recovery stages in 30 mg·L-1 eugenol

2.3 丁香酚濃度對(duì)紫紅笛鯛幼魚入麻時(shí)間、復(fù)蘇時(shí)間和呼吸頻率的影響

在水溫(29.5±0.9) ℃時(shí)，紫紅笛鯛幼魚在不同丁香酚濃度的溶液中入麻時(shí)間、復(fù)蘇時(shí)間及麻醉時(shí)的呼吸頻率如圖4所示。在10、15和20 mg/L的丁香酚溶液中時(shí)，紫紅笛鯛幼魚無法在10 min內(nèi)進(jìn)入4期麻醉，圖中未列出。當(dāng)丁香酚質(zhì)量濃度為30～90 mg/L時(shí)，隨丁香酚質(zhì)量濃度的上升，紫紅笛鯛幼魚入麻時(shí)間逐漸下降(P<0.05)。丁香酚質(zhì)量濃度為30～90 mg/L時(shí)，進(jìn)入4期麻醉的紫紅笛鯛幼魚呼吸頻率隨丁香酚質(zhì)量濃度上升而降低(P<0.05)。丁香酚濃度為30～70 mg/L時(shí)，進(jìn)入4期麻醉的紫紅笛鯛幼魚的復(fù)蘇時(shí)間隨濃度升高之間的變化差異不顯著(P>0.05)；丁香酚濃度為80～90 mg/L時(shí)，復(fù)蘇時(shí)間隨濃度升高而顯著降低(P<0.05)。

2.4 空氣中暴露時(shí)間對(duì)紫紅笛鯛幼魚復(fù)蘇的影響

在30 mg/L的丁香酚溶液中，紫紅笛鯛幼魚在(210.6±5.0) s后均能進(jìn)入4期麻醉。麻醉后空氣中暴露時(shí)間對(duì)紫紅笛鯛幼魚復(fù)蘇的影響結(jié)果如圖5所示，暴露時(shí)間在6 min以內(nèi)時(shí)，復(fù)蘇時(shí)間隨暴露時(shí)間的增加而逐漸減少；而暴露時(shí)間大于6 min后，復(fù)蘇時(shí)間隨暴露時(shí)間的增加而顯著增加；暴露6 min時(shí)的復(fù)蘇時(shí)間最短。當(dāng)暴露時(shí)間在8 min以內(nèi)時(shí)，復(fù)蘇率為100%。超過8 min后，復(fù)蘇率逐漸下降，直到16 min時(shí)全部死亡。其中，在空氣中暴露10、12和14 min的復(fù)蘇率分別為77.8%、44.4%及11.1%。

圖中圓點(diǎn)的大小代表在該丁香酚濃度下指定時(shí)間內(nèi)進(jìn)入不同麻醉期的
魚的比例， 未標(biāo)注數(shù)值的單個(gè)圓點(diǎn)意為100%進(jìn)入該麻醉期，下同。


(=)
The size of the dots in the Fig.1 represents the proportion of juvenile
. entering different anesthesia stage within 10 mins
under the concentration of eugenol. A single dot without actual
percentage means 100% entering the anesthesia stage.The same below.

(=)

(=)

同一指標(biāo)下，標(biāo)有相同字母者表示組間無顯著性差異
(>0.05)，標(biāo)有不同字母者表示組間有顯著性差異
(<0.05)。下同。
，


For the same index, the different letters indicated significant differences
at the 0.05 probability level between groups，and the same letters
indicated non-significant differences between groups.The same below.

2.5 丁香酚麻醉對(duì)紫紅笛鯛幼魚呼吸頻率的影響

紫紅笛鯛幼魚在不同濃度丁香酚溶液中的呼吸頻率變化如圖6所示。在10、15 mg/L等低濃度丁香酚溶液中，紫紅笛鯛幼魚的呼吸頻率在20 s內(nèi)，與對(duì)照組(0 mg/L)相比略微下降，之后逐步降低，其中在10 mg/L濃度中，呼吸頻率在2 min時(shí)逐漸趨于穩(wěn)定，基本穩(wěn)定在130次/min，在15、20 mg/L濃度中，5 min內(nèi)持續(xù)下降直到70次/min左右。隨著麻醉時(shí)間的延長，呼吸頻率呈明顯下降趨勢，丁香酚的質(zhì)量濃度越高降低越快：在30～90 mg/L丁香酚溶液中，20 s內(nèi)已比對(duì)照組(0 mg/L)有明顯下降；紫紅笛鯛幼魚的呼吸頻率在60～90 mg/L等高濃度丁香酚溶液中時(shí)，均在2 min內(nèi)降低至25次/min以內(nèi)，超過5 min后均停止呼吸。

2.6 低麻狀態(tài)下對(duì)紫紅笛鯛幼魚耗氧率的影響

2.5中試驗(yàn)結(jié)果顯示，紫紅笛鯛幼魚在低麻狀態(tài)下呼吸頻率會(huì)略微下降并在一定時(shí)間后維持穩(wěn)定。紫紅笛鯛幼魚在低濃度丁香酚溶液中耗氧率如圖6所示，在10、15 mg/L丁香酚溶液中，紫紅笛鯛幼魚的耗氧率顯著下降(P< 0.05)。

3 討論

3.1 丁香酚麻醉紫紅笛鯛幼魚的有效濃度

丁香酚麻醉魚類的作用機(jī)制是魚體通過鰓絲或體表攝入后，首先抑制腦皮質(zhì)，導(dǎo)致觸覺喪失，魚體麻木，再作用于基底神經(jīng)節(jié)與小腦，最后作用于脊髓，致全身麻醉，魚體進(jìn)入深度鎮(zhèn)靜，呼吸平緩，鰓蓋張合減慢[10-12]。國內(nèi)外學(xué)者對(duì)魚類有效麻醉濃度的定義相對(duì)統(tǒng)一，均認(rèn)可Marking等研究提出的理想麻醉濃度，即能使實(shí)驗(yàn)魚在3 min內(nèi)進(jìn)入4期麻醉，且5 min內(nèi)完全復(fù)蘇，存活率100%的濃度[6，12，23-24]。大量魚類麻醉研究表明，隨著麻醉劑濃度的增加，麻醉所需時(shí)間也相應(yīng)縮短，復(fù)蘇時(shí)間則逐漸增加，如黃斑籃子魚幼魚[6]、長薄鰍幼魚(Leptobotiaelongata)[25]、許氏平鲉幼魚(Sebastesschlegeli)[26]等。而本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，隨著丁香酚質(zhì)量濃度的增加，紫紅笛鯛幼魚入麻時(shí)間相應(yīng)縮短，但在70 mg/L以內(nèi)復(fù)蘇時(shí)間卻沒有逐漸增加，而是均保持一個(gè)相對(duì)長的時(shí)間，且各濃度下復(fù)蘇時(shí)間差異不大，可能原因是紫紅笛鯛幼魚對(duì)丁香酚不甚敏感，入麻后富集的丁香酚劑量相差不大，復(fù)蘇時(shí)間相近。而當(dāng)丁香酚濃度大于70 mg/L時(shí)，復(fù)蘇時(shí)間反而降低。推斷原因，有可能由于高濃度的丁香酚能在更短時(shí)間內(nèi)作用到魚體中樞神經(jīng)系統(tǒng)，從而進(jìn)入麻醉狀態(tài)，但由于時(shí)間很短，進(jìn)入體內(nèi)的麻醉劑量相對(duì)低濃度入麻時(shí)更少，所以復(fù)蘇過程需要代謝的丁香酚也少，魚體更容易復(fù)蘇。

丁香酚對(duì)硬骨魚類的最佳麻醉質(zhì)量濃度大都集中在20～100 mg/L范圍內(nèi)[27]。在水溫(29.5±0.9) ℃時(shí)，丁香酚對(duì)體質(zhì)量為(1.041±0.477) g的紫紅笛鯛幼魚的有效濃度為30 mg/L。以往研究表明，丁香酚在不同水溫下麻醉不同種類和規(guī)格實(shí)驗(yàn)魚的有效濃度存在較大差異，本研究中得出的丁香酚麻醉紫紅笛鯛幼魚的有效濃度(30 mg/L)高于斑馬魚20 mg/L[19]、錦鯉15～20 mg/L[15]和神仙魚5.5 mg/L[28]等，低于大西洋鮭50 mg/L[18]、羅非魚(Tilapiamossambica)45 mg/L[29]和翹嘴鲌40～60 mg/L[21]等，總體上處于中等水平。

綜合分析丁香酚濃度在30～90 mg/L時(shí)紫紅笛鯛幼魚的入麻時(shí)間、復(fù)蘇時(shí)間及麻醉時(shí)的呼吸頻率指標(biāo)，發(fā)現(xiàn)30 mg/L丁香酚濃度為能達(dá)到理想麻醉效果的最低濃度，適合在短時(shí)間實(shí)驗(yàn)操作中推廣使用。同時(shí)，隨著丁香酚濃度的增加，紫紅笛鯛幼魚的入麻時(shí)間顯著縮短，在實(shí)際生產(chǎn)中，為追求快速麻醉，可適當(dāng)增加丁香酚濃度，但考慮到丁香酚濃度大于70 mg/L后，丁香酚能迅速富集到中樞神經(jīng)系統(tǒng)造成麻醉效果，容易對(duì)魚體造成傷害，建議不宜超過70 mg/L。

3.2 空氣中暴露時(shí)間對(duì)紫紅笛鯛幼魚復(fù)蘇的影響

麻醉是降低魚的應(yīng)激反應(yīng)有效且常用的方法，常被用于親魚精卵采集、活魚抽血、鮮活運(yùn)輸、試驗(yàn)取樣和標(biāo)記放流等，而在這些操作中常需將魚撈出水面短時(shí)間置于空氣中，因此，有必要研究空氣暴露時(shí)間對(duì)麻醉魚體復(fù)蘇的影響。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，暴露時(shí)間小于8 min時(shí)，復(fù)蘇時(shí)間隨暴露時(shí)間的增加而下降；而當(dāng)暴露時(shí)間大于8 min時(shí)，復(fù)蘇時(shí)間隨暴露時(shí)間的增加而增加(P<0.05)；暴露6 min時(shí)復(fù)蘇時(shí)間最短。在丁香酚深度麻醉鯽[17]和翹嘴鲌[21]的研究中，復(fù)蘇時(shí)間隨空氣中暴露時(shí)間的增加而減少，而在大瀧六線魚(Hexagrammosotakii)[30]的麻醉研究中，復(fù)蘇時(shí)間隨暴露時(shí)間的增加而延長。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果與丁香酚麻醉黃斑籃子魚[6]和MS-222深度麻醉赤眼鱒(Squaliobarbuscurriculus)[5]幼魚的研究結(jié)果相似，作者認(rèn)為是當(dāng)紫紅笛鯛幼魚撈出水面暴露在空中后，魚體不再攝入丁香酚，相當(dāng)于已進(jìn)入復(fù)蘇期，魚體表和鰓部有水，能恢復(fù)部分呼吸，隨著暴露時(shí)間的延長，紫紅笛鯛幼魚逐漸復(fù)蘇，耗氧量也逐漸增加，而體表和鰓部的水中溶氧逐漸被消耗，實(shí)驗(yàn)魚出現(xiàn)缺氧休克[6]。因此，暴露后期復(fù)蘇時(shí)間逐漸增加，死亡率升高。根據(jù)本實(shí)驗(yàn)結(jié)果，入麻后空氣中暴露6 min以內(nèi)復(fù)蘇率為100%。因此，丁香酚麻醉的紫紅笛鯛幼魚離水操作不宜超過6 min。

3.3 丁香酚對(duì)紫紅笛鯛幼魚呼吸頻率的影響

大量研究結(jié)果表明，在麻醉過程中，隨著麻醉程度的加深，魚體的呼吸頻率會(huì)逐漸減低，直至深度麻醉后呼吸停止，可能原因是魚體被麻醉后體內(nèi)代謝減緩，耗氧率低，鰓腔的水交換量下降所致[5-6，25-26]。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，在丁香酚溶液中浸泡5 min，無論丁香酚濃度高低，紫紅笛鯛幼魚的呼吸頻率始終低于對(duì)照組。各濃度下呼吸頻率在40 s內(nèi)均迅速下降，并隨著丁香酚的濃度升高而加速下降。在低濃度丁香酚溶液中(10 mg/L)，紫紅笛鯛幼魚逐漸進(jìn)入鎮(zhèn)靜期，呼吸頻率緩慢降低后保持相對(duì)穩(wěn)定。在中等濃度丁香酚溶液中(15、20 mg/L)，紫紅笛鯛幼魚逐漸進(jìn)入麻醉期，呼吸頻率緩慢降低后也能保持相對(duì)穩(wěn)定。當(dāng)丁香酚麻醉濃度較高時(shí)(>60 mg/L)，紫紅笛鯛幼魚在5 min內(nèi)開始出現(xiàn)呼吸停止現(xiàn)象，且濃度越高，出現(xiàn)呼吸停止的時(shí)間越短。這與對(duì)黃斑籃子魚[6]的麻醉研究類似，即當(dāng)丁香酚濃度高時(shí)，丁香酚在短時(shí)間內(nèi)富集到中樞神經(jīng)系統(tǒng)并產(chǎn)生抑制作用，進(jìn)入鎮(zhèn)靜期，呼吸頻率下降。在本實(shí)驗(yàn)中，紫紅笛鯛幼魚在低濃度丁香酚溶液(10 mg/L)中保持在鎮(zhèn)靜期而不會(huì)進(jìn)入更深的麻醉狀態(tài)，可能是由于魚體對(duì)丁香酚的代謝和吸入達(dá)到一個(gè)相對(duì)平衡的狀態(tài)。

3.4 低麻狀態(tài)下對(duì)紫紅笛鯛幼魚耗氧率的影響

在丁香酚質(zhì)量濃度為10 mg/L時(shí)，紫紅笛鯛幼魚在20～30 min內(nèi)處于2期麻醉(深度鎮(zhèn)靜期)，這有利于紫紅笛鯛幼魚的運(yùn)輸，與羅非魚[29]、錦鯉[31]的運(yùn)輸實(shí)驗(yàn)研究結(jié)論類似，說明在麻醉鎮(zhèn)靜期魚體代謝慢，耗氧率低，適宜運(yùn)輸。結(jié)合紫紅笛鯛幼魚具有入麻慢且入麻后復(fù)蘇時(shí)間長的特點(diǎn)，即使低濃度但浸泡時(shí)間長也會(huì)進(jìn)入更深的麻醉狀態(tài)，因此，建議對(duì)紫紅笛鯛幼魚長時(shí)間運(yùn)輸丁香酚濃度應(yīng)小于10 mg/L。

紫紅笛鯛幼魚對(duì)丁香酚敏感程度較低，入麻過程持續(xù)較長，而一旦入麻則需要較長時(shí)間復(fù)蘇。有效麻醉濃度為30 mg/L，生產(chǎn)上實(shí)際離水操作宜控制在6 min以內(nèi)且時(shí)刻保持魚體濕潤，長時(shí)間操作或運(yùn)輸適宜濃度為10 mg/L以內(nèi)，建議生產(chǎn)上短期操作使用濃度為30 mg/L，若追求更快麻醉，也不宜超過70 mg/L，迅速操作且時(shí)刻關(guān)注魚的反應(yīng)。