不同產(chǎn)地槐米中蘆丁的提取及含量測(cè)定比較

陳 璐，耿柏林，郭祿晶，蘇星超，強(qiáng)力源,鄭立穎，李 欠*

（1.甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)農(nóng)學(xué)院/甘肅省中藥材規(guī)范化生產(chǎn)技術(shù)創(chuàng)新重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，甘肅蘭州730070；2.甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)水利水電工程學(xué)院，甘肅蘭州730070；3.甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)植物保護(hù)學(xué)院，甘肅蘭州730070；4.甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)管理學(xué)院，甘肅蘭州730070）

槐米為豆科植物槐（Sophora japonicaL.）的干燥花蕾。其性苦，微寒，具有涼血止血、清肝瀉火的功效，同時(shí)血痢、崩漏、痔瘡出血、吐血及頭暈等癥狀均可用槐米入藥進(jìn)行醫(yī)治[1]?，F(xiàn)代藥理研究表明：槐米具有保護(hù)心腦血管、改善糖尿病、抗菌、抗氧化和抑制黑色素生成等作用[2，3]。2015 年版中國(guó)藥典以高效液相色譜法測(cè)定蘆丁的含量及其他常規(guī)鑒別項(xiàng)目作為其質(zhì)量控制的指標(biāo)[1]，蘆丁具有抗炎、抗過(guò)敏、抗心肌缺氧及缺血、抗心律失常、降低血清膽固醇、抑制血小板集聚、抗?jié)?、抗腫瘤、解痙、鎮(zhèn)咳、抗病毒和增強(qiáng)免疫力等功能，是預(yù)防和治療糖尿病、心絞痛、慢性心功能不全、高血脂和預(yù)防動(dòng)脈硬化心肌梗死、腦血栓等疾病的天然綠色藥物[4]。醫(yī)藥工業(yè)中也常以槐米為主要原料提取蘆丁[5-9]。除藥用價(jià)值以外，槐米也是一種常用的工業(yè)染料，其有效成分有很強(qiáng)的吸收紫外光能力，現(xiàn)在經(jīng)常被添加到化妝品中用作防曬護(hù)膚品；如果與一些特殊中藥或者酶制劑添加在一起使用，還可以用作保健品和食品，同時(shí)開(kāi)發(fā)出了槐米花茶，預(yù)計(jì)在國(guó)際上會(huì)有廣闊的市場(chǎng)前景[10-14]，具有很高的開(kāi)發(fā)價(jià)值[15，16]。近代研究表明：槐米中蘆丁含量可高達(dá)23.5%，槐米價(jià)格相對(duì)便宜，產(chǎn)量可觀，因此對(duì)槐米中有效成分的提取及含量的測(cè)定具有很高應(yīng)用價(jià)值。

本實(shí)驗(yàn)通過(guò)采用堿溶酸沉法和超聲波輔助堿溶酸沉法，提取不同產(chǎn)地槐米中的蘆丁，采用紫外分光光度法測(cè)定其含量，為槐米藥材質(zhì)量控制與評(píng)價(jià)提供理論科學(xué)依據(jù)。

1 材料

1.1 儀器及用具

HH-S 數(shù)顯恒溫水浴鍋、紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)（T6 新世紀(jì)）、循環(huán)水式多用真空泵（SHB-Ⅲ）、電子萬(wàn)用爐、電磁爐、超聲波清洗儀（PS-30A）、電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱（GZX-GF101-4BS-Ⅱ）、電子天平、抽濾瓶、布氏漏斗、濾紙、玻璃棒、燒杯、量筒、容量瓶、錐形瓶、鐵架臺(tái)、漏斗、脫脂棉、溫度計(jì)、洗耳球、研缽。

1.2 試劑及材料

10%氫氧化鈉溶液、飽和石灰水、0.4%硼砂水溶液、5%硝酸鈉溶液、10%硝酸鋁溶液、蒸餾水、濃鹽酸、95%蘆丁水合物（薩恩化學(xué)技術(shù)（上海）有限公司）。

1.3 藥材

山西槐米、河北槐米、河南槐米、甘肅槐米分別購(gòu)自全炬藥材行、亳州市京皖藥材廠、文擇軒中藥材、黃河藥材市場(chǎng)。

2 實(shí)驗(yàn)方案

2.1 堿溶酸沉法

準(zhǔn)確稱(chēng)取槐米20 g，置于研缽中研碎，加入0.4%硼砂溶液120 ml，飽和石灰水80 ml，調(diào)節(jié)pH 8～9,置于電熱爐上保持微沸狀態(tài)30 min，過(guò)濾，重復(fù)2 次，合并濾液，并濃縮至一定體積。將濃縮液置于70℃水浴中，加入濃鹽酸調(diào)pH 為2～3，放置3～5 d，待提取液底部產(chǎn)生黃色或棕黃色沉淀，抽濾，得蘆丁粗品。

2.2 超聲波輔助堿溶酸沉法

準(zhǔn)確稱(chēng)取槐米20 g，置于研缽中研碎，加入0.4%硼砂溶液120 ml，飽和石灰80 ml，調(diào)節(jié)pH 8～9，超聲30 min，過(guò)濾，重復(fù)2 次，合并濾液，并濃縮至一定體積。將濃縮液置于70℃水浴中，加入濃鹽酸調(diào)pH 為2～3，放置3～5 d，待提取液底部產(chǎn)生黃色或棕黃色沉淀，抽濾，得蘆丁粗品。

3 結(jié)果與分析

3.1 提取工藝結(jié)果

傳統(tǒng)堿溶酸沉法和超聲波輔助堿溶酸沉法提取工藝結(jié)果如表1 所示。

3.2 繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線

根據(jù)2015 版《中國(guó)藥典》，繪制蘆丁濃度-吸光度標(biāo)準(zhǔn)曲線。由于甲醇毒性大，本實(shí)驗(yàn)用乙醇替代甲醇。

精密稱(chēng)取蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品200 mg，置于100 ml 容量瓶中，加乙醇定容至刻度，搖勻。精密吸取10 ml 至100 ml 容量瓶中加水至刻度，搖勻備用。

精密量取對(duì)照品溶液1 ml、2 ml、3 ml、4 ml、5 ml、6 ml，分別置25 ml 容量瓶中，各加水至6 ml、5%亞硝酸鈉溶液1 ml，混勻放置6 min，加10%硝酸鋁溶液1 ml，搖勻，放置6 min，加氫氧化鈉溶液10 ml，再加水至刻度，搖勻，放置15 min，以相應(yīng)的試劑為空白，按照紫外分光光度法（通則0401），在500 nm 波長(zhǎng)處測(cè)吸光度，以吸光度為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線（見(jiàn)圖1）。

表1 傳統(tǒng)堿溶酸沉法和超聲波輔助堿溶酸沉法提取工藝結(jié)果

3.3 測(cè)定提取率

取干燥蘆丁粗品約0.25 g，精密稱(chēng)定，加無(wú)水乙醇定容至25 ml 容量瓶，搖勻備用。精密量取3 ml 置25 ml 容量瓶中，按照標(biāo)準(zhǔn)曲線制備項(xiàng)下的方法，制備供試品，在500 nm 的波長(zhǎng)處比色測(cè)定吸光度，標(biāo)準(zhǔn)曲線法測(cè)定供試品溶液中蘆丁的濃度，通過(guò)計(jì)算得槐米中蘆丁的提取率，結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 傳統(tǒng)堿溶酸沉法和超聲波輔助堿溶酸沉法提取率

4 結(jié)果與討論

堿溶酸沉法提取槐米中蘆丁的含量由高到低依次是甘肅、山西、河南、河北，超聲波輔助堿溶酸沉法提取槐米中蘆丁的含量由高到低依次是山西、甘肅、河北、河南。同時(shí)，甘肅槐米的提取率最高，山西槐米次之，河南、河北槐米相差不大?？傮w而言，超聲波輔助提取槐米中的蘆丁更加高效。

在提取槐米中蘆丁的過(guò)程中，使用傳統(tǒng)的堿溶酸沉法第一遍提取的時(shí)候試液蒸發(fā)過(guò)多，濾液較少或幾乎沒(méi)有，第二遍提取液較第一遍多，而超聲波輔助提取的過(guò)程中，試液幾乎不蒸發(fā)，提取液比傳統(tǒng)堿溶酸沉法幾乎多1 倍，除了甘肅產(chǎn)地外，其他3 個(gè)產(chǎn)地的超聲波輔助提取法的蘆丁粗品重和蘆丁提取率都高于傳統(tǒng)的堿溶酸沉法，可以間接說(shuō)明使用超聲波輔助提取槐米中的蘆丁更加高效，而甘肅產(chǎn)地的提取率傳統(tǒng)法高于超聲波輔助提取法，可能是由于外界的因素或者其他因素導(dǎo)致。

本次實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目不同產(chǎn)地的槐米中蘆丁的含量差別較大，可能是由于不同產(chǎn)地的槐米品質(zhì)差異或采收時(shí)間不同導(dǎo)致，采收時(shí)間對(duì)槐米中蘆丁的含量有很大影響。